LES METHODES-VACCINALES UTILISANT LES VIRUS TUES

1° Le vaccin de Weigl : Pologne, 1920. Intestins de poux infectés avec virus humain.

Le vaccin de Weigl utilise le virus des poux infectés.

On inocule à ces parasites, par voie nasale, une émulsion de rickettsias. Cette émulsion est obtenue, soit à partir de l'intestin d'un pou iniecté, soit à partir des organes d’animaux inoculés, soit à partir du sang d’un malade atteint de typhus. Le sang du typhique, prélevé à une certaine période, permet d’infecter avec succès 900 poux avec 1 cc de sang.

Le pou inoculé succombe en quelques jours. Les rickettsias prolifèrent dans son organisme. Un gros pou peut renlermer de 10 à 100 millions de germes, soit en moyenne, approximativement, 50 millions de germes ; un autre auteur estime qu’un pou contient 10 puissancé 9 doses infectantes pour le cobaye.

Les poux sont lavés à l’alcool, leurs intestins sont isolé$ aseptiquement, réunis, broyés et mis en suspension dans de l’eau physiologique additionnée de 53 % de phénol.

La conservation du vaccin est longue : plus de 3 ans à la gla-

cière. La préparation en est évidemment très compliquée. En dehors de la difficulté technique de l’inoeculation par voie anale du pou, il est très difficile d'obtenir un élevage important de ces parasites, que l’on ne peut nourrir que sur l'homme. Il faut donc disposer pour l'élevage, de sujets immuns en quantité suffisante. Des précautions doivent être prises pour éviter la dissémination des parasites infectés. En fait, seul l'Institut de Lwow, en Pologne, était organisé pour cette préparation. On pouvait y infecter et nourrir 1.000 poux par jour. Le virus y était entretenu depuis 1924 par un nombre considérable de passages de pou à pou. Il avait conservé sa virulence. TA

1 cc de vaccin correspond à 100 intestins de poux, soit 5 mitliards de rickettsias ; il s’agit donc d’un vaccin riche en éléments microbiens. Cette dose de 100 poux correspond à 10 puissance 11 doses inlectantes pour le cobaye (1 pou = 10 puissance 9 doses ini. pour le cobaye).

Le mode d'emploi est le suivant : :

Trois injections sous-cutanées à 3 ou 6 jours d'intervalle : 1" dose: 25 intestins de poux, 1. 250 millions de rickettsias, 0 ce 25 2° dose : 50 intestins de poux, 2. 500 millions de rickettsias, 0 ec 50 3° dose : 100 intestins de poux, 5. 000 millions de rickettsias, 1 cc

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Les réactions vaccinales sont analogues à celles que l’on observe avec le vaccin T. A.B. Les réactions fébriles sont plus fréquentes ; si on abaisse ce taux de rickettsias, qui correspond à la méthode initiale de Weigl, cette vaccination marche moins bien et l’immunité devient aléatoire.

Ultérieurement, Weigl a employé des doses plus faibles d’intestins de poux, au lieu de 175 intestins comme nombre total, on passe à 100, 90 et même au-dessous. Certains sujets furent vaccinés avec des doses correspondant à 50, 20, 10 et même 1 seul pou.

Ces mesures avaient été prises à cause de la difficulté de préparation de ce vaccin.

Les auteurs n'auraient remarqué aucune différence au point de vue de l’immunité entre les sujets vaccinés avec 175 intestins de poux et ceux qui le furent avec des doses très inférieures.

Pour d’autres, par contre, cet appauvrissement du vaccin de Weigl en antigène serait, au contraire, à l’origine des irrégularités dans les résultats observés ces dernières années : baïsse dans le pouvoir protecteur.

2° Vaccin de crottes de poux infectés : Pologne, 1933, Chrzanowski et H. Mosing.

Etant donnée la prolifération intense des rickettsias dans les cellules de l'intestin de poux, certaines de ces cellules se distendent, éclatent et leur contenu se déverse dans la lumière intestinale. Si bien que les crottes de poux iniectés sont très riches en rickettsias. On peut donc utiliser ces déjections comme source de virus au lieu d'employer des intestins.

Il faut cependant purifier ces crottes pour éviter de fortes réactions cutanées. Une quantité déterminée de crottes est plongée dans de l’eau physiologique de facon à obtenir une émulsion épaisse.

Une première centrifugation lente élimine les débris insolubles, laissant en suspension les rickettsias et le sang digéré.

Une deuxième centrilugation à grande vitesse permet de recueillir les rickettsias. On leur fait subir un nouveau lavage. Il faut plusieurs centrifugations successives pour obtenir une suspension qui ne contienne que des rickettsias. La plupart des bactéries communes de l'intestin du pou sont ainsi éliminées, étant précipitées à la première centrilugation (B. subtilis, Cocci, etc...). S'il demeure quelques éléments bactériens, ils sont peu nombreux et facilement tués par le phénol.

