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sérum qui, malgré son apparence normale, n’est plus soluble dans l’eau.

» Ce sérum, qui conserve ses propriétés spécifiques, offre l'avantage d’être bien supporté par les animaux en état d’anaphylaxie. Dans leur trachée, par exemple, on peut leur injecter des doses considérables : autant qu’il peut en être supporté sans apparition de troubles respiratoires. L’injection endoveineuse est dangereuse du fait de la formation possible d’embolies.

» Lorsqu'on laisse au repos une émulsion de ce sérum dans l’eau, ïl se forme deux couches : une inférieure, contenant les matières albuminoïdes, l’autre liquide, limpide et presque incolore. 0,5 de sérum insolubilisé étant mis en présence en suspension de 10 cm3 d’eau, on peut séparer, après vingt-quatre heures, 6 em de liquide limpide, qui, évaporé dans le vide, donne un résidu égal à la dixième partie environ du sérum qu'on a introduit. Le sérum total est peu anaphylactisant, et sa partie liquide, pauvre en protéines, l’est encore bien moins. Or, cette partie liquide contient à un haut degré les propriétés antitoxiques, et il semble que la plus grande partie de l’antitoxine ait diffusé dans la couche. Ce sérum ainsi préparé et épuré par la coagulation ne détermine plus de choc chez le cobaye anaphylactisé. »

P. Sédeillan et Loiseleur (Société de biologie de Lyon, 1926) recommandent le procédé suivant pour obtenir du sérum fortement désalbuminé (sérum antitoxique) :

« Dans un sérum acidifié à pH 4,7, on réalise une précépitation fractionnée des protides avec des concentrations de NaC1 convenable ». On peut séparer une fraction qui renferme la majeure partie ide l’antitoxine quand on a enlevé les lipoïdes du sérum par agitation avec 5 p. 100 d’un mélange d’éther et de chloroforme, la précipitation est obtenue avec des quantités plus faibles de NaCI. L’antitoxine sera précipitée, par exemple, entre les concentrations de 10 à 18 p. 100. De la teneur variable en lipoïdes dépend la concentration en

NaCI1 nécessaire pour faire floculer les protides. Pour 5 cms

de sérum antidiphtérique, la précipitation de l’anatoxine commençait soit à 48 p. 100, soit à 21 p. 100, à 25 p. 100; elle entraînait au moins les deux tiers de la substance active.

Pour concentrer et purifier le sérum, il faut entraîner à pH 4,7 les protides par la quantité de NaCI qui précipite la totalité de l’antitoxine. Centrifuger trente minutes. Mesurer le liquide clair qui contient toute la sérine et le remplacer par de l’eau; le coagulum se redissout. On le traite par 5 p. 100 d’éther-chloroforme; on centrifuge, on évapore le liquide aqueux plus ou moins laiteux et on le ramène à la concentration en NaCI initialement employé. Le culot recueilli par une nouvelle centrifugation renferme l’antitoxine. On Île lave deux fois à l’eau, ce qui enlève le NaCI sans dissoudre sensiblement d’antitoxine, puis on le met en solution. A pouvoir immunisant égal, ce sérum a perdu 56 p. 100 de matières albuminoïdes.

Ramon, dans une note parue dans la Presse médicale en 1926, reprend la question de la purification des sérums. Il critique les méthodes générales de purification habituelles par le sulfate d’ammoniaque (Pick et Gibson), par le sulfate de soude (Brunner et Bauzhal), par le sulfate de magnésie (Atkinson et Brodie) :

« Toutes ces méthodes, dit-il, ne visent qu’à précipiter l’euglobuline, qui n’est qu'une partie de la séro-globuline. De même, les méthodes de précipitation pratiquées par Ruppel par l’osmose électrique, celles de l’ultra-filtration de Henseval, celle de la dessiccation et coagulation de Besredka, le procédé à l’éther de Piettre, tous ces procédés, s’ils éliminent une grosse partie de l’albumine, en laissent quelques petites quantités, et l’on sait que les accidents ne sont pas le résultat de la quantité d’albumine qui est contenue dans le sérum; c’est plus une question qualitative que quantitative, car c’est leur qualité d’albumine hétérogène qui les rend nocives pour l’organisme humain.

