CHAPITRE I
LES METHODES VACCINALES
METHODES UTILISANT LES VIRUS VIVANTS 1°ÿ Procédé de G. Blanc et Baltazard (Maroc)
A) PREMIÈRE MÉTHODE : virus murin vivant (organes de cobayes infectés) 1934.
Le virus employé est un virus murin isolé à Casablanca et désigné sous le nom de souche T. M. C. IIT. Cette souche est entretenue par passages sur cobayes mâles par injection intra-péritonéale d’un broyat de rate, de vaginales et de capsules surrénales.
Le matériel employé pour la préparation du vaccin est constitué par un broyat analogue : rate, vaginales de cobayes infectés. Les organes sont prélevés chez-l’animal en pleine réaction fébrile et au moment où il présente une vaginalite intense, en général vers le 6° jour. On effectue un filtrage grossier sur tarlatane. On emploie pour limmunisation une dilution au 1.000, c’est-à-dire un lot d'organes dilué dans 1.000 cc d’eau physiologique. On peut également, suivant la virulence, faire des dilutions au 1/2. 000° et au 1/3. 000°.
Le virus est atténué par la bile, en additionnant à l’émulsion précédente au moment de l'emploi, 1/20° de bile stérile.
Les modifications que subit le virus sous l’influence de la bile ont été étudiées par G. Blanc. En inoculation intra-péritonéale, le virus bilié provoque toujours l'infection de l’animal. En inoculation sous-cutanée, par contre, il ne donne plus la réaction nodulaire décrite par Mooser et par Baltazard. D’après Blanc, il ne s’agit pas d’une simple destruction partielle, ni d’une atténuation au sens ordinaire du mot, car l'inoculation intra-péritonéale provoque toujours, chez le cobaye, une infection typique. Le virus isolé à partir de ce cobaye montre, dans les passages ultérieurs, les
mêmes caractéristiques qu’un virus pur. Il ne s’agit donc pas d’une modification profonde analogue à celle qui a été obtenue par Pasteur pour le virus rabique. Pour de nombreux auteurs, Ronsse et . Mosing en particulier, le virus bilié est simplement un virus partiellement détruit. Blanc repousse cette interprétation, mais ne donne qu'une explication insuffisante de la nature spéciale de la transiormation subie par le virus murin sous l'influence de la bile.
Les doses à employer sont de 1 ce pour les adultes, de 4/2:cc pour les enfants de 8 à 15 ans, de 1/4 de cc. pour ceux de 1 à 8 ans. L'injection se fait par voie intra-musculaire, au niveau du deltoïde.
Le principal inconvénient de cette méthode vaccinale, c’est que la préparation de l’'émulsion virulente ne peut être faite que par des équipes spécialisées. De plus, le vaccin ne peut être ni stocké, ni conservé. Enfin, son activité ne peut pas être dosée. Son eflicacité est variable en conséquence. Les réactions vaccinales relativement rares chez les indigènes de l'Afrique du Nord, sont au contraire fréquentes chez les Européens. Nous avons tenu à donner les détails ci-dessus, parce que cette méthode a été appliquée lors de l'épidémie marocaine de 1937-1938, sur une grande échelle, et que de nombreux documents statistiques ont été publiés à son sujet.
Les inconvénients précédents n'avaient pas échappé à Blanc, qui a modifié, par la suite, les conditions de préparation du vaccin.
B} DEUXIÈME MÉTHODE : virus murin vivant (virus sec de déjections de puces infectées), 1938. |
La base expérimentale de cette méthode est l’existence du virus imurin dans les déjections de puces sur un’ animal infecté. Dyer ét ses collaborateurs, puis Blanc et Baltazard, ont étudié le ; virus de ces déjections. Ils ont établi leur haut pouvoir miectant et sa longue conservation à l'abri de l'humidité. La destruction, par : contre, est rapide en milieu aqueux.
