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Mais ayant constaté que cette baisse du pouvoir pathogène pour le cobaye et le rat annonce une baisse du pouvoir antigénique qui se manileste au cours des passages ultérieurs, il cherche à stabiliser le virus. |
Pour cela, après 10 passages paralysigènes de souris à souris, on inocule avec le cerveau de souris, des souris et des rats. On prélève le cerveau de souris lors de la paralysie, le cerveau du rat lors de la fièvre et on mélange les deux pour le passage suivant sur souris. ,
On fait ensuite 10 passages sur souris et on renouvelle alors la « régénération » par passage sur rat.
Cette technique, qui comporte 10 passages exclusifs sur souris, plus un passage mixte rat-souris, maintient à la souche un haut pouvoir paralysigène, typhogène et immunisant.
Le virus subit, pour être transformé en vaccin, une atténuation importante par dessiccation. Le cerveau de souris injecté frais provoque la paralysie de la souris, la fièvre du rat suivie d’immunité, la fièvre et l’orchite du cobaye suivis aussi d'immunité. Chez ces trois animaux, on observe de nombreuses rickettsias dans l’exsudat péritonéal. Chez le rat et le cobaye, il ne réalise qu’une infection inapparente. La réalité de cette infection inapparente du rat est établie par l'inoculation d’épreuve qui les montre résistants à l’injection d’un virus murin ordinaire et par prélèvements du cerveau qui, inoculé à des souris et à des rats, permet de récupérer, après deux ou trois passages croisés (rats-souris), un virus présentant les caractères du virus de départ.
La fabrication du vaccin demande peu de matériel infectant. Pour 1.000 doses, un cerveau de souris paralysée est broyé avec 12 gr. 50 d’un mélange de phosphates (phosphate de soude anhydre 10 parties, phosphate monopotassique 1 partie), et avec 40 cc de jaune d'œuî stérile. La mixture ainsi obtenue est placée au dessiccateur à vide garni de chlorure dé calcium fondu. On fait le vide et on laisse 48 heures à la glacière (+ 5° environ). Le produit desséché est rebroyé et passé sur un tamis stérile. La poudre est répartie dans 5 tubes que l’on bouche au caoutchouc et que l’on conserve au frigorifique. Chaque tube contient 200 doses vaccinales.
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Les poudres provenant des/divers animaux sont mélangées pour égaliser la virulence. On les répartit ensuite en ampoules de 1, 2, 5, 10 doses à l’aide d’une petite mesure jaugée de 0 gr. 05.
Le vaccin est ainsi présenté en tubes de 10 tablettes de 26 doses chacune.
La dose vaccinale est de 0 gr. 05 centigrammes. La virulence est contrôlée par titrage. On dilue deux doses (0 gr. 10} dans 10 ce d’eau physiologique et on fait des dilutions au 1 / 1( et au 1/100° de cette suspension initiale.
Chaque dilution est inoculée au moins à deux souris, à la dose de 0 cc 5 par voie péritonéale. Les deux premières dilutions, pouvant provoquer la paralysie de la souris, la troisième doit se montrer inactive.
Ce résultat correspond à la virulence de la souche obtenue par
- Laigret, soit environ 100. 000 unités par cerveau de souris. La viru-
lence du vaccin est de 100 unités par dose. Un contrôle complémentaire est effectué sur l’homme. 20 doses sont confiées à un médecin examinateur qui se rend compte des incidents survenus. La conservation du vaccin est de 3 mois à —15° ; de 10 à 15 jours à 20°-22°, Ce délai à la température ordinaire est suffisant pour permettre le transport.
- Le mode d'emploi du vaccin est le suivant : on met la quantité
de poudre correspondant à une dose (0 gr. 05 en moyenne) en sus-
pension dans 1 cc d’eau distillée. L’inoculation est à faire de préférence à la face externe du bras. Chez l’indigène nord-africain, la vaccination se fait en un seul temps. Chez l'Européen, il vaut mieux
-la faire en deux temps. On injecte la première fois 1/4 ou 1/5 de
dose, puis 20 jours après la dose entière. Même chez l’'Européen, Laigret a pu réaliser la vaccination en un temps sans incident.
Il a pu, par ailleurs, employer, au lieu des vaccins à 100 unités par dose, des vaccins à 1. 000 unités par dose qui se sont aussi révélés inoffensiis.
Laigret a fait par ce procédé 220. 000 vaccinations sans aucun cas de typhus murin vaccinal.