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La conservation est très longue à sec. Mais la quantité de rickettsias contenue dans les crottes de poux infectés est variable et ce vaccin, malgré l’économie qu'il permettait de réaliser n’a pu rivaliser avec le précédent, auquel l'Ecole Polonaise est restée fidèle en définitive.

3° Méthode de Castaneda (Mexique, 1939). Cette méthode n’est pas dirigée contre le typhus exanthématique historique, mais contre le typhus murin (Tabardillo, au Mexique). Nous croyons, malgré tout, utile de la citer.

La méthode actuelle de Castaneda est basée sur la Tete d'obtenir in vivo, des cultures abondantes de rickettsias sur | pour mons de souris, de rats et de lapins.

Les travaux d’ Okamoto, de Hitz avaient montré l'existence de rickettsias dans les poumons d'animaux inoculés par les voies habituelles. Castaneda montre que les rats et les souris peuvent être inoculés par voie nasale. A la suite de cette inoculation, il se fait un développement considérable de rickettsias dans le poumon. L'épithélium des bronches présente des corpuscules intra-cellulaires ; les cellules sont tellement parasitées qu’elles ressemblent aux cellules de l'intestin d’un pou infecté. Le virus de départ-est constitué par une émulsion de vaginale de cobaye mâle infecté de. typhus murin. |

Les animaux, rats ou souris, sont anesthésiés à l’éther. On inocule pour une souris 0 ce 2, pour un rat 0 ce 4 d’émulsion. L’anesthésie est maintenue jusqu’à ce que la dose entière à inoculer ait été injectée.

L'émulsion est obtenue en lavant à plusieurs reprises une vaginale de cobaye avec 1 cc d’une solution isotonique de citrate de soude. La souris meurt en 96 heures environ en présentant des lésions de splénisation des lobes atteints (d’après Castaneda) : les capillaires sont gorgés de sang ; de nombreuses cellules extravasées et des polynucléaires envahissent l’alvéole, les bronches et les capillaires, de même que certains polynucléaires présentant des signes de dégénérescence sans qu'il y ait vraiment production de DUS M

Le cytoplasma de nombreuses cellules est gonflé d’un nombre considérable de petits organismes, qui les font ressembler aux cellules de Mooser, de la vaginale de cobaye infecté de typhus murin, et aux cellules endothéliales du péritoine des rats infectés après irradiation aux rayons X.

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Castaneda écrit au sujet de ces lésions pneumoniques : « Nous avons reproduit ces expériences et avons retrouvé ces résultats : les souris étant inoculées par voie nasale avec une suspension de rickettsias obtenue en émulsionnant dans 2 cc d’eau physiologique 10 mgr. de crottes de puces infectées (virus T.M.C. II, de Casablanca). Les animaux meurent en hypothermie en 48 heures. Les examens anatomo-pathologiques ont montré, non pas des lésions de pneumonie, mais des lésions de broncho-pneumonie hémorragique rappelant l’aspect de la broncho-pneumonie grippale ».

“ A partir des poumons de souris et-de rats ainsi infectés, on obtient des « souches pulmonaires » de rickettsias aux dépens desquelles on réalise des émulsions riches en éléments bactériens. Pour les passages ultérieurs, les poumons doivent être émulsionnés après broyage dans 30 cc de sérum salé lorsqu'il s’agit de poumons de rat, et dans 7 cc lorsqu'il s’agit de poumons de souris.

Lors des passages successifs de poumon à poumon chez le rat ‘et la souris, l’évolution est accélérée et la mort survient souvent en. 72 heures.

Pour obtenir de plus grandes quantités de rickettsias, Casta- neda a cherché à inoculer des lapins. L'expérience est plus difficile à réaliser et demande un artifice supplémentaire.

Le lapin est anesthésié de préférence au dial à raison de 0 ce 55 de ce produit par kilo d’animal, en injection intra-péritonéaie. On lui inocule 1/3 de poumon de rat (soit 10 cc de la suspension obte- nue en émulsionnant les deux poumons du rat dans 30 cc d’eau physiologique), en injection intrachéale directe. Il faut ensuite maintenir la température du lapin au-dessus de 37° pour des injections répétées de dial. La dose à injecter est les 3/4 de la dose initiale utilisée pour la narcose. Avec 3 ou 4 injections espacées on arrive à maintenir l'animal endormi pendant 72 heures et à température au-dessus de 37°.

Castaneda a recherché la nature des germes contenus dans les poumons de ces différents animaux en dehors des rickettsias. Chez la souris, les poumons inlectés par les rickettsias contiennent très peu d’autres microbes. Par contre, chez le rat, les germes autres que les rickettsias sont. plus nombreux : en particulier, Castaneda a trouvé une bactérie Gram négative qui est pathogène pour le cobaye, donnant en inoculation intra-péritonéale, une péritonite mortelle.