« La préparation de ce vaccin nécessite des élevages importants de puces du rat (xenopsylla cheopis). On dispose, à cet effet, des cuves de granit porcelainé avec du son dans le fond. On utilise deux séries de cuves. Les unes servent à l'élevage des puces neuves, les autres à la récolte du virus. Dans une cuve contenant environ 30. 000 puces neuves, c’est-à-dire n'ayant jamais piqué, ont met deux rats blancs (aux incivives inférieures coupées) et inoculés 48 heures auparavant avec du virus murin (souche T.M.C. IT. Ces
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rats meurent ou sont sacrifiés au bout de 48 heures. Les cadavres sont débarrassés de leurs puces et incimérés. On met dans la cuve deux autres rats inoculés dans les mêmes conditions, et on renouvelle cette opération plusieurs fois de suite.
Dès la fin de la deuxième semaine, on peut considérer que toutes les puces sont infectées. On procède alors à la récolte du virus. Toutes les 48 heures, les rats sortant de la cuve sont épilés. Les poils englués de déjections de puces sont mis au dessiccateur sous le vide en présence de CE anhydride. Le lendemain, les déjections desséchées sont séparées des poils par tamisage sur des soies à bluter de calibre décroissant. Aussitôt récoltées, elles sont réparties en ampoules scellées sous le vide (vide à 1/100° de mm. de nfercure}. Tous les 135 jours, les puces mfectées sont transférées dans une autre cuve, pour éviter l’éclosion de puces neuves, nées de leur ponte. » |
Une cuve permet de récueillir environ 10 grammes de déjections en 30 à 40 récoltes. Par la suite, les puces vont décroissant. Blanc, à l’Institut Pasteur de Casablanca, peut ainsi produire, en cas de besoin, 40 grammes de virus sec par mois.
La conservation de ce vaccin est longue, déjà à la température ordinaire. À + 4° et à l'obscurité, elle est considérable, de l’ordre de plusieurs années.
En dehors de ces observations techniques, le principe de la vaccination est le même que dans la méthode initiale. L’atténuation. du virus est obtenue par la bile.
Ce vaccin, dont la conservation et le transport sont faciles, a, de plus, l'avantage sur le précédent, de pouvoir être titré. La titration n’est possible d’ailleurs que par un procédé indirect, dont le principe est le suivant :
Les puces, une fois infectées, le restent toute leur vie. Si on nourrit ces parasites uniquement avec des animaux infectés, il se produit une réinfection permanente et le nombre de germes éliminés dans leurs déjections par ces parasites finit par être à peu près constant. On peut alors mélanger les déjections d’un grand nombre de parasités et titrer l’activité de ce mélange, dont la dose infectante pourra être ainsi déterminée pondéralement.
Le pouvoir infectant varie peu, en moyenne. Pour obtenir chez lé cobaye une infection régulière, il faut 10 mg. de crottes de puces. Avec 1 mg. on obtient seulement une infection irrégulière. Pour l’homme, avec 1/100° de mg., on réalise une infection régu-
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lière et constante. Avec 1/1. 000° de mg., les résultats sont irréguliers.
Notons en passant, l'énorme différence de réceptivité, puisque pour un cobaye de poids moyen de 250 grammes, il faut 1. 000 fois plus de virus que pour un homme de poids moyen 70 kg. On comprend, en présence de ce fait, les difficultés que présente l’expérimentation et la quasi-impossibilité d’effectuer des dosages de virus applicables à l’homme, d’après le pouvoir infectant pour le cobaye.
Le vaccin est présenté en ampoules scellées, contenant chacune 1 mg. de déjections de puces. Elles sont accompagnées de flacons-canettes contenant chacun 100 cc de la solution suivante, de pH 7,5 :
PO:NakGristallsés Peel LEP RTOILSE.
FCI PRO EMA RECETTES EE ER 8 cc FaAU:dT S DOUL Fetes RE 15000 %7cc Bile de bœufsstérile 5.7. Mi 6,66 cc
On dissout le contenu de l’ampoule dans quelques cc de la solution. On aspire le liquide ainsi obtenu et on le verse dans le flacon. On réalise ainsi une dilution du contenu de l’ampoule au 1/10 et cette émulsion se trouve biliée à 1/150°.
