MATE

A cette dilution de sérum, on ajoute immédiatement avant l'emploi 2 ce pour 1.000 de formol à 40 % préalablement neutralisé. L'émulsion de poumon est’ centrilugée pendant 5 minutes pour séparer les cellules ou leurs débris, dont le culot est broyé de nouveau et soumis au même traitement. Après la deuxième centrilugation, les liquides surnageant sont réunis et centrifugés à fond à 7.000 tours au moins pendant une heure, en évitant aussi soigneusement que possible toute élévation thermique. Le culot final obtenu est blanc, à peine ‘grisâtre. Il est surmonté d’un liquide chargé d’hémoglobine dissoute que l’on rejette, ainsi qu'une mince couche de graisse qui flotte à la surface. Une préparation à la cyanoquine, un examen à l'U. M., ou après coloration au Castaneda, doit montrer que le culot est formé, au moins pour les 9/10° de son volume, de rickettsias.

Avec la masse de rickettsias on ea une émulsion dans du sérum dilué formolé (plus récemment, P. Durand a employé le xanthate de K au lieu du Îor mol). Ce sérum est identique à celui qui à servi au cours des premières manipulations, et lon note la dilution par rapport au nombre de poumons employés, ou mieux, par rapport au poids de ces poumons. (Avec des souris de 16 à 18 grammes, le poids moyen dés poumons hépatisés est d'environ 0 gr. 30 à 0 gr. 40).

Le vaccin est mis en ampoule et conservé à la glacière au moins 5 jours avant son utilisation. »

Des inoculations au cobaye à doses importantes ont montré l'absence totale de virulence d’un tel vaccin.

Le vaccin de P. Durañd, préparé par l’Institut Pasteur de Tunis, est présenté en boîtes individuelles de 3 ampoules.

La première contient”. .…::111242020 2800 0 cc 5 La-deuxréme contient. 7 RATE 12e Laz:troisième Contient..." CLOS LCCES

Elles doivent être injectées par doses croissantes à 8 jours d’intervalle par voie sous-cutanée au flanc ou à l'épaule, ou par voie intra-musculaire, dans le deltoïde. 5

Le vaccin est aussi délivré sur demandes en grosses ampoules pour les vaccinations collectives. Les volumes à injecter sont alors mesurés directement à la seringue.

Le rendement de ce procédé paraît assez faible, en moyenne les deux poumons d’une souris infectée permettraient de vacciner 50 personnes. Giroud a pu adapter au poumon de lapin Rickettsia

tee

Prowazeki. Il peut ainsi préparer en quantité importante des émulsions qui, une fois formolées, constituent un vaccin qui est actuellement à l’étude (Marseille, Camps de prisonniers Français en Allemagne).

Au suwet des dénominations de ces divers vaccins, nous pouvons désormais adopter les.suivantes :

Vaccin P. Durand, poumon de souris ; Vaccin P. Durand et P. Giroud, poumon de lapin.

:P. Giroud préfère la posologie, 1 cc trois fois. P. Durand préfère la posologie progressive.

Enfin, P. Durand remplace le formol par le xanthate de K ou par d’autres antiseptiques souîrés.

Le vaccin de l’Institut Pasteur de Paris est présenté en ampoules de 1 ce à conserver à la glacière. La vaccination comporte 3 injections sous-cutanées de 1 ce à 8 jours d’intervalle. Il est recommandé ‘de prendre certaines précautions pour vacciner les sujets qui ont séjourné dans des pays où le typhus exanthématique était endérñique : ces sujets présentent souvent une certaine sensibilité aux rickettsias tués. Pour mettre en évidence cette sensibilité, on injecte par voie dermique 1/10° de cc de vaccin. Les anciens typhiques font une réaction locale intense évoluant de la 24% à la 72° heure. Pour les sujets ainsi reconnus sensibles, la vaccination complète nécessite l'administration d’une dose totale de 3 cc, qui doit être faite en 4 ou 5 5 injections, la première ne dépassant pas 1/4 de cc.

Nous ne citerons que pour mémoire l’ancien vaccin de Zinsser et Castaneda, constitué par des émulsions d’exsudat péritonéal de rats irradiés aux rayons X et infectés.

Nous avons rappelé plus haut qu'après irradiation aux rayons X, les rats inoculés avec le virus murin font une infection sévère souvent mortelle. L’exsudat péritonéal est très riche en rickettsias. Zinsser et Castaneda préparent une émulsion par ce procédé. On prélève aussi la vaginale que l’on broie dans une solution formolée. Un-rat permettrait d'obtenir, par ce procédé, 20 ce d'une suspension contenant par cm’ { milliard de rickettsias

Castaneda, en 1937, chercha à appliquer ce même procédé en utilisant des animaux plus gros, préalablement irradiés et maintenus à une température inférieure à 38°. Mais ces deux méthodes n'avaient qu'un rendement assez faible et ne permirent pas des applications pratiques.