» Le mieux est donc, après extraction, de traiter les albumines par des agents physiques ou chimiques qui soient sus-

mi ip ue

ceptibles d'en modifier la qualité et d’en effacer « leur cachet d’espèce. »

Il conclut, comme tous les autres, à l'efficacité de ces sérums à titre préventif, mais à leur moindre valeur quand on en use dans un but thérapeutique. |

Savino, à la Sociëté de biologie (1932), estime que les sérums désalbuminés sont susceptibles d’atténuer les chocs sériques, à la condition que leur épuration soit satisfaisante. - Voici ce que dit Savino dans son rapport (Purification des sérums antitoxiques pour éviter le choc sérique [Compte rendu de la Société de biologie du 41 juillet 1932, p. 827]) : « L’injection endoveineuse de sérum de cheval chez l’homme produit des troubles que l’on englobe sous le nom général de choc sérique. Après quinze à quarante-cinq minutes, le choc survient, et dure dix à quinze minutes, avec élévation thermique brusque de 2 à 5 degrés, courbature, sueurs profuses, vaso-dilatation périphérique, tachycardie, quelquefois des troubles psychiques, augmentation puis diminution de la coagulabilité du sang. »

Selon Kyes (Journ. of Immunol, 1927, t. 14, p. 123), il suffit de 0 cm? 5 de sérum pour produire presque invariablement le choc chez l’homme. Pour éviter les accidents, on conseille de pousser lentement les injections endo-veineuses (Park, Journ. of Immunol, 1924, t. 9, p. 17).

Felton (Journ. Infect. Dis., 1930, t. 43, p. 543; Journ. Amer. Med. Assoc., 1930, t. 9%, p. 1893) considère ces symptômes comme liés à des lipoïdes et des substances phosphorées du sérum, précipitables en portant, par exemple, le sérum antipreumococcique à pH 4,7 en présence de nitrate de sodium. Cependant, le sérum antipneumococcique que nous avons préparé en éliminant ces substances par son procédé produit toujours des chocs sériques

Pour éviter le choc, nous avons purifié les sérums. Les globulines sont préparées selon Sordelli et Ferrari (technique - inédite) pour concentrer Île sérum. À 1 volume de sérum on ajoute 1/2 volume d’eau et du sulfate de soude jusqu'à con-

Lévy. 4

centration de 22 p. 100 de sel anhydre (soit, pour 1 litre de sérum dilué, 700 grammes de sulfate de soude cristallisé). On chaulle à 45 degrés pendant quinze minutes en agitant; on filtre, sur papier plié, à l’étuve à 40 degrés; on lave avec du sulfate sodique à 22 p. 100 à 40 degrés sur le même filtre; on laisse au repos douze heures. On exprime les papiersfiltres, on lave avec de l’eau pour dissoudre le précipité et l’on soumet le tout à la presse dans de la toile; tous les liquides sont réunis. À 0 degré, en quelques jours, le sulfate de soude cristallise, le liquide surnageant contient les antitoxines. On sépare les cristaux par filtration sur toile. Les cristaux sont dissous dans de l’eau jusqu’à 22 p. 100 de sel anhydre: on précipite ainsi la globuline englobée, laquelle est traitée comme précédemment.

La totalité des globulines est ainsi obtenue en une solution aqueuse qui contient 1 p. 100 de sulfate de*soude. On dialyse en chambre froide sur celotix ou cellophane en présence d’eau distillée, jusqu'à ce que celle-ci n’entraîne plus de sulfates, ce qui est obtenu après quelques jours; il est convenable d'ajouter du chloroforme au sérum qui dialyse pour empêcher l’altération microbienne accidentelle. À la solution des globulines on ajoute du nitrate de soude jusqu’à une concentration de 0,4 p. 100 et l’on porte à pH 4,7 par addition acétique normal; ainsi précipitent des lipoïdes, des substances phosphorées, du cholestérol et très peu d’antitoxine; on sépare le précipité avec la supercentrifugeuse Sharpless. 100 litres de sérum fournissent 250 grammes de ce précipité.

Le liquide obtenu contient toute l’antitoxine; on le porte à pH 6,6 ou 6,8 avec NaOÏH 0,1 normal, avec du rouge de phénol comme indicateur, puis on dilue dans 10 fois son volume ‘d’eau distillée saturée d’anhydride carbonique. On laisse une nuit au repos à la chambre froide, on décante le liquide; le précipité est séparé à la supercentrifugeuse Sharpless. Le précipité contient 0,5 p. 100 des antitoxines, que l’on perd. Du liquide clair surnageant on précipite les globulines avec du sulfate de soude à 22 p. 100. Le liquide obtenu

part MR

après leur redissolution et la cristallisation du sel est filtré sur bougie Berkefeld.

