CHAPITRE XXXVII
A. — Coloration. Diagnostic différentiel. Recherche des porteurs de germes.
Le bacille de Loeffler peut être mis en évidence dans les fausses membranes par l'examen des frottis et par la culture.
EXAMEN DES FROTTIS. — Etaler un fragment de fausse membrane sur une lame. Fixer par l’alcool-éther (parties égales). Colorer par la méthode de Gram. Après lavage à l’eau, colorer par de la fuchsine diluée qui teinte en rouge les microbes ne prenant pas Je Gram.
Le bacille diphtérique se présente en amas de bâtonnets à bouts arrondis, légèrement recourbés, renflés en poire ou en massue et colorés en violet foncé.
CULTURE. — Le milieu de choix, pour l'isolement, est le sérum de bœuf ou le sérum de cheval coagulés.
On doit ensemencer avec la spatule par stries parallèles sur toute la surface du tube. Ensemencer trois tubes sans recharger la spatule pour avoir des colonies bien isolées. Les tubes sont placés à l’étuve à 37°. Le premier examen peut être fait au bout de 18 heures. Ne pas donner de réponse négative avant 48 heures.
Les colonies de b. diphtériques sont rondes, à bord nets, de couleur grisâtre. Si on les regarde par transparence, le centre est plus sombre que la périphérie. Elles sont généralement impures. Si l’on veut rechercher la virulence du bacille étudié ou essayer les méthodes d'identification du bacille, il faut purifier les germes en diluant une parcelle de colonie dans un tube de bouillon et en faisant un isolement sur sérum coagulé.
CARACTÈRES DES CULTURES. — pH limites : 6,0-8,3,
MICROBIOLOGIE 25
pH optimum := 7,3-7,6. En bouillon alcalin, granulations le long des parois et au fond du tube ; le milieu reste clair. Après 24-36 heures, un voile se forme assez souvent à la surface du bouillon.
Sur gélose ordinaire, culture abondante, colonies plus petites que sur sérum coagulé.
Sur gélatine, culture lente.
Sur pomme de terre, culture presque invisible.
TYPES DE BACILLES DIPHTÉRIQUES. — On peut distinguer, au point de vue de la forme, trois variétés de bacilles diphtériques :
1° Les bacilles longs, de 5 à 7 & de long;
20 Les bacilles intermédiaires ou moyens, de 3 à 4 de long ;
3° Les bacilles courts, de 1 à2 v environ.
La plus grande partie des bacilles provenant des angines diphtériques se classent dans les deux premiers groupes. Parmi eux, les bacilles longs représentent les races les plus toxiques. Les bacilles courts, rares dans les angines, sont fréquents dans les croups.
FAUX DIPHTÉRIQUES. BACILLE D’HoFFMANN. Bacille de forme courte, ramassée, prenant le Gram (forme losangique, en fer de lance ou en coin). Colonies plus blanches d'aspect que les colonies de dipthériques, luisantes. crémeuses, à contours moins réguliers. Par transparence, leur centre n’est pas opaque : elles sont plus pâles et plus transparentes que les colonies diphtériques.
Le Corynebacterium cutis commune, étudié par Ch. Nicolle, a de très grandes analogies avec le bacille diphtérique vrai: ilprésente des granulations polaires colorables par la technique de Neiïsser, il fait fermenter le glucose, mais il fermente aussi le saccharose, ce que ne fait pas le bacille diphtérique vrai.
(COLORATION SIMPLE. — Prend le Gram.
ACTION DE L'ALCOOL ABSOLU. — Le bacille diphtérique, en culture sur sérum coagulé, après 24-36 heures de séjour à l’étuve, traité par la méthode de Gram originale, n’est jamais granuleux. Cet aspect est dû à l'emploi du violet phéniqué, du cristal violet, du bleu de toluidine, ou d’un décolorant trop énergique, ou à l'action trop prolongée de l'alcool absolu.
Si, dans la méthode de Gram on fait agir l'alcool absolu pendant 10-15 minutes, les bacilles des cultures âgées de 24 heures se décolorent et ne montrent plus que quelques grains colorés dans un corps bacillaire à peine visible. Dans les mêmes conditions, les faux bacilles diphtériques de la gorge restent uniformément colorés.
COLORATION DES CORPUSCULES RS : Bleu de méthylène potassique de Loeffler :
Sol. saturée de bleu de méthylène dans alcool à 90°.. . . . 30 ce. Solution de potasse à 1/10.000. PR tte | TON NMEUU CC
Colorer quelques minutes, laver à l’eau et traiter rapidement par la liqueur de Gram. Laver. Les granulations sont noir verdâtre et les bacilles verdâtres.
COLORATION AU BLEU DE Roux :
Violet dahlia.
1 gr.
Vert de HAE D PRE Forte 2 gr.
Aloe moe LE 0h E etai Pate ETS 10 gr.
au AD MES MINE CORRE 7 0.0 90 gr.
Colorer une minute. Laver, passer dans la vésuvine à 1/250. Les granulations sont bleu foncé, le corps bacillaire est jaune.
