PRÉPARATION ET TITRAGE DES SÉRUMS
pouvoir bactéricide d'un sérum anti peut être faite in vivo." On effectue alors, dans des tubes à essai stériles, des
mélanges d’une quantité fixe de dilution microbienne
avec des proportions variables du sérum actif. On laisse en
contact, à l’étuve à 379, pendant un temps fixe, — par
exemple 3 heures, —et on inocule 1 centimètre cube de
chacun de ces mélanges sous la peau ou dans le péritoine
d'une série d'animaux sensibles, de même poids.
H. — Titrage du pouvoir bactéricide des sérums antimicrobiens.
(TECHNIQUES DE Jouan Er SrauB, M. Nicoze, FRASEY, DEBaixs ET NicoLas.)
Premier procédé. — On cultive les germes sur gélose. pendant 6 heures à 37°. On les émulsionne dans l’eau physiologique additionnée de bouillon Martin au vingtième, à raison de 1 centigramme de microbes pour 20 centimètres cubes de liquide. On fait alors, en partant de cette première émulsion, une dilution telle qu'elle contienne de 400 à 1.500 germes vivants par 1/20 de centimètre cube. Pour cela on étend d’abord au quart la première émulsion avec l’eau physiologique + bouillon Martin et on porte ensuite 1/20 de centimètre cube de la seconde dilution ainsi obtenue dans 100 centimètres cubes d’eau physiologique + bouillon Martin. On répartit en tubes d’après le schéma suivant :
1° Emulsions telles quelles,
Pour ensemencement immédiat ;
Pour ensemencement après 2 heures à 37°.
29 Emulsions + sérum frais de cobaye (alexine) :
Selon les cas 0 cc. 01, 0 cc. 02, 0 cc. 05, 0 cc. 1.
30 Emulsions + sérum frais de cobaye + sérum normal non chauffé,
On fait autant de séries qu’on a choisi de doses d’alexine.
4 Emulsions + sérum frais de cobaye -+ sérum anti, non chauffé :
220 RÉACTIONS HUMORALES ET HÉMATIMÉTRIE
On fait autant de séries qu'on a choisi de doses d’alexine.
Bien agiter. Ensemencer 1/20 de centimètre cube de la première des émulsions telles quelles. Porter les autres pendant 2 heures à 379, agiter ensuite et ensemencer 1/20 de centimètre cube de chaque tube dans un tube de gélose Martin fondue, que l’on coule en boîte. La répartition homogène des germes est assurée par agitation de la gélose dans la boîte. Après 24 heures, onlit à la loupe. Sile nombre des colonies ne dépasse pas la cêntaine, on les compte individuellement. Lorsqu’elles sont plus nombreuses, on pratique la numération de plusieurs centimètres carrés, au moyen d'un carton perforé. On fait la moyenne et on multiplie par la valeur de la surface, évaluée également en centimètres carrés.
Deuxième procédé. — Dans cette méthode, on se propose d'opérer sur un nombre de germes constant. Pour maintenir ce nombre invariable, il convient d'opérer à la température de 440 qui arrête tout développement microbien, et de faire usage de bouillon Martin régénéré par l’ébullition, milieu qui empêche la diminution numérique des bactéries.
On cultive les germes pendant 6 à 24 heures à 37° sur gélose Martin. On les émulsionne dans le bouillon Martin préalablement bouilli pendant un quart d'heure, puis refroidi, à raison de 1 centigramme par 20 centimètres cubes de liquide, etc., comme plus haut, mais on opère à 440. On ajoute immédiatement le sérum, normal ou anti, et le complément après une demi-heure. On ensemence après une heure, sauf la première des émulsions.
La dose d’alexine est considérée comme bonne lorsque la quantité de germes obtenue après 24 heures avec le premier procédé, ou une heure avec le second, dans les émulsions additionnées de sérum de cobaye, représente au moins le tiers de celle que contiennent les émulsions témoins, après le même temps.
Un sérum normal ou anti est considéré comme bactéricide lorsque la quantité de germes obtenue en fin d’expérience avec les émulsions additionnées d'alexine et de sérum représente au plus le cinquième de celle que contiennent, après le même temps, les émulsions témoins additionnées d’une dose identique d’alexine.