On injecte 1 cc de la préparation précédente, soit 1/1. 000° de milligramme de déjections de puces infectées. Une fois préparée, l'émulsion doit être utilisée immédiatement, sa conservation ne dépassant pas alors quelques heures.
Technique de préparation de l'excipient : La composition du . milieu salin est la suivante :
Phosphate disodique cristallisé . 17 gr. 9 (PO* Na H + 12H°0)
(ou phosphate disodique anhydre :
POSNASED RP SR 1 SELST0 Acide chlorhydrique normal ...... 8 cc Eau: distillée: ZE Re 14.000 cc
« Le phosphate disodique est dissout à chaud dans 500 cc d'eau distillée passé au papier filtre pour éliminer les impuretés. Les 8 cc d'acide chlorhydrique sont, d'autre part, étendus à 500 cc avec de l’eau distillée. Les deux 1/2 litres sont ensuite mélangés. Le pH a une valeur constante qui est de 7,5. Cette solution très stable peut être conservée indéfiniment. » |
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La préparation de la bile de bœuf se fait de la façon suivante :
« Aussitôt après l'abattage, une ligature est posée au col de la vésicule biliaire et le canal cystique tranché d’un coup de couteau. Les vésicules prélevées sont apportées au laboratoire et leur contenu (150 cc par vésicule environ) vidé dans un pot à lait émaillé. Celui-ci est mis à l’autoclave 1 heure à 120° pour précipitation. Filtration sur papier Laurent humide. Répartition en ampoules de 20 cc. Stérilisation à l’autoclave 45 minutes à 115° seulement, pour éviter une nouvelle précipitation ; la bile doit rester parfaitement limpide dans les ampoules. Ces ampoules sont conservées à l’obscurité. Il peut arriver que la bile se décolore et précipite à nouveau ; elle doit alors être rejetée.
L’adjonction de bile à la solution tampon au taux de 1/150° est faite de la façon suivante : à 3 litres de solution tampon, on ajoute le contenu d'une ampoule de bile (20 cc). Le mélange est agité et réparti en ampoules ou en flacors-canettes (selon le conditionnement adopté) préalablement stérilisées au four Pasteur. Ampoules et flacons sont fermés, puis portés à l’autoclave à 110°, pendant 45 minutes.
L’excipient bilié, ainsi stérilisé, peut être conservé Îort longtemps ; il est cependant préférable de ne le préparer qu’au fur et à mesure des besoins. » 8
Comme on le voit, d’après les indications précédentes, l’excipient une fois bilié peut s’altérer à la longue ; mais sa durée de conservation n'est pas nettement précisée par G. Blanc.
2°) Procédé de Laigret, Nicolle et Laigret, Laigret et Durand
A) MÉTHODE : virus murin vivant (cerveau de cobaye ou de rat plus enrobage), Laigret et Nicolle, 1936. -
Le virus employé est un virus murin isolé en Tunisie. Le matériel est constitué par le cerveau de rat et de cobaye inlectés. L'atténuation du virus est assurée par dessiccation et enrobage dans du jaune d’œui. La résorption du virus est ainsi ralentie lors de l’inoéulation. Les réactions vaccinales sont moins vives et l’immunisation s'établit avec lenteur, mais solidité.
La conservation du vaccin est de 1 mois à —15° et de 24 heures seulement à la température ordinaire.
Au moment de l'emploi, la préparation précédente (cerveaux desséchés de rats et de cobayes enrobés dans du jaune d’œuî) est
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émulsionnée dans de l'huile d'olive stérile. On pratique 3 imjections : la première de 1/200° de cerveau de cobaye, la deuxième de 1/200° de cerveau de rat, plus virulent que celui de cobaye, et Ja troisième de 1/50° de cerveau de rat. +
Les réactions vaccinales seraient insignifiantes. Cette méthode apparaît comme une modification de la méthode de G. Blanc. La préparation du vaccin est difficile et son titrage impossible.
C’est en raison de ces inconvénients qu’elle a été abandonnée par son auteur, qui a mis au point une deuxième méthode.
B) MÉTHODE : virus murin vivant (cerveau de souris + enrobage), Laigret et P. Durand, 1939. Voie sous-cutanée.
