Solution de soude à 10 p. 100, stérilisée. 4. Solution

Crystall- violet chimiquement pur de

HOMO RER PU le : 0 gr. 10 Had istlléerchaudée 20e ti on (DCE.

Dans le bouillon gélosé n° 1, chaud et liquide, verser la solution n° 2 (tournesol-lactose) ; agiter fortement, puis ajouter une quantité suffisante de solution n°3 (soude) jusqu'à ce que la masse bleuisse légèrement. Ajouter encore 6Gcentimètres cubes de la solution n°3 (soude), puis 20 centimètres cubes de la solution n° 4 {crystall-violet).

Répartir aseptiquement par 200 centimètres cubes en ballons stériles qu'on peut conserver pour les besoins ultérieurs. Au moment de s'en servir, on liquéfie au bainmarie eton verse en boîtes de Pétri de 18 à 20 centimètres de diamètre. Sur ce milieu, le bacille d’'Eberth et les para-

tvphiques donnent des colonies rondes, ressemblant à des gouttes de rosée, incolores ou bleuâtres, quelquefois dentelées légèrement, toujours transparentes ; le B. coli donne des colonies rouges, opalescentes.

20 Milieu d'Endo.

Bouillon peptoné gélosé neutre préparé à la manière ordinaire auquel, fondu à 1000, on ajoute, par litre, 10 centimètres cubes de lessive normale de soude (à 40 p. 1.000), puis 10 grammes de lactose dissous dans 100 centimètres cubes d'eau.

Répartir en gros tubes par fractions de 100 centimètres cubes ou en petits ballons et conserver aprés stérilisation à l’autoclave.

Au moment de l’usage, on fait fondre le contenu d’un ou plusieurs de ces tubes ou ballons et, à chacun d'eux, on ajoute :

Sol. alcool. de fuchsine à 1 p. 10 (filtrée). 0 cc.75

Sol de sulfite de soude à 1 di 10 FES ment préparée), . . : E 2,cc4

Agiter pour mélanger (sans faire de bulles) et couler en plaques.

Le bacille typique donne des colonies incolores, de 3 millimètres de diamètre environ, en 24 heures. Le B. coli donne des colonies rouges opaques. Après 48 heures, les colonies typhiques deviennent roses et deux fois plus grandes que celles de B. coli.

3° Milieu de Chantemesse.

AUS Ha NE NL TR ARE RER TNA RUOMEC Péptone 1 TMiRT RERO PRIS OL 3 gr.

Läctosé:7S ir Re CNRS Nr D ce 2 gr.

Gélase ttes Ms RON NOR ANNE UE 2 gr.

Au moment de l'emploi, liquéfier ce milieu et ajouter pour 10 centimètres cubes, dans chaque tube, avant de couler en plaques :

Acide phénique solution à 3 Dé 100 PP TS IV gouttes. Teinture de tournesol. . . Ne Re Jrcc:

Ce milieu convient surtout à l’isolement des Bact. coli. Il est beaucoup moins favorable que les précédents (et surtout que les suivants) à l'isolement du b. typhique qui est plus sensible que le B. coli à l'acide phénique.

BACILLE TYPHIQUE 330 4° Milieu de Conradi.

RSA dis LS PEN TU 4 4 ET Gr O0 "CC:

Extrait LE 20 4 ET RAAUENTSR URSS TER ITE Len | 3 20 gr. Gélose. . . DÉS urnes ot tits 30 gr.

Stériliser, filtrersur ouate. Ajouter :

Sol. stérilisée de peptone Witte à 10 p. 100. 100 cc.

b) Acidifier le milieu à 3 p. 100. Pour cela, prélever un échantillon et chercher combien il faut ajouter de lessive normale de soude ou de solution normale d'acide phosphorique, pour obtenir une acidité telle que 100 centimètres cubes soient neutralisés à la phtaléine du phénol par 3 centimètres cubes de solution normale de soude.

c) À 1.500 centimètres cubes de ce milieu acidifié, ajouter :

Vert brillant crist. (ORAREES Va Aa 14000500; te 10 cc.

Acide picrique sol. aq. à 1 p. SA URLS 10cc.

Stériliser et répartir en tubes ou en boîtes. Le B. coli ne pousse que difficilement. Les colonies typhiques sont vert clair, transparentes, aplaties et elles apparaissent grenues à la loupe. Les paratyphiques sont vert jaunâtre, plus proéminentes.

5o Milieu de Lüffler-Schuster au vert malachite-safraninebleu de méthylène.

On prépare 1 litre de bouillon gélosé ordinaire (ou Liebig) avec 3 p. 100 de gélose. On y ajoute, après neutralisation aussi exacte que possible (au tournesol) par une solution saturée de carbonate de soude, et après dissolution de la gélose :

Sol. décinormale de soude. . . . . . . 5 cc.

SoltaB10/prct00 de nutrose 0. #28. «MA T007cc.

On porte pendant 20 minutes à 1000.

