ISOLEMENT DES BACTÉRIES PAR LA CULTURE

étuve d'Arsonval. Par cette méthode on peut réussir à isoler les microbes qui se développent lentement et difficilement et qui jusque-là étaient mêlés à d'autres espèces (Babes).

Dans ces divers appareils, surtout lorsqu'on a agi sur des substances très diluées, il so développe des colonies isolées d'un aspect caractéristique.

Kio. 23. — Flacon d'Erleomeyer contenant de la purée de pommes de terra ensemencée

avec la morve.

c, culture dei bacilles de la morve.

On étudie d'abord ces colonies en plaçant la plaque sur laquelle elles se sont développées sur la platine d'un microscope qui doit être assez grande pour les recevoir. On examine au microscope à un grossissement de 100 diamètres en plaçant sous le système Abbé un diaphragme très étroit. On peut examiner aussi ces colonies à un plus fort grossissement, surtout si elles sont à la surface de la gélatine. On les recouvre alors d'une lamelle

et on étudie ainsi la forme et le groupement des microbes. Mais pour mieux les examiner, on les fixe sous le microscope, on touche avec un fil de platine stérilisé la colonie qu'on veut examiner, en contrôlant Toperation sous le microscope. Ce fil de platine sera agité dans une gouttelette d'eau sur une lamelle. On laisse sécher à moitié, on colore ce liquide, puis on examine avec un fort grossissement la préparation ainsi obtenue.

Par le môme procédé, on fait avec l'aiguille trempée dans une colonie une culture sur une chambre humide.

Enfin, on ensemence, avec un fil de platine trempé dans une colonie, des tubes contenant de la gélatine, de Tagar-agar ou du sérum de façon à ce que le fond des tubes soit tourné en haut pour éviter l'entrée des microbes de l'air ambiant. Sur les tubes où l'agar-agar a été gélatinisé obliquement pour avoir une plus grande surface de culture, on opère non seulement par piqûre, mais aussi par une strie faite avec la pointe de l'aiguille. Avec le sérum de bœuf, il est bon de frotter, sur la surface du sérum, l'aiguille imprégnée de la substance à examiner.

Il est nécessaire de pratiquer ces inoculations à la fois sur plusieurs tubes.

Gomme ces cultures ont une vie limitée et variable, il faut toujours avoir un matériel de tubes contenant les substances gélatinisées pour les . inoculer succossiveniont, si l'on veut en conserver de bons échantillons.

Pour isoler les bactéries contenues dans un liquide ou dans les organes altérés recueillis dans une autopsie, il faut avoir à sa disposition, pendant la nécropsie, deux séries de tubes, les uns contenant de l'agar-agar, les autres du sérum de bœuf, additionnés ou non de glycérine, les substances nutritives étant solidifiées et très inclinées dans les tubes.

Avec un fil de platine droit au en anse on prend une parcelle de la substance à examiner. On fait de gauche à droite, dans chaque tube d*agar-agar, de 3 à 5 longues stries parallèles dans chaque tube. On a soin de^faire pénétrer le fil dans la jirofondeur de la substance nutritive. Avec le môme lil,san8 reprendre de substance à inoculer, on procède de la même façon dans un second et un troisième tube; on peut même ensemencer cinq tubes.

Ou inocule de la môme façon de 3 à o tubes de sérum de bœuf avec l'aiguille de platine contenant un nouvelle parcelle du liquide ou de l'organe à examiner.

En môme temps on peut inoculer des plaques.

On place ces tubes dans les conditions variées déjà connues, à la température de 37«, dans l'air ou dans le vide. Les colonies ensemencées se développent à la surface ou à la profondeur. Dans les premiers tubes ensemencés les stries montrent des colonies souvent confluentes, mais on observe des colonies tout à fait isolées dans le 3* ou le 4* ou le 5« tube. Ces colonies isolées seront transportées sur de nouveaux tubes où on les cultivera pour les étudier. On peut ainsi, sans retard, procéder à l'isolement des bactéries (Babes*).