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Cette méthode permet d'obtenir d’assez grandes quantités de rickettsias. | À

Voici les indications fournies au point de vue du rendement par Castaneda. Une souris peut être inoculée à partir du produit de lavage d'une vaginale de cobaye mâle infecté (soit 5 à 6 jours après l’inoculation de cet animal). à

Les deux poumons d’une souris permettent d’inoculer 15° rats de poids moyen (1/15° de poumon de souris pour un rat). Le rat meurt, en règle, en trois Jours.

Un lapin peut être infecté avec 1/3 de poumon de rat. Les

poumons de rat permettent déjà d'obtenir des suspensions de rickettsias en quantité suflisante pour préparer un vaccin.

Après broyage et purification par centrilugation, on obtient, en effet, 10 grammes de rickettsias par 100 rats. Cette quantité permet de préparer 5 litres de vaccin. Deux techniciens peuvent inoculer 3 lots de 100 rats en 8 jours et obtenir ainsi 15 litres de vaccin.

Le vaccin est constitué par l’'émulsion précédente formolée. Si nous nous sommes étendus sur la description de cette technique, c'est que nous pensons qu’elle est encore peu connue en France et même en Europe. Elle nous apparaît, comme nous lé disons plus loin, comme la seule susceptible de permettre de fabriquer,

avec des moyens réduits, une quantité importante de vaccin à base

de rickettsias mortes. La grande misère de nos élevages n’a pas permis de vérifier, sur un grand nombre d’ animaux, le rendement établi par Castaneda.

Mais nous sommes persuadés que n'importe quel laboratoire

ayant l'habitude de manipuler les virus, et en particulier les rickett-

sias, pourrait sans peine, si on le dotait des moyens nécessaires, préparer par ce procédé les doses de vaccin qui pourraient être nécessaires pour assurer la vaccination préventive d’une collecti- vité importante menacée d’une atteinte par le typhus exanthématique épidémique.

“4° Méthode de Paul Durand : Tunis, 1940.

Paul Durand, à l’Institut Pasteur de Paris, a entrepris sur le même principe, des expériences fort intéressantes.

Il confirme l’évolution de la maladie après infection par voie nasale de virus murin chez la souris, le rat et le lapin, employés comme matériel virulent. Sur les frottis de poumons, il constate de très nombreuses rickettsias, extra-cellulaires le plus souvent.

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- Avec H. Sparrow, P. Durand s’est surtout attaché à infecter la souris par voie nasale avec le virus du typhus historique. Le virus de départ est le virus d’intestin de poux que l’Institut Pasteur de Tunis peut obtenir facilement grâce à son installation d'élevage de ces parasites. Les poux infectés avec le virus du typhus historique sont disséqués vers le 7*° jour.

L’abondance des rickettsias étant vérifiée extemporanément par une préparation à la cyanoquine, on broie le nombre voulu d'intestins de poux dans une dilution au 1/5° de sérum humain normal physiologique et on introduit immédiatement l'émulsion dans les voies respiratoires de souris blanches éthérisées. Il faut 1 à 3 poux par souris. Il faut faire l’imoculation immédiatement après avoir préparé l’émulsion d’intestins de poux. (En effet, les intestins de poux, desséchés et conservés à — 15°, qui conservent une virulence considérable pour le péritoine ou le tissu cellulaire souscutané du cobaye, peuvent très bien n'avoir aucun effet sur la souris par voie respiratoire).

Les souris meurent en 40 à 60 heures lors du premier passage. La maladie et les lésions sont semblables à celles que l’on obtient avec le virus murin et dont nous avons donné la description plus haut. Les passages ultérieurs de souris à souris sont plus faciles. La virulence, vis-à-vis du cobaye, de la souche pulmonaire de souris ainsi obtenue, se maintient au cours des passages de souris à souris. Les autres rongeurs, rat, lapin, cobaye, né sont pas aussi sensibles que les souris ét le développement des rickettsias y reste variable. Par inoculation par voie nasale à la souris, on peut obtenir des quantités importantes de rickettsias prowazeki à peu près pures. Les émulsions ainsi obtenues donnent, une fois formolées, un vaccin homologue contre le typhus exanthématique.

Voici les détails techniques donnés par Durand pour la préparation de ce vaccin.

« Les poumons infectés de souris, dont un examen rapide par la méthode de Castaneda a montré la richesse en rickettsias, sont broyés sans aucune addition et aussi finement que possible dans un broyeur spécial en verre Pyrex ou dans un broyeur à billes en acier inoxydable.

Ils sont alors émulsionnés dans du sérum humain ou équin normal dilué au 1/5° dans du sérum physiologique (de préférence tamponné à pH 7,4 avec une petité quantité d’un mélange de phosphates).