MÉTHODES D’EXAMEN DES BACTÉRIES

liquides ou solides, propriétés fermentatives ou toxiques, réactions expérimentales, etc., caractères dont le nombre et la précision s’augmentent chaque jour. Le développement des bactéries dans les organismes vivants détermine dans le sérum des hommes et des animaux des modifications profondes; l’étude des réactions de ce sérum nous est d’un grand secours pour le diagnostic bactériologique (Réaction de Pfeiffer, de Gruber et Durham, sérodiagnostic de Widal).

Méthodes d’examen des bactéries. — Les bactéries doivent être examinées à l’état vivant et, après fixation, à l’aide de matières colorantes.

1° Examen des bactéries à Vétat vivant. — L’examen à l’état vivant se pratique en mettant entre lame et lamelle une trace du produit à examiner, sans adjonction de colorant; on peut cependant (Gornil et Babès) ajouter une goutte de solution aqueuse très faible de violet de méthyle ; les ba’ctéries se teignent avec plus d’intensité que le liquide et peuvent garder quelque temps encore leur mouvement. L’examen à l’état vivant se fera avee un objectif à sec et en diaphragmant.

2° Méthodes de coloration. — Nous ne rappellerons ici que les procédés employés journellement. Le produit à examiner doit toujours d’abord être étalé en couche mince sur lame ou lamelle, séché à l’air, puis fixé à la flamme (on fait passer la lamelle très rapidement trois lois dans la flamme d’un bec de Bunsen).

Les méthodes de coloration varient selon le produit que l’on se propose d’étudier.

S’agit-il de colorer du sang, du pus, un exsudât de fausse membrane : on se servira du mélange suivant, connu sous le nom de bleu phéniqué ou bleu de Kuhne :

Bleu de méthylène . 1 gramme.

Alcool absolu. . . . . . 10 grammes.

Eau phéniquée à 5 pour 100. . . . 100 centimètres cubes.

que l’on mettra au contact de la préparation, à froid, pendant deux minutes; la préparation doit être soigneusement lavée à l’eau avant d’être examinée.

S’agit-il d’une préparation faite avec une trace de culture provenant d’un milieu liquide ou solide : on colorera la préparation en faisant agir pendant une minute la solution de violet au tiers :

Solution alcoolique saturée de violet de gentiane. 10 parties.

Eau distillée^. . . .' . . 20 —

Laver à l’eau.

co8 notions Elémentaires sur les bactéries

A cette coloration simple des bactéries, on doit toujours ajouter une autre technique, technique qui sert à différencier les bactéries et qui est connue sous le nom de méthode de Gram.

Voici en quoi consiste cette technique :

On fait agir pendant un quart de minute sur la préparation une première solution dite de violet phéniqué :

Violet de gentiane . 1 gramme.

Alcool absolu . 10 grammes.

Eau phéniquée à 1 pour 100.. .■. . . 100 centimètrescubes.

On lave à l’eau.

Cette première solution colore indistinctement toutes les bactéries, le bacille tuberculeux excepté.

On- laisse tomber ensuite sur la préparation quelques gouttes d’une solution dite de Gram ou de Lugol :

Iode . 1 gramme.

Iodure de potassium . 2 grammes.

Eau distillée . 200 grammes.

qu’on laisse environ un quart de minute. Cette imprégnation fixe la matière colorante beaucoup plus sur certaines bactéries que sur d’autres.

On verse alors sur la préparation des gouttes d’alcool absolu jusqu’à ce que l’alcool ne dissolve plus de matière colorante violette ; on lave à l’eau.

Après l’emploi de cette technique, certaines bactéries restent colorées en violet; on dit qu’elles prennent le Gram ou se colorent par la méthode de Gram; d’autres se décolorent par cette technique ; il y a donc là un procédé de différenciation qui permet, en présence d’une bactérie, selon qu’elle prend ou ne prend pas le Gram, de la ranger dans tel ou tel groupe de bactéries.

Après coloration par le Gram, si l’on veut examiner les éléments anatomiques qui sont décolorés toujours dans cette méthode, ou bien si l’on veut étudier les bactéries qui ne prennent pas le Gram, on doit faire agir sur la préparation une solution d’une couleur d’aniline acide, telle que la solution suivante :

Éosine.. . 0a‘,50

Alcool . . . 100 grammes.

On laisse un quart de minute ; on lave à l’eau ; les éléments anatomiques et -les bactéries qui ne prennent pas le Gram sont colorés en rose.