On décante par repos, on sépare le précipité et on répartit par doses de 100 centimètres cubes dans une série de vases d'Erlenmeyer ou de ballons à fond plat qu'on stérilise et conserve d'avance.

À chaque dose de 100 centimètres cubes de cette gélose fondue à 50° et décantée, on ajoute :

Bile de bœuf filtrée et stérilisée. . . d cc: Sol. aq. à 0,2 p. 100 de safranine pure de Grübler. . reg, Sol. aq à 1 p. 100 de bleu de e méthylène de Hôchst. . . EC OU 0 cc. 1 d’une sol. aq. à 0,5 p. 100 stérilisée d’Azobleu.

Sol. aq. sat stéril. de vert malachite cristallisé (chimiquement pur, chlorzinkdoppelsale sde :Hôéhst RE 2 à 4 cc.

ou :

1 ce. 7 d'une sol. aq. à 0.2 p. 100 stérilisée de vert malachite ordinaire.

Verser après mélange en larges boîtes de Pétri.

Sur ce milieu, de couleur violet bleuâtre, ensemencé en surface (au pinceau) avec une goutte de dilution de déjections, le bacille d’Eberth donne des colonies bleues, irrégulières, molles et minces, à reflets métalliques très caractéristiques.

Le paratyphique B donne des colonies identiques.

Le paratyphique À, des colonies rondes, transparentes, bleuâtres, sans éflets métalliques.

Les microbes du groupe Gärtner et le B. coli donnent des colonies roses ou rouges. |

6° Milieu au bleu de Chine (Chinablau), de Ludwig Bitter.

À 100 centimètres cubes de gélose-peptone neutralisée au tournesol (bouillon gélosé à 2 ou 3 p. 100 de gélose) et préalablement fondue au bain-marie, on ajoute 2 grammes de lactose. On laisse fondre quelques minutes, en agitant, à 1000, puis on introduit dans le ballon 9 gouttes de solution aqueuse saturée de bleu de Chine. On peut y ajouter aussi, mais les avis sont partagés sur les avantages de cette addition, 2 cc. 5 de solution aqueuse à 0,1 p. 100 de vert malachite ordinaire (ou 1 centimètre cube de solution à 0,1 p. 100 de vert malachite cristallisé pur). On stérilise 10 minutes à 100° et on verse dans des boîtes de Pétri (3 boîtes pour un essai sur matières fécales ; 2 boîtes pour l'urine). On laisse sécher à létuve pendant quelques heures pour qu'il n'y ait pas d’eau de condensation à la surface. Pour cela, on retourne les plaques sens dessus dessous. On ensemence une première plaque en étalant sur la moitié de

BACIELENTYPHIOUE 337

celle-ci, gros comme une lentille de déjections avec une spatule de platine, et on essuiela spatule sur l’autre moitié de la plaque. On frotte avec la même spatule, sans reprendre de semence, la deuxième, puis la troisième plaque, et on porte à l’étuve à 370 pendant 24heures.

Les bacilles qui forment des acides donnent des colonies bleues ; ceux qui ne forment pas d'acides ou qui sont alcaligènes donnent des colonies incolores ou jaunâtres. Ces dernières seules sont soumisés à l’épreuvede l’agglutination.

7° Milieu de Schmitz (gélose-sérum-rouge Congo).

La préparation de ce milieu est très économique. Elle dispense d'employer dela viande. On recueille à l’abattoir, sans précaution particulière, du sang de bœuf ou de mouton. On le laisse coaguler. On décante le sérum qu’on utilisera à part, comme il sera dit plus loin. Le caillot est mélangé au double de son poids d’eau, grossièrement délayé et soumis à la cuisson pendant 5 à 10 minutes, puis filtré sur un linge d’abord et ensuite sur ouate hydrophile. On ajoute à ce liquide 20 grammes par litre de peptone. 20 grammes de nutrose (ou de Tropon) et 60 grammes de gélose. On fait fondre celle-ci et, lorsqu'elle est bien dissoute, on ajoute, à la masse, un volume égal du sérum primitivement séparé des caïllots. On répartit par 100 centimètres cubes, dans des flacons, en filtrant encore sur un entonnoir à ouate hydrophile et on stérilise à 100° seulement pendant une heure

On dissout, à chaud, aux environs de 95°, dans chacune de ces doses de 100 centimètres cubes de gélose-sérum, 1 gr. 50 de lactose et 0 gr. 30 de rouge congo. La dissolution est très rapide. On peut aussi ajouter de la caféine à ce milieu (mais si l’addition de caféine a pour eflet d'empêcher le développement du Bact. coli, elle gène beaucoup celui du b. typhique,. On prépare alors une solution de 1 gramme de caféine dans 10 centimètres cubes d’eau (celle-ci se dissout complètement dans ce volume d’eau bouillante, tandis qu’elle exigerait 80 centimètres cubes d’eau froide). On introduit 6 centimètres cubes de cette solution de caféine dans chaque dose de gélose-sérum. On coule aussitôt après dans une grande boîte de Pétri, sans stériliser de nouveau pour ne pas modifier le lactose.

