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d’eau distillée neutre. Verser par petites portions une quantité de soude à 1 % égale à la moitié du volume total des jaunés ; ajouter ensuite la soude par centimètre cube jusqu’à ce que le milieu soit parfaitement clarifé, ce dont on s'assure chaque fois par sa transparence sous un petit volume. En général, 10 centimètres cubes de soude ainsi ajoutés à la masse totale suffisent, Compléter avec de l’eau distillée neutre jusqu’à 7 litres.

Répartir en boîtes de Roux ou en tubes. Stériliser vingt minutes à 119°.

Milieu de Pétrof}

Des œufs de poule sont immergés pendant quinze minutes dans l’alcoo! à 70°. On les casse, on mélange blancs et jaunes avec une baguette de verre flambée, et on filtre sur tarlatane stérile. À 400 centimètres cubes de filtrat, cn ajoute 200 centimètres cubes de filtrat sur gaze de macération de viande fraîche de veau (250 gr. de viande hachée + 212 gr. d’eau distillée stérile + 37 gr. 5 de glycérine stérile, mise à/macérer pendant une nuit à la glacière). On additionne le tout de 6 centimètres eubes (1 %) d’une solution alcoolique de violet de gentiane à 1 %. Après avoir mélangé intimément le colorant, on répartit en tubes, et on coagule en chauffant pendant 30 minutes à 85° le premier jour, 30 minutes le second et le troisième Jour.

Milieu de Pétragnani

Dans un flacon d’un litre, mettre 150 centimètres cubes de lait neutre de vache, 6 grammes de fécule de pomme de terre, 1 gramme de peptone, et une pomme de terre de la dimension d’un œuf de poule toupée en morceau. Plonger le ballon dans l’eau bouillante, et l'y maintenir en assurant l’homogénéité du mélange par un mouvement de rotation. Quand la masse s’épaissit, c’est-à-dire après 8 à 10 minutes, cesser d’agiter, et laisser au bainmarie bouillant pendant une heure, Sortir ensuite le

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ballon et le laisser refroidir jusque vers 56°, ajonter alors le contenu de qnatre œufs, plus le jaune d’un cinquième œuf, 12 centimètres cubes de glvcérine, 10 centimètres cubes de solution de vert malachite Hôchst à ? % dans l’eau distillée. Bien mélanger par agitation, filtrer sur gaze stérile dans un ballon stérile, répartir stérilement en tubes. Coaguler en position inclinée par chauffage pendant 30 minutes à 85°. Stériliser de nouveau le lendemain par un chauffge de 30 minutes à 75° et sortir les tubes encore chauds.

ES olde ob

Mélanger stérilement trois parties d’œuf frais entier et une partie de bouillon glycériné à 5 % non alcalinisé. Répartir le mélange en tubes et coaguler en position inclinée, en chauffant trois fois pendant une demi-heure à 79°; à 24 heures d'intervalle. Le milieu ne formant pas d’eau de condensation, on ajoute quelques gouttes de bouilion non alealinisé, sans glycérine, au fond des tubes. Avant de procéder à la coagulation, on mesurera exactement le pH du milieu en en mélangeant 2 gouttes avee 195 centimètres cubes d’eau physiologique. Sa valeur doit être comprise entre 7,2 et 7.

Milieu Z. de Hohn à l’hématine

À 109 centimètres cubes d’œuf frais entier, bien mélangé par agitation pendant cinq minutes, on ajoute 3 centimètres cubes d’hémoglobine obtenue en hémolysant des globules rouges de mouton lavés, par un volume égal d’eau distillée stérile. Ce mélange prend un ton rouge brique. Ajouter alors 59 centimètres cubes de bouillon non alc®linisé glycériné à 10 % et additionné de 5 centimètres cubes de vert malachite à 1 %. Bien mélanger le tout, répartir dans des tubes à raison de 6 à 7 centimètres cubes par tube, et les laisser à la glacière pendant une demi-heure pour éviter la formation de bulles d’air dans le milieu. C'oaguler en position inclinée

en chauffant pendant 30 minutes à 80°. Mettre au fond de chaque tube 0,8 centimètre eube environ dé bouillon non alcalinisé sans glycérine.

Milieu de Loewenstein

On commence par préparer un liquide nutritif avec:

Phosphate monopotassique: 1 gr.

Agsparagine: 3 gr.

Citrate de soude: 1 gr.

Glycérine à 30° neutre: 60 er.

Sulfate de magnésium: 1 gr.

Eau distillée : 1.000 centimètres cubes. Cette solution, portée deux heures à 100 %, se conserve sans s’altérer.

À 150 centimètres cubes de cette solution, on ajoute, dans un ballon stérile contenant des perles de verre:

Farine de pommes de terre (Merk) : 6 gr.

Glycérine neutre à 30° stérilisée: 12 gr.

On ajoute et on chauffe à 100° pendant 15 minutes, puis une heure à 56°,

À ce mélange maintenu à 56°, on ajoute en agitant continuellement avec des perles de verre placées d'avance dans le vase stérile:

4 œufs complets plus 1 jaune d'œuf,

o centimètres cubes d’une solution aqueuse stérile de vert malachite (Merck) à ? %.

On peut substituer au vert malachite 10 centimètres cubes d’une solution aqueuse stérile à 2 % de rouge COnLO.

On filtre sur gaze stérile et on répartit en tubes stériles à raison de 5 à 6 centimètres cubes par tube. On tyndallise deux jours de suite à 80-86° en vapeur humide pendant deux heures chaque jour. On laisse les tubes

pendant 24 heures à l’étuve à 38° pour contrôler leur stérilité,

| Malieu de Pétragnani à l’asparagine LE (Modification de À. Saenz)

On fait dissoudre dans un vase stérile d’Erlenmayer d’un litre contenant 100 gr. de billes de verre stériles, et où l’on a préalablement versé 250 gr. de lait frais de vache et 16 gr. de fécule de pomme de terre (Vogue), 1 gr. 50 d’asparagine (Poulenc).

On fait bouillir au bain-marie en agitant fréquemment pendant une heure jusqu’à ce que le mélange prenne une consistance de purée épaisse; on refroidit jusqu’à 60°, et on ajoute huit œufs entiers ct deux jaunes d'œufs. On agite et lorsque l’émulsion est bien homogène, on filtre à l’aide d’un entonnoir muni d’une gaze stérile. On ajoute au filtrat:

Glycérine stérile: 24 gr.

Solution aqueuse de vert malachite à 2 %: 15 centimètres cubes.

On transvase ce mélange dans un appareil répartiteur, et on distribue en tubes de 19 millimètres de diamètre à raison de 8 centimètres cubes par tube. Ces tubes sont ensuite placés dans un appareil coagulateur à vapeur fluente à 85° pendant une demi-heure. On remplace alors les tampons de ouate servant à leur fermeture par des bouchons de caoutchouc massif pour éviter la dessiceation du milieu. On contrôle la stérilité des tubes en les laissant vingt-quatre heures à l’étuve avant leur utilisation.