CULTURE DES BACTÉRIES ANAÉROBIES

Pendant que Tacide carbonique passait dans le vase, on le maintenait à la température de 30« environ afin que le gaz pût agir sur la substance nutritive liquide à cette température. Pour y arriver encore plus sûrement on peut faire partir Tune des effîlures près du fond du vase contenant la gélatine liquéOée de façon à ce que le gaz passe au milieu môme de cette substance. Pour empêcher Tébullition et Teiitrée de la substance nutritive dans le tube aspirateur, on chauffe un peu la partie du tube au-dessus de la substance nutritive.

' Liborius a obsen é que Tacide carbonique n'est pas tout à fait indifférent pour les bactéries anaérobies et il emploie de préférence l'hydrogène qui est tout aussi facile à manier.

Dans ce but on fabrique de Tliydrogène en plaçant du zinc dans un des vases de l'appareil de Saint-Claire Deville, de Tacide chlorhydrique dans l'autre. La petite quantité d'hydrogène sulfuré qui peut se dégager est retenue dans un ballon contenant une solution d'un sel de plomb, tandis que les mélanges d'oxygène sont arrêtés par un flacon contenant de l'acide pyrogallique. Lliydrogène doit passer par ces deux llacons avant d'arriver au tube à double efûlure contenant la substance nutritive. Dans le maniement de l'hydrogène il faut se garder des explosions qui se produisent parfois si ce gaz est mêlé avec l'oxygène.

Pour arriver à isoler des bactéries anaérobies dans des substances qui contiennent un mélange de plusieurs variétés de bactéries, il est nécessaire de les ensemencer sur des plaques. C'est pourquoi Liborius a tenté de faire arriver des gaz irrespirables autour de plaques couvertes d'une substance nutritive. Son appareil est des plus simples. Il met les lames à examiner sous une cloche en verre qui repose sur un anneau de caoutchouc. La cloche est percée de deux ouvertures dont Tune laisse arriver l'hydrogène et l'autre laisse passer d'abord l'air qu'elle contient, puis l'hydrogène. Dans ces cloches on peut aussi cultiver les bactéries sous une plus haute pression en appliquant un manomètre à l'une de leurs ouvertures; mais il vaut mieux alors se servir d'une cloche en métal plutôt que d'une cloche en verre qui pourrait éclater. Au lieu de gélatine on peut se servir d'agaragar qu'on verse dans des chambres humides, cris talli soirs plats fermés par un anneau de caoutchouc et pourvus de deux effilures opposées par où passent les gaz irrespirables. On met le tout dans des étuvcs à la température de 37*». Par ces méthodes, les anaérobies typiques ne se développent pas à la surface de la plaque, mais seulement dans la profondeur de la couche de subste^ ze nutritive gélatiniûée. Aussi est-il nécessaire de faire des plaques sur lesquelles la gélatine est très épaisse et d'ensemencer les bactéries dans la profondeur. Pour absorber les traces d'oxygène qui restent dans les cloches dont il se sert, Liborius y cultive des bactéries avides d'air.

On a modifié ces méthodes. Ainsi GrQber propose la suivante qui est très simple mais en même temps insnfOsante. On se sert d'un tube dont la partie supérieure est étirée. On y verse de la gélatine ensemencée des bactéries à examiner. On bouche ensuite l'extrémité supérieure du tube à la ouate, et on le recouvre d'un bouchon de caoutchouc traversé par un petit

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tube de verre. Ce dernier communique avec une pompe. On fait le vide dans le tube en le maintenant dans un bain à 35**. On chauffe doucement la partie supérieure du tube avec une lampe à alcool afin d*empêcher que la ouate se mouille par les bulles qui éclatent à la surface de la gélatine liquide. L'extrémité supérieure du tube est ensuite fermée à la lampe. Pendant que la gélatine se solidifie, on l'étalé contre la paroi interne du tube en imprimant & ce dernier un mouvement de rotation horizontale. La gélatine tapissera ainsi la paroi du tube, ce qui permettra de bien observer les colonies qui s'y développeront.