On ensemence ces plaques, lorsqu'elles ont fait prise,

MICROBIOLOGIE 29

avec une anse de platine de déjection délayée dans 200 centimètres cubes d’eau salée physiologique.

Sur ce milieu le Bact. coli ne pousse que difficilement, en donnant des colonies de couleur bleu noirâtre, tandis que déjà après 24 heures les colonies rouges de bacille typhique sont très apparentes.

Chandelier en a simplifié très heureusement sa préparation. Il emploie du bouillon gélosé ordinaire (à 8 p.100 de gélose), lactosé à 1,5 p. 100, exactement neutralisé au tournesol, réparti en ballons de 100 centimètres cubes et stérilisé à 119°.

A 100 centimètres cubes de ce milieu, préalablement fondu au bain-marie à 50°, on ajoute :

Sol. de soude à 0 gr. 5 p. 100, stérilisée. 10 ce.

Puis sol. aq. stérilisée de rouge congo à

Sspad00 EE. ie Cri 2 hroites lus oi ARMES

Puis on coule en grandes boîtes de Pétri stériles dont le couvercle est garni d’une rondelle de papier filtre, sur lequel s'effectuera la condensation de la vapeur d'eau dégagée pendant la solidification de la gélose. On ensemence ensuite et on porte à l’étuve.

Les colonies typhiques sont apparentes au bout de 24 heures, sous l'aspect de petites masses aplaties, sèches, écailleuses, cupuliformes et de couleur rouge foncé, les colonies de B. coli se détachent en bleu foncé sur le fond rouge. Les colonies de bacilles dysentériques de Shiga et de Flexner donnent des colonies de même aspect et de même couleur que le bacille typhique.

Ce milien est, avec celui de Lôffler -Schuster, le plus recommandable pour l'isolement du bacille typhique. C’est incontestablement celui qui, en l’état actuel de nos connaissances, fournit les meilleurs résultats.

B. — Milieux différentiels permettant d'identifier le bacille typhique, les paratyphiques A et B et le Bacterium coli.

1° Lait tournesolé. — Répartir du lait très frais et non

BACILLE TYPHIQUE 339

écrémé dans des tubes, par 8 centimètres cubes environ. Stériliser 15 minutes à 110°, ajouter au moment de l'emploi la teinture aqueuse de tournesol à 2 p. 100 (6-8 gouttes dans chaque tube). Ensemencer avec une goutte de culture de bouillon. |

2° Petit-lait tournesolé (Petruschky). — Porter à 40° du lait écrémé, ajouter de la présure en pastilles et laisser coaguler, à la température du laboratoire, pendant 2 heures. Jeter lecaillot coupéen morceaux sur un linge fin. Alcaliniser le filtrat avec de la soude jusqu’au rouge franc de la phtaléine. Ajouter 2 grammes de CaCl? cristallisé par litre. Porter 15 minutes à 110°. Filtrer sur papier jusqu'à ce que le liquide passe clair. Vérifier que la réaction est violet foncé au tournesol. Ajouter une solution aqueuse de tournesol (2 p. 100) jusqu'à ce que la teinte soit assez foncée. Filtrer sur bougie Répartir. Eprouver (deux jours à l’étuve, puis huit jours au laboratoire). Capuchonner. Ensemencer avec une goutte de culture en bouillon.

3° Gélose au sous-acétate de plomb. — Préparer des tubes de gélose ordinaire avec 5 centimètres cubes de liquide. Au milieu chaud, ajouter 0 cc. 1 de sous-acétate de plomb en solution au dixième, mélanger, laisser refroidir.

Ensemencer largement en partant d’une culture sur gélose inclinée. Le fil de platine chargé doit être introduit entre la paroi dutube et le milieu au plomb. Faire ainsi plusieurs traits nets.

4° Gélose au rouge neutre. — Préparer la gélose ordinaire. mais avec seulement 0,4 p. 100 de gélose, de façon que le milieu soit à peine solide (gelée tremblante). Ajouter à la fin 2 grammes de glucose par litre et la quantité de rouge neutre juste suffisante pour teinter le milieu en rose très clair, soit environ O0 ec. 75 de la solution au centième pour 100 centimètres cubes. Répartir en tubes droits.

5° Bouillon glucosé carbonaté :

Botllonnormalin les RC tiD0 ec.

PONS ME st. 2 LS RE 2 gr.

Carbatatedechaux:-. 1, VAT. 1 pincée.

Répartiren tubes et stériliser 30 minutes à 1150.

6° Bouillon lactosé carbonate :

Même préparation en remplaçant le glucose par du lactose.

7° Artichaut. — On coupe des fonds d’artichauts en tranches de 2 à 3 centimètres de longueur sur 1 centimètre d'épaisseur. On les stérilise à 120° pendant 20 minutes dans les tubes à essai. Ensemencer en une strie médiane.