COLORATION DES BACTÉRIES. — MÉTHODE DE WEIGERT

Il est facile d'obtenir une double coloration des coupes en donnant aux cellules et aux fibras «na couleur rouge» tandis quo les bactéries restent vMettes, ou tuyersement. On emploie à cet effet plusieurs procédés :

Après la coloration dans le bain violet et le séjour pondant une minute dans la solution iodée, on lave dans Teau ou l'alcool faible, on place les préparations pendant quelques minutes dans la safranine, le picrocarminate, l'éosine ou la coccinine, puis on les éclaircit dans Talcool pur et l'essence de girofle, et on monte dans le baume. Nous avons constaté les bons effet de la safranine qui colore à peine les bacilles et qui donne au tissu une couleur rouge très brillante.

La coloration au picro-carminale d'ammoniaque est aussi excellente en ce sens, qu'on peut obtenir une élection très nette du carmin sur les noyaux des cellules, tandis que los fibres sont plus pâles ainsi que le protoplasma, et que les globules du sang restent jaune verdàtre.

5* La méthode de Wkigert qui s'applique à beaucoup de bactéries est fondée sur ce que dans les préparations colorées avec une solution aqueuse concentrée de violet 6 B, puis traitées par le procédé de Gram, décolorées ensuite par l'huile d'aniline, les bactéries restent seules colorées. L'huile d'aniline possède la propriété de se mêler avec 5 pour 100 d'eau, en sorte qu'elle déshydrate les pièces sans qu'il soit nécessaire dVmployer l'alcool.

Voici les détails de cette méthode :

On prépare une solution aqueuse* saturée à chaud, de violet de méthyle 6 B ou de violet de gentiane. On peut ajouter à 70 grammes de la solution ainsi obtenue 3 grammes d'aniline et 10 grammes d'alcool absolu.

Les coupes obtenues au microtome sont traitées par cette solution pondant 5 à 10 minutes sur le porte-objet lui-môme. Si Ton veut colorer un mycélium, on les met dans un godet pondant plus longtemps. La coupe étant colorée, on la lave à Teau toujours sur le porte-objet, puis on ajoute la solution d'iode ioduré qu'on laisse agir pondant 2 à 3 minutes. On lave de nouveau la coupe ; on applique sur elle une feuille de papier Joseph pour enlever l'eau, puis on y met quelques gouttes d'aniline pure. Il est nécessaire de faire ces opérations sur la lame porte-objet pour éviter les plissements de la coupe. On fait exécuter des mouvements d'ioclinaison à la lame pour la bien laver à Thuile d'aniline. On enlève les premières gouttes qui ont extrait la couleur violette avec du papier Joseph ; on y verse de nouveau de Thuile d*aniline, et ainsi plusieurs fois de suite jusqu'à ce que la coupe soit devenue presque transparente. L'huile a enlevé l'eau d'imbibition sans qu'il ait été nécessaire de faire intervenir l'alcool. On verse aloi's quelques gouttes de xylol pour enlever l'excès d'huile d'aniline, puis on monte dans le baume.

Cette méthode réussit pour toutes les bactéries qui sont mises en évidence par la méthode de Gram, et de plus elle montre aussi les bacilles de la lèpre et de la tuberculose. Celles de la pneumonie sont très visibles. Los bâtonnets de la fièvre typhoïde ne se voient pas.

La fibrine filamenteuse est aussi généralement colorée en beau bleu par cette méthode ; il vaut mieux toutefois, pour voir la fibrine, employer

de i'huile d'aniline mélangée avec du xylo] pour extraire la couleur.

Pour obtenir une double coloration des cellules en rouge et des bactéries en violet, il faut commencer par traiter la coupe avec un carmin, le picro-carmin de Ranvier par exemple, pendant quelques minutes.

Cette méthode est de beaucoup supérieure à celle de Gram.

Il est inutile de rappeler que, si Ton veut obtenir des résultats parfaitement sûrs par la méthode de Weigert, comme par la suivante, on ne doit se servir que de réactifs et de couleurs de premier choix, et toujours flraU chement préparés,

6<* KAhnb, dans ses nouvelles méthode de coloration S remplace l'alcool absolu par les couleurs d'aniline acides, telles que la fluorescéine, Vaurantia, Véosine, Valcali-blau, etc. ^; parfois même, quand les coupes sont fortement colorées, il a recours aux acides étendus pour la différenciation.

Quant à la coloration elle-même des bactéries, après avoir essayé la plupart des couleurs d'aniline en usage dans les laboratoires, il arrive à cette conclusion, qu'on peut colorer toutes les bactéries actuellement connues par deux couleurs, le violet de méthyle 6 B (hexamethylviolet), et le bleu de méthylène. Certaines bactéries ne se colorent bien que par le violet, tels les bacilles de la tuberculose, de la lèpre ; d'autres sont surtout reconnaissables par le bleu de méthylène, comme les bacilles du choléra et du typhus ; enfin, il est un troisième groupe de micro-organismes qui se laissent colorer également bien par le violet et le bleu (bacilles du charbon, de la suppuration, etc.).

Pour mieux assurer l'imprégnation des bactéries par ces deux couleurs, Kiihne prépare des bains colorants au moyen d'une solution à i pour 100 de carbonate ammonique, à laquelle il ajoute la solution aqueuse (et non alcoolique) concentrée de la couleur 3. Il préfère le'carbonate d'ammoniaque à la solution potassique de LôfUer, parce que celle-ci se modifie très vite au contact de l'anhydride carbonique de l'air.

S'agit-il maintenant de mettre en évidence les micro-organismes contenus dans une préparation ?

Kûhne commence par une première préparation qui a pour but de s'assurer rapidement si, oui ou non, la coupe contient des bactéries, sans autre préoccupation. Ce sont les préparations par dessiccation de Kûhne {Trocken-prûparate) :

i° Les coupes sont plongées, de 5 à 15 minutes, dans la solution ammoniacale à laquelle on ajoute la solution aqueuse concentrée de bleu de

1 . La plupart des i^enseignements qui suivent sont tirés d'un article de Malvoz, inséré dans les no» 6, 7 et 8 du Journal des Connaissances médicales, article dans lequel il a analysé les méthodes de Weigert et de Kûhne.

2. On sait que d'après Ehrlich, les couleurs d'aniline peuvent être rangées en deux classes : les couleurs basiques^ qui colorent surtout les noyaux et les bactéries (fuchsine, violet de méthyle, bleu de méthylène, vésuvine, safranine, etc.), et les couleurs acides, dont l'action se porte surtout sur le protoplasme cellulaire (fluorescéine, éosine, aurantia, tropéoline, alizaiine, etc.).

3. Les couleurs dont se sert Kuehne proviennent de la fabrique badoise d'aniline de Ludwigshafen.