Nous avons obtenu des résultats plus sûrs que par la méthode de Grûber» en agissant de la même façon, mais en nous servant de tubes à double effîlure, où Ton fait passer un courant d'hydrogène qui chasse Tair. Ce procédé remplace avantageusement aussi la culture des anaérobies sur plaques.

Pour s'assurer si l'oxygène est bien réellement chassé dans ces appareils, on peut se servir de différents réactifs. On met dans les vases du cyanure de fer, ou une solution d'acide pyrogallique dans une solution de potasse, ou bien on ajoute une solution d'indigo à la substance nutritive, additionnée de dextrine et de quelques gouttes de potasse & 10 p. 100.

Le mélange bleu devient incolore par Tébullition. Si on l'expose à Tair il reprend sa couleur bleue. Si l'on empêche la pénétration de l'oxygène par les procédés ci-dessus, le mélange reste blanchâtre. L'ébullition, surtout dans le vide, la substitution de l'acide carbonique et de l'hydrogène â l'air s'opposent à la coloration bleue du réactif. Bien que ce dernier ne soit pas assez sensible pour servir à l'étude chimique de la fermentation, il suffit pour contrôler les recherches bactériologiques.

Degré d'affinité des bactérien pour l*oxyijénr, — La culture des bactéries par ces méthodes démontre qu'il existe beaucoup de bactéries anaérobies dans l'eau, dans le sol, et dans les fermentations. On s'assure aussi qu'un grand nombre d'entre elles vivent et se développent aussi bien dans les milieux oxygénés que dans ceux qui sont privés d'oxygène. Les bactéries aérobies perdent, dans les substances nutritives sans air, certaines de leurs propriétés; par exemple des bactéries chromogènes n'auront plus le pouvoir d'engendrer des matières colorantes; des bactéries qui liquéfient la gélatine n'auront plus la force nécessaire pour la liquéfier. Les bactéries aérobies typiques comme le bacillus aerophilus de Liborius donneront un résultat presque nul si elles sont cultivées sans air. D'autres bactéries se développeront beaucoup moins bien.

Certains bacilles aérobies comme ceux de la fièvre typhoïde, de la septicémie des souris, comme le streptococcus pyogenes se développent trî's bien sans oxygène, fait dont on peut s'assurer d'ailleurs en voyant que, dans les cultures ordinaires par piqûre, ils poussent très bien dans la partie profonde de la gélatine. Certaines bactéries anaérobies se développent très bien aussi dans les couches profondes de la gélatine exposée à l'air, tandis que pour obtenir des cultures d'autres bactéries anaérobies il est nécessaire que la substance nutritive soit placée dans une atmosphère tout à fait dépourvue d'oxygène.

On peut distinguer : 1® les anaérobies obligatoires, cVst-à-dire ne pouvant vivre s'il y a un atonie d'oxygène. Ils déterminent des fermentations ; il en est qui peuvent vivre sans faire de fermentation (œdème malin).

2* Les aérobies obligatoires.

3» Le groupe le plus considérable des bactéries vit à la fois sans air ou avec de Tair. Il en est qui poussent mal sans air, mais il en est qui vivent bien sans air. Tels sont celles de la pneumonie, le proteus, etc., qui déterminent des fermentations ; mais ces fermentations se font aussi bien avec de Tair que sans air. Le prodigiosus est le seul qui donne des fermentations sans air. Il décompose le sucre en donnant de l'acide carbonique et de l'alcool; mais il peut aussi vivre dans un milieu privé d'air sans donner lieu à une fermentation.

Liborius n'a pas trouvé une seule bactérie anaérobie qui corresponde exactement au rôle attribué par Pasteur et Napgeli, c'est-à-dire qui puisse vivre sans air en présence de substances à décomposer en donnant lieu à des fermentations. Escherich a trouvé cet exemple dans son bacille qui vit sans air en formant des fermentations.

Voici d'après Liborius, le classement des bactéries suivant leur affinité pour l'oxygène en commençant par celles qui ont le plus besoin de ce gaz :