CULTURE ET ISOLEMENT DES BACTÉRIES SUR PLAQUES NUTRITIVES

le sérum ^ Nocard ajoute au sérum du sang de cheval, une solution concentrée de peptone (1 p. 100), de sucre de canne (0,'2o p. 100) et de sel marin {0,23 p. 100).

Si Ton n'a pas de lame de verre stérilisée, on en passe une sur une flamme d'alcool de façon à ce que ses deux faces soient bien chauffées.

La lame sera placée dans l'appareil représenté ci-dessus : à sa base cet appareil est formé d'une table à trépied t (Ûg. 19) sur laquelle on met une cuve remplie de glace recouverte elle-même d'une grande lame de verre a. On rend cette lame tout à fait horizontale à l'aide des vis v des pieds de la table inférieure, et on apprécie son horizontalité par un niveau d'eau n.

Lorsqu'on s'est assuré que la grande plaque de verre est bien horizontale, on y place la lame de verre qu'on couvre ensuite de gélatine liquide p. On prend soin que cette couche de gélatine n'atteigne pas le bord de la lame. La couche de gélatine aura une épaisseur de 2 à 3 millimètres. On couvre cette lame avec une cloche et on attend la gélatinisation.

Après cette première opération, on met la plaque dans une chambre humide.

Cette chambre humide est composée : 1° d'un rristallisoir (v. fig. 20) de 20 centimètres de diamètre sur une hauteur de 5 centimètres, au fond duquel on dépose une feuille de papier à filtrer imbibé d'eau distillée stérilisée; 2* d'une cloche qui entoure et recouvre le cristallisoir v. Dans le cristallisoir on place de petits bancs de verre ou mieux une petite échelle double sur lesquels on dispose des lames p recouvertes de gélatine.

Dans le même appareil on peut mettre aussi des pommes de terre, de petits cristallisoirs contenant de la gélatine ou du sérum solidifié, le tout bien stérilisé.

Nous avons déjà parlé des appareils et des expériences de Koch et Hesse pour étudier des bactéries de l'air et du sol. On peut s'en servir aussi pour la recherche des bactéries pathogènes.

Cette méthode de culture sur des plaques est avantageuse dans certains cas. Mais le plus souvent il est nécessaire de diluer le liquide (|u'on ensemence, parce que la gélatine contient tant de germes qu'ils se touchent et se confondent sur la plaque, de telle sorte qu'on ne peut pas les séparer les uns des autres.

Aussi avons-nous employé, dans nos recherches sur le choléra, la méthode suivante : nous avons mis d'abord la petite particule k examiner dans 10 grammes d'eau stérilisée. Après avoir agité cette eau, nous en avons pris une particule au bout d'une aiguille de platine et nous l'avons

i. On prend pour cela un demi-kilog., de viande hachée à laquelle on ajoute un litre d'eau distillée. On remue et on laisse reposer pendant vingt-quatre heures sur la glace ; on exprime et on ajoute de Teau distillée jusqu'à ce qu'on ait un litre de liquide. On ajoute alors à cette infusion de viande 10 gr. de peptone, 10 gr. de sucre de raisin, 5 gr. de chlorure de sodium; on fait bouillir; on neutralise avec du carbonate de soude; on cuit de nouveau jusqu'à précipitation complète de l'albumine, puis on filtre. Ce bouillon est stérilisé à la marmite de Papin et ajouté, après refroidissement, au sérum. On procède ensuite à la stérilisation discontinue de ce dernier et à la gélatinisation.

ensemencée dans un tube plein de gélatine liquide, qui a été ensuite versée sur une lame de la façon décrite ci-dessus.

Koch, pour bien isoler les bactéries, emploie une méthode encore plus avantageuse. Il prend ordinairement trois tubes de gélatine liquéfiée. Il les distingue avec des étiquettes portant les chiffres i,2et 3. Il ensemence le tube 1 avec une particule de la substance à examiner. Il agite le tube, après quoi il ensemence le tube 2 avec un fil de platine courbé en anse

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FiG. 20. ^ Chambre hamide composée d'une cuve recouverte d'une cloche et renfermant une lame de gélatine semée de diverses cultures.

p, plaque de vorre ; g, gélatine sur laqueUe il s'est développé des bactéries do l'air, qui liquéfient la gélatine comme en m ou qui ne se liquéflent pas, m', r.

qu'il a plongé dans le tube 0. Il ensemence le tube 3 avec cinq piqûres du tube 2.

Le nombre des ensemencements dépendra de la richesse en germes de la substance à étudier. Cette méthode est excellente en ce que sur les trois tubes il y en aura certainement un qui donnera de bons résultats *.

On verse ces trois tubes, dont la gélatine est restée liquide, sur trois plaques de verre qui sont marquées des numéros 1, 2 et 3 et qui sontpla-

1. Dans certains cas où le nombre des microbes pathogènes est très taible, comme par exemple dans les selles du choléra ou de la fièvre typhoïde, on emploie d'aua:«8 méthodes plus sensibles (voyez Choléra).