Par une série de passages, Laïgret a exalté la virulence de deux souches de virus murin, la souche Tunis-Port et la souche Tunis- Marché. Ces souches de virus provoquent, après ces passages, une paralysie mortelle chez la souris, après une incubation de 2 à 7 jours. La sensibilité de la souris à ce virus est très élevée : 1/10. 000. 000° de cerveau de souris est encore imfectant. Si les passages de cerveau à cerveau chez la souris exaltent la virulence, le passage cerveau-péritoine la fixe à une valéur moyenne. On arrive ainsi à obtenir des cerveaux contenant 10.090 unités infectantes pour la souris. È
La conservation est, après dessiccation, de 95 jours au frigorifique, et de 7 jours à la température ordinaire. En émulsion dans l'eau physiologique, la conservation est encore longue : de 15 jours We
Le titrage est facile, étant donné la réceptivité de la souris. On pratique des inoculations sériées aux souris, suivant un protocole analogue à celui employé pour le titrage du vaccin contre la fièvre jaune. +
Le mode d'emploi a varié. Au début, le virus de souris desséché était mis, au moment de l'emploi, en suspension dans de l'huile stérile. Puis Laigret a abandonné la suspension huileuse. Le virus, desséché et enrobé dans du jaune d'œuf, est repris en suspension aqueuse. Cette suspension doit être préparée extemporanément.
La vaccination se fait en un ou plusieurs temps. La vaccination en un temps est applicable aux sujets partiellement réfractaires : indigènes du bled des pays d’endémie. On injecte 10 unitéssouris en une seule fois.
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La vaccination en plusieurs temps est nécessaire pour les sujets
plus réceptifs : Européens et indigènes urbanisés. Son principe est en réalité différent. On utilise comme premier vaccin des cerveaux de souris de passages intra-cérébraux, très riches en rickettsias, qui sont exposés à l’étuve. Il est ainsi inactivé, ce qui est contrôlé biologiquement. Ce premier vaccin est insuffisant pour protéger contre le typhus exanthématique, mais il prépare l'organisme à une deuxième inoculation, Le deuxième vaccin est constitué par une unité-souris, le troisième par 10 unités-souris.
L'intervalle entre les injections doit être de une semaine entre le premier et le deuxième vaccin, de trois semaines entre le deuxième et le troisième.
Laigret a modifié, encore récemment, son procédé de vaccination. Voici les détails techniques récents qu’il a fourni à son sujet (Soc. de Path: Exot., 8 oct. 1941. Bull. de Soc. Exot., 1941, n° 8-10, p. 183) :
« Le virus paralysigène à été obtenu à partir de deux souches tunisiennes de virus murin. On broie ensemble cerveau et vaginale d’un rat de passage sacrifié au moment de la fièvre ». On met en suspension dans 15 cc d’eau physiologique. On inocule la souris par voie péritonéale (0 cc 5 de l’'émulsion précédente). Pour les premiers passages, où l'infection reste inapparente, on sacrifie les souris vers le 10" ou 12”° jour. On prélève les cerveaux que l'on inocule par voie péritonéale à de nouvelles souris.
A partir du 4" passage, le virus est adapté en général. I} provoque alors, après une incubation de 5 à 6 jours, des troubles de l'équilibre et des paralysies, assez souvent même des crises convulsives. L'évolution de ces accidents est rapide : mort en 12 heures environ.
A l’autopsie, l’exsudat péritonéal montre de très nombreuses rickettsias. Le cerveau des souris est très virulent. Il paralyse la souris à la dilution 10, parfois 100.
Inoculés aux cobayes et aux rats par voie péritonéale, les cerveaux provoqueñt, au début des passages, des infections sévères et caractéristiques : fièvre élevée, orchites volumineuses avec nombreuses rickettsias, parfois même paralysie du rat.
Mais, après s'être maintenue pendant une dizaine de passages sur souris, cette virulence baisse, alors que le pouvoir paralysigène demeure inchangé. \
Au début, Laigret utilisait le virus à cette période d'adaptation.