On obtient ainsi un sérum clair qui se trouble rarement et qui contient 12-14 p. 100 de protéines et 8.000 unités entitoxiques par gramme de protéine pour les sérums antidiphtérique ou antitétanique. Elles sont constituées par de la pseudo-globuline et l’englobuline solubles après dilution à 1 p. 100 dans l’eau distillée saturée de CO.

Des sérums ainsi préparés ont été employés, par voie endoveineuse, dans 6 cas de tétanos et À cas de scarlatine, à la dose de 70 cm3, quelquefois 100 cm$. Chez un tétanique, nous injectâmes 450.000 unités de sérum antitétanique, soit 560cm3 de sérum en cinq jours. Nous n’avons jamais eu de phénomènes alarmants de choc sérique; quelquefois il y eut ‘une faible augmentation de la température, de la fréquence du pouls et de la respiration. Ces résultats contrastent avec ceux que donne le sérum antipneumococcique, qui contient les englobulines et qui provoque des chocs très intenses.

Nous n'avons, certes, aucune compétence pour juger de la valeur des différents procédés de purification, et nous ne saurions dire si le procédé de Savino est supérieur aux autres. Toutefois, les résultats qu’il fournit ne nous paraissent pas particulièrement démonstratifs.

A deux reprises, en 1931, dans le service de notre Maître M. le Professeur Sabrazès, dont nous étions l’interne, nous avons eu à traiter des malades avec des doses particulièrement importantes de sérum.

Dans un cas, il s'agissait d’un tétanique qui reçut un total de 780 cm de sérum, et qui ne présenta pas le moindre accident sérique (sérum antitétanique de l’Institut Pasteur).

Dans l’autre cas, il s’agissait d’un malade atteint de méningite cérébro-spinale à méningoccoque B avec arthrite suppurée du genou qui reçut 840 cm3 de sérum, 300 cm de sérum antiméningococcique polyvalent, plus 20 cm3 de sérum antipneumococcique, plus 560 cm? de sérum antiméningococ-

Li Ron

cique B. Ce malade ne présenta pas davantage d'accidents sériques.

En 1933, dans le service de M. le Professeur Mauriac, une tétanique reçut, sans dommage, 540 cm de sérum antitétanique.

La question de l’absence de réaction d’un sujet à des doses très élevées de sérum semble plus juger de la « résistance » de ce sujet que de la qualité du sérum.

LES MÉTHODES BIOLOGIQUES DE PRÉVENTION ET DE TRAITEMENT DES ACCIDENTS POST SÉROTHÉRAPIQUES

LES METHODES BIOLOGIQUES DE PREVENTION ET DE TRAITEMENT DES ACCIDENTS POSTSEROTHERAPIQUES

Nous aurons en vue dans ce présent chapitre les méthodes biologiques préconisées dans la prévention ou le traitement des accidents postsérothérapiques.

Nous verrons que le nombre de ces méthodes est relativement considérable, et surtout que, pour une même méthode, tous ceux qui l’ont employée ne sont pas arrivés à des résultats superposables. Tel pense, par exemple, que l’adjonction de sérum de bœuf aux différents sérums thérapeutiques est susceptible d’en atténuer la toxicité, alors que tel autre place au premier rang des sérums toxiques le sérum de bœuf. Tel pense que la réaction intradermique est un test suffisant pour apprécier la sensibilité d’un sujet donné à l’égard d’un sérum donné, alors qu’un autre estime que cette seule manœuvre peut déterminer un état de sensibilité. Ne pouvant adopter de plan logique pour l’exposé de ces différentes méthodes, nous avons autant que possible essayé de les mentionner dans leur ordre d'apparition. Nous les exposerons donc en restant aussi fidèle qu'il se peut à la pensée de ceux qui les ont introduites, essayant d’en discuter les applitations et les résultats en nous basant sur ce qu'il nous fut donné d'observer en appliquant les techniques préconisées par leurs auteurs. :

Ces différentes méthodes s'adressent essentiellement à la prophylaxie de la maladie sérique, c’est-à-dire au traitement des accidents tardifs. En effet, pour ce qui est des accidents immédiats, la méthode de Besredka est un moyen suffisamment sûr et pratique pour être universellement adoptée. Elle prévient sans doute les accidents immédiats, mais n'est pas suffisante pour mettre à l’abri des accidents tardifs.