III. —- Diagnostic par la recherche des corps de Negri

On peut l’effectuer par l'examen à l’état frais de la corne d'Ammon !. Pour isoler celle-ci, après-avoir dégagé les hémisphères cérébraux de la boîte cranienne, on coupe transversalement l’un d'eux jusqu’au corps calleux qu'on soulève avec le trigone et on pénètre dans la portion temporale du ventricule latéral. Le plancher du ventricule latéral est alors à découvert et la corne d’Ammon apparaît avec sa forme caractéristique. On y fait, avec un bistouri fin, une coupe mince perpendiculaire à sa surface et, avec une aiguille, on recueille une parcelle de substance grise de la circonvolution, C’est cette parcelle qu'on dissocie sur un porte-objet, dans une goutte de solution ‘très diluée d'acide acétique (1 : 10.000) et qu’on examine à l'état frais ; ou bien on fait des frottis qu’on sèche immédiatement et qu'on fixe avant de les colorer par l’une des méthodes suivantes :

(1) Si l'on nedispose pas de la corne d’Ammon, les recherches doivent porter sur des fragments d'écorce cérébrale et du cervelet. L'étude de la moelle allongée et des ganglions spinaux (ganglions cervicaux, ganglion de Gasser) fournit des résultats moins constants.

a) Méthode de Mann. — 1° Coupes. — Fixer le tissu de la corne d’Ammon dans le liquide de Zenker et enrober dans la paraffine. On peut fixer plus rapidement les minces fragments de tissu par immersion dans 15 centimètres cubes d’acétone à la température de 37° pendant 30 à 40 minutes. On les plonge ensuite dans une paraffine fondue à 95° pendant 1 heure à 1h. 15, puis les pièces sont montées et coupées.

Colorer dans la solution suivante, 12 à 24 heures (30 miautes suffisent pour les frottis) :

Sol. aq. à 1 p. 100 de bleu de S SMS : 35 cc. Sol. aq. à 1 p. 100 d’éosine. +. . è 39 cc.

Eau distillée. . . toi I OUPGE

Laver rapidement à l’eau. dpi quelques minutes dans l’alcool absolu. Immerger environ 10 minutes, jusqu’à coloration rose dans : |

Alcool absolu. . . te 30 cc.

Sol. à 1 p. 100 de soude caustique dans l'alcool absolu. : : X gtt.

Laver rapidement à l'alcool absolu. Plonger 1 à 2 minutes dans l’eau jusqu’à ce queles coupes deviennent bleuâtres. Plonger 1 à 2minutes dans l’eau additionnéede 2 ou 3 gouttes d'acide acétique p. 100. Replonger dans l'afcool absolu. Xylol. Baume.

Les corpuscules de Negri sont colorés en rouge violet foncé, les nucléoles des cellules nerveuses en rouge, les noyaux et le tissu cellulaire en bleu foncé, les globules rouges en rose pâle.

2° Frottis. — On prépare plus commodément de simples frottis par écrasement d’une parcelle de substance grise de la corne d’Ammon entre deux porte-objets. Après dessiccation rapide à l’étuve, on plonge les lames encore humides dans l'alcool méthylique pur, puis dans un mélange à parties égales d'alcool absolu et d’éther. On a préparé d’avance des colorants ci-après (Méthode de Lentz) :

Han Eôsine extra B Gé HŒCHSI. UNE SN 0 gr. 5 * j Alcool! à 60°. . ARTS IUTU NF CMLOOIER B. Bleu de Méthylène B de Haehét, Ro al: Sat... 30 cc. à Sol. de potasse de 0 gr. 01 p. 100. . . . . … 100 cc. €. | Alcool absolu. . 30 ce.

‘ { Sol desoude caustique à 1 p. 100 dans alcool absolu. V git. D. { Alcool absolu. . ” #htale he à Bei lue 30 cc.

* { Sol. acide acétique à SUD. 104 PER ARTE 1 gtt.