Re ue LES AUTRES METHODES VACCINALES

1°) Vaccins préparés avec des rickettsias cultivées in vitro

Les cultures de rickettsias in vitro sont difliciles. Divers

Ld “2 ? Ld # = ® « LA procédés ont été proposés. Chacun d'eux a servi à préparer un vaccin. Nous les citerons rapidement.

a) La méthode de Clara Nigg et Landsteier, rare à la culture des rickettsias de la méthode de Maitland, utilise comme … milieu le mélange de deux parties de liquide de Tyrode, une partie de sérum de cobaye et des fragments de tunique vaginale de ce même animal. On dispose:10 à 20 petits fragments dans 3 cc du mélange en fiole d’Erlenmeyer de 25 cc. Le liquide doit être en couche mince (3 mm. de haut), les fioles sont bouchées au caoutchouc et paraflinées. A 37° le maximum de culture est observé au bout de 10 à 14 jours. On effectue alors les repiquages. Les cultures ainsi obtenues ont servi à P. Giroud et H. Pevtz à préparer un Yaccin vivant à partir du virus murin. Les cultures sont desséchées et enrobées dans du jaune d'œuf, suivant la méthode de Laigret. Ce vaccin n'a été employé en France que chez l'animal. En Amérique, cette technique sert à préparer des émulsions formolées de rickettsias que l’on utilise comme vaccin.

Kliger et Aschner, en utilisant comme matériel d’inoculation du milieu de culture précédent les rickettsias d’intestin de poux, ont préparé un vaccin formolé qu'ils ont essayé sur l’homme. Les doses à inoculer sont de 0 cc 5, 1 cc, 1 cc à 5 jours d'intervalle.

__.b) La méthode de Breinl, adaptation au virus typhique de la technique de Li et Rivers, utilise comme milieu un mélange de liquide de Tyrode (3 cc), de sérum de lapin ou de cobaye (1 cc} et d’une suspension de fins fragments d’embryon de poulet de dix jours. La développement se fait à 35°. Il est maximum au bout de 3 jours. La culture ñe réussit qu'une fois sur trois. D'où la nécessité de faire des séries importantes. Cette méthode n’a pas permis de préparer un vaccin tué.

c) La culture des rickettsias dans l'œuf a été essayée suivant diverses techniques dérivées de la technique générale de Goodpasture: Elle à été réalisée par Zinsser, Castaneda et Zia, Wenekebach, Bruynoghe (1936) et Jardin, Barykine (1938), sur membrane chorio-allantoïdienne de l'embryon de poulet. Les rickettsias conservent leur virulence par passage. On peut obtenir des vaccins for-

se

molés à partir de ces cultures. Mais leur rendement reste faible. Cox a amélioré le rendement en utilisant des œuîs incubés à 39° depuis 4 à 6 jours, puis placés à 35°. Ce sont les suspensions de jaune d’œuÎ qui sont le plus riches en rickettsias. Comme matériel pour la préparation du vaccin, on emploie le sac vitellin, la chorioallantoïde et l'embryon d’œuf inoculé. Après lavage à l’eau physiologique, ces organes sont séchés et broyés. On prépare des suspensions phénolées (à 0,4 %) ou formolées (à 0,1 %). Des vaccins de ce type ont été utilisés contre le typhus murin mexicain en Amérique. |

d) Zinsser, Fitz Patrick et Wei ont utilisé un milieu nouveau à base de gélose et de tissu. On ajoute à une partie de gélose à 3 %, une partie du mélange suivant :

Solution de liquide de Tyrode à double concentration (mais dont le taux de bicarbonate est inférieur à 1 gr. par

D ee Meter 300 ec Sérum de cheval ou de bœui .......... 200 cc Solution de rouge de phénol à DOS E2AG EC

Le milieu est réparti en tubes de gros diamètre. Le pH doit être de 7,4 à 7,6. |

On emploie comme tissu la vaginale de cobaye, les embryons de souris ou de poulets. Comme matériel infestant, on emploie pour le typhus murin la vaginale de cobaye au début de la réaction scrotale, pour le typhus épidémique la vaginale de cobaye au 6% et 7° jour après l’inoculation. Pour l’'ensemencement, les tissus neuls sont laissés en contact pendant 1 heure avec les tissus contaminés pendant 10 minutes environ. Puis, on répartit sur les milieux. Les repiquages sont effectués tous les 6 à 10 jours. Au début il faut 1 tube ancien pour ensemencer 3 tubes. Par la suite, 1 tube permet d’en infecter 6.

Les suspensions de rickettsias des cultures ainsi obtenues, formolées à 0,3 % constituent un vaccin qui a été obtenu en Amérique. | ;

Mais tous ces procédés de culture in vitro, sont difficiles à mettre en œuvre, et ne permettent pas d'obtenir de grandes quantités de rickettsias. Tels ont permis des essais intéressants au laboratoire, mais n’ont pu jouer de rôle important au point de vue pratique.