L'immunité obtenue serait excellente. Il n’y aurait eu pratiquément aucun cas de typhus chez les vaccinés où au maximum
C) MÉTHODE DE LAIGRET : vaccination par voie dermique (1940), ou plus exactement.
Laigret a adapté pour la vaccination contre le typhus par son virus paralysigène de souris, la technique’ d’inoculation intra-dermique utilisée pour la variole et la fièvre jaune.
TS Il faut employer une suspension vaccinale plus concentrée, telle que chaque goutte contienne 2. 000 unités-souris (soit 20 lois la dose inoculée par voie sous-cutanée).
Voici les détails qu'il donne sur ce mode d’inoculation :
« On dépose sur la peau du bras une gouttelette de vaccin. On: applique ensuite sur la surface ainsi ensemencée la pointe d’une aiguille à coudre ordinaire. L'aiguille est appliquée à plat, tangentiellément aux téguments. Cinq à six fois de suite, on appuie et on relève la pointe de l'aiguille, de manière qu’à chaque remontée, elle accroche légèrement la peau sous-jacente. Il en résulte autant de petites excoriations, autour desquelles les capillaires congestionnés forment, après quelques minutes, une tache rouge. »
Les réactions locales après vaccination restent discrètes et consistent en petites élevures rouges qui persistent 3 jours. Il n'y a pas de réactions générales.
Cette technique simple a l'inconvénient de nécessiter une dépense beaucoup plus considérable en vaccin.
Il faut, en effet, admettre, d’après Laigret, que les 9/10° de la quantité déposée sur la peau pour réaliser cette vaccination, sont perdus.
Aussi, considère-t-1l cette méthode davantage comme un essai intéressant que comme une technique pratique d'avenir.
3°) Méthode d’'H. Sparrow et P. Mareschai
Tunis, 4937 (Intestins de poux inoculés avec virus murin. Voie nasale).
H. Sparrow, qui en 1935, réussit à cultiver le virus murin sur poux, suivant la méthode utilisée par Weigl pour le virus épidémique, à utilisé cette source de virus pour mettre au point une nouvelle méthode vaccinale. Avec P. Mareschal, elle étudie les condi- : tions de l’inoculation à l'homme du virus murin. Deux facteurs influencent principalement la gravité de la maladie conférée à l’homme : la quantité de virus inoculée et la voie d'introduction. Par voie sous-cutanée, de faibles doses n’entraînent aucune maladie inapparente, ni apparente. Les sujets ont une réaction de Weil- Félix négative et ne présentent aucune immunisation. Ils réagissent comme les témoins à l'infection d'épreuve.
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Avec 1/100° d’intestin de pou ou un intestin (ce qui représente des doses massives) l’homme fait, Soit un typhus inapparent, soit un typhus murin d’allure bénigne, aux Weil-Félix positifs et immunité consécutive.
L'inoculation par voie conjonctivale, en instillation, se montre moins virulente. Il faut, pour obtenir l’immunité, employer 1/10° d'intestin de pou ou un intestin entier.
Les variations individuelles de réceptivité chez l'homme sont assez prononcées. Le rat montre une sensibilité plus grande que l'homme au virus murin. La plus petite dose de virus murin capable d’infecter l'homme, inoculée au rat, l’infecte sûrement. Il en résulte que l’on peut doser l’activité d’un virus murin vis-à-vis de l'homme en utilisant le rat comme animal réactil.
Ce mode de vaccination est resté au stade expérimental. Il n’a pas encore, à notre connaissance, été appliqué sur une grande échelle.
4°) Autres méthodes utilisant des virus vivants
A) MÉTHODE DE ComBiesco (1937) :
L'auteur prépare son vaccin avec des cerveaux, surrénales et rates de cobayes infectés de virus épidémique, enrobés dans la lanoline, puis l'huile d’olive. Les cobayes ayant reçu 2 ou 3 injections de vaccin résistent à 20-30 doses imfectantes.
4.500 individus furent vaccinés sans incidents, mais ils ne furent pas éprouvés au point de vue immunité.
Balteanu et Constantinesco ont montré que l’enrobage dans l'huile d'olive présente une action virulicide. Si la destruction du virus est complète, le vaccin ne détermine aucune immunité, ni aucun incident. Mais elle peut être incomplète, et linoculation à l'homme provoque alors soit un typhus authentique, soit une injection inapparente suivie d’immunité. Dans ces cas, cette méthode est à proscrire dans les collectivités non épouillées, car les sujets ainsi inoculés peuvent devenir des sources d'infection et contribuer à difiluser la maladie.