On verse, sur les lames porte-objets, quelques gouttes de la solution A. On laisse en contact 1 minute. Laver à l’eau. Colorer ensuite par B, 1 minute ; laver à l’eau. Essorer avec papier buvard. Différencier par l’alcool sodique C, jusqu’à ce que la préparation apparaisse faiblement teintée en rose, puis par l'alcool acétique D jusqu'à ce que les noyaux bleus deviennent apparents.

Laver rapidement à l’alcool absolu et monter, ou examiner immédiatement dans une goutte d'huile à immersion.

On peut encore employer la technique suivante qui rend les « corps de Négri » plus apparents dans leurs détails de structure :

Colorer dans À pendant 1 minute. Laver à l’eau. Colorer dans B pendant 1 minute. Laver à l'eau. Traiter par la solution de Gram-Lugol 1 minute. Laver à l’eau. Différencier par l'alcool méthylique jusqu'à ce que la préparation apparaisse rose. Laver à l’eau Recolorer par la solution B, 30 secondes. Laver à l’eau. Essorer au papier buvard. Passer successivement dans les alcools alcalin et acide C et D, puis, rapidement, dans l’alcool absolu et monter.

b) Méthode de Negri. — Traiter pendant 10 minutes les coupes ou les frottis préalablement fixés dans l'alcool absolu par : |

ÉOsile D ICTUDIED Re ER EU EE Re 1 gr.

Jodeeuipailetes ei RC Re (are lodtidémpoiisshins. 100 AU PÉTER EMEA Ahoren PARTIS nl OL ET chan mlUD ec.

(Dissoudre d'abord l'iode et l’iodure de potassium dans quelques centimètres cubes d’eau et diluer ensuite dans 50 centimètres cubes. D'autre part, dissoudre l’éosine dans 50 centimètres cubes d'eau distillée. Mélanger, puis filtrer. Conserver en flacon bouché à l’émeri.)

Après coloration, laver à l’eau distillée. Traiter 5 minutes par une solution aqueuse à 0 gr. 1 p.100 de bleu de méthyle. Laver à l’eau distillée. Différencier dans l'alcool à 95. Laver à l’alcool absolu. Sécher. Eclaircir et monter au baume. Les « corps de Negri » apparaissent brillants, rouge violacé, sur le bleu du protoplasma et des noyaux. Les hématies sont roses. Les corpuscules basophiles des vacuoles des « corps de Negri » sont bleus.

c) Méthode de Manouélian. — Enlever, à l’aide de ciseaux très fins, de très minces tranches de corne d’Ammon et les immerger dans :

ATÉLORES 2 antenne ee UC Teinture”d'10d6808 CEA PARENT RE ORNE VI gtt.

Après 30 minutes, renouveler l’acétone sans iode, puis au bout d’un quart d’heure, inclure dans la paraffine. En une demi-heure, l'inclusion peut être achevée et les coupes sont colorées, par la méthode de Mann, de 15 minutes à deux heures, à la température de 38 à 400.

On peut fixer les frottis de corne d'Ammon directement sur lame par l’acétone iodé pendant quelques secondes. On lave à l’eau courante pendant une minute, on colore pendant un quart d'heure à chaud par le Mann et on différencie par l'alcool sodique, l'alcool absolu, etc.

d) Méthode de Nissl. — (Pour l'étude des éléments cellulaires du tissu nerveux.)

Colorer pendant un temps variable, de 1 à 2 heures, dans le bleu polychrome de Unna. Différencier par le mélange suivant (dit de Gotha) :

Alcool:absolu: URSS Let ur entente! 16 vol.

AYIOL ES EPS PR ENT ER RE 5 vol.

Essence de Cajeput. 4 vol.

Créosote:de-héire LC RE DENTIMENL RITES 5 vol.

Déshydrater rapidement à l'alcool absolu. Xylol. Baume. Les granulations des cellules nerveuses sont colorées en bleu, le tissu conjonctif en vert.

NOTA. — P. Remlinger a montré que le virus rabique est filtrable et diffusible (par exemple dans la glycérine pure et dans le liquide de Locke). Il n’est pas influencé par la centrifugation.

e) Méthode de J. Manouélian et J. Viala (pour la recherche de l'Encephalitozoon rabiei, parasite de la rage ?),

Pour la fixation, utiliser le sublimé alcoolo-acétique de Gilson modifié ou le sublimé de Dominici.

Le premier mélange est composé de parties égales d’acétone pure, chloroforme et acide acétique cristallisable.

On ajoute du bichlorure de mercure en poudre, en excès. Le mélange doit être préparé d'avance. Au moment de s'en

servir, on ajoute goutte à goutte une solution alcoolique concentrée diode en agitant le liquide avec une baguette de verre jusqu’à ce que le fixateur prenne une teinte acajou foncé.

Le liquide de Dominici doit être préparé extemporanément. Ondécante une solution aqueuse saturée de sublimé et l’on verse goutte à goutte, en agitant, de la teinture d’iode jusqu'à teinte orangée.

À 100 volumes de cette solution, on ajoute 12 volumes de formol à 40 p. 100 et 5 volumes d'acide acétique. fl faut avoir soin de maintenir la teinte orangée du mélange en ajoutant encore au besoin quelques gouttes de teinture d’iode.

Les pièces séjournent de deux, quatre, six à douze et vingt-quatre heures dans le fixateur, puis on les transporte dans l’alcool ou l’acétone iodé, avant de procéder à l'inclusion.

Les auteurs recommandent la double inclusion : d’abord à la celloïdine puis à la parafline. Lorsque l'inclusion à la celloïdine est achevée, il faut éviter de durcir complètement la masse collodionnée ainsi qu'on le fait dans la technique ordinaire. La pièce doit être entourée d’une couche légère de celloïdine assez épaisse, qu'on laisse sécher à l'air pendant quelques minutes. Au bout de ce temps, le bloc est mis dans le mélange suivant :

Alcool absolu. . . . . . . . . 500 cent. cubes Cho om EME UT UC 50 cc.

Ce liquide remplace l'alcool absolu dans l'inclusion à la paraffine. Après un séjour de quelques heures, variable suivant les dimensions de la pièce, on transporte celle-ci dans un solvant de la paraffine, toluène, par exemple.

Pour la méthode de Mann, voici comment les auteurs conseillent de procéder :

1° Colorer les coupes pendant quelques heures à 38-40 dans le mélange suivant, préalablement porté à la même température :

Sol. aq. de bleu de méthyle (ne pas confondre

avec bleu de méthylène) à 1 p. 100.. . . 35 cc. poli adidcosite à L'p: 100 00 0. 45 ec.

Fatabliéenr. 56,11 Lee tue 100: cc:

20 Laver rapidementet soigneusement à l’eau de fontaine ; 39 Déshydrater les coupes à l'alcool absolu ; 49 Faire agir la solution suivante :

Alcool ‘absolu EC RENE 30 cc.

Solution de soude, caustique à 1 p. 100. . X gtt.

Attendre jusqu'à ce que les coupes deviennent rouges, mais aussitôt que cette teinte est obtenue, arrêter la différenciation ;

59 Laver à l'alcool absolu afin d'enlever toute trace de soude caustique ;

6° Plonger dans l’eau ordinaire ; des traînées rougeâtres quittent les coupes qui deviennent bleuâtres ;

7° Plonger dans l’eau acidulée par l'acide acétique (2 gouttes d'acide dans 40 centimètres cubes d’eau). Immédiatement les coupes deviennent bleues. Attendre une minute.

Déshydrater les coupes par l’alcool absolu, éclaircir au xylol et monter au baume-acide. Ce baume-acide se prépare en dissolvant le baume de Canada dans du xylol préalablement saturé d’acide salicylique.

Pour les frottis, les fixer humides en plongeant les lames dans les fixateurs dont la composition a été indiquée plus haut. Les y laisser au moins un quart d'heure. Colorer et différencier comme pour les coupes.

B. — TYPHUS EXANTHÉMATIQUE :

Le typhus exanthématique, à sa période de début, peut être confondu avec la grippe, la rougeole, la fièvre méditerranéenne, le paludisme, mais, surtout dans nos pays, avec la dothiénentérie accompagnée d’éruption purpurique.

En présence d’un cas suspect, faire une ponction veineuse pour :

a) Une hémoculture ;

b) Un examen microscopique ;