IV. — Dosage du fer métallique

Le principe sur lequel fut réalisé ce dosage est celui indiqué, en 1885, par Ilinski et Kjîorre. Il repose sur la formation d’un complexe lorsque, dans des conditions convenables, une solution d’un sel de fer est mise en présence d’une solution acétique d’a-nitroso-/3-naphtol. Ce complexe a pour formule (G*®H®ONO)2 pg, dans le cas d’un sel ferreux. En microcbimie, à froid et à pH = 5,0, la formation quantitative de ce complexe est pratiquement instantanée. En macrochimie elle demande 24 heures.

Le complexe, enrobé dans un excès de nitroso-^naphtol, est récolté sur un filtre sans cendres, introduit dans une nacelle de platine et incinéré au microfour à moufle de Pregl. Cet oxyde est ensuite réduit à chaud dans un courant d’hydrogène, lent, pur, et sec. On attend le refroidissement. On dissout enfin dans le réactif molybdique. Du bleu de molybdène apparait, qu'on titre au permanganate.

En fait, ces principes si simples se heurtent, surtout pour le biochimiste, à de graves difficultés.

Tout d’abord le produit d'incinération d’une humeur, d’un tissu ou d’un excrétum quelconques contient d’importantes quantités d’acide phosphorique à côté, le plus souvent, de

traces (le fer. Il fallait donc résoudre le problème de la sépèration quantitative d’une partie de fer en présence de plusieurs milliers de parties d’acide phosphorique. Faute d’une telle séparation, Feret PO^H^ précipitent ensemble et quand on croit, à la fin d'un dosage, avoir du fer réduit, on se trouve en réalité devant un mélange de feret de phosphate ferreux qui ne donne plus qu’un volume de permanganate inférieur à celui qu’on espérait. La solution originale d’un tel problème a été apportée. En milieu rendu réducteur par l’hydrosulfite de soude, le fer précipite quantitativement par le nitroso-P-naphtol, à l’exclusion de l’acide phosphorique, quelles que soient les quantités relatives des deux corps mises en présence. Un lavage ultérieur du complexe ferro-nitroso-P-naphtol par de l’acide acétique à 35 p. 100 (dans lequel le complexe est insoluble), puis par de l’eau, enlève les dernières traces de PO^H^ qui auraient pu être adsorbées. On obtient donc en définitive un fer réduit irréprochable.

La seconde difficulté est que le nitroso-j3-naphtol précipite d’autres métaux que le fer, notamment le cuivre, le cobalt et le nickel.

En biochimie, les proportions de fer et de ces divers métaux sont le plus souvent telles qu’un dosage global n’affecte le chiffre du fer que d'une erreur portant sur la seconde ou même la troisième décimale, donc négligeable.

Mais il s’est trouvé un cas, sur lequel on reviendra dans le chapitre VI, où a due être réalisée la séparation quantitative du fer et du cuivre. Cette séparation a été obtenue grâce à l’emploi de l’hydrosulfite de soude qui, à pH = 5 et à chaud, précipite complètement le cuivre sous forme d’un mélange de Gu^O et de Cu*^S, tandis que le fer reste intégralement en solution.

La troisième difficulté a trait à la dissolution du fer réduit dans le réactif molybdique phosphorique. Toutes les opérations du dosage étant conduites avec le maximum

de rigueur, remploi du réi.ctif ordinaire donne une erreur constante de 25 p. 100. Un e.'camen attentif a permis de constater que cette erreur provient du dégagement d’hydrogène produit par la dissolution du fer dans le réactif. Après de longs tâtonnements, il a été remédié à cet inconvénient majeur en introduisant du cuivre dans le réactif molybdique phosphorique.

L’emploi d’un tel réactif cuivré permet de retrouver, à 1 ou 2 p. 100 près, la quantité de fer dont on était parti.

Des milliers de dosages, pratiqués dans les conditions les plus diverses avec une telle méthode, permettent d en affirmer la précision et la sécurité.

Carlier et Delavillk ont réalisé un excellent dosage du potassium, par l’intermédiaire du cobalt, en mettant a profit les données ci-dessus exposées pour le fer.

L’étude du métabolisme martial et des anémies, en vue duquel cette méthode a été réalisée, nécessitait la mise au point d’une technique rapide et commode d’incinération des humeurs, tissus et excréta de l’organisme. Cette technique a été décrite sous le nom d'incinération nitricomagnésienne. Elle comporte la dissolution dans de l’acide nitrique concentré, exempt de fer, puis l’incineration, a basse température, en présence de nitrate de magnésie qui agit comme catalyseur. Grâce à cette technique la teneur en fer des différents tissus d’un animal de plusieurs kilogrammes a pu être déterminée dans les conditions expérimentales les plus diverses.

Application du dosage du fer à celui de Vhémoglobine sanguine.

Le dosage du fer total sanguin se confond pratiquement avec celui du fer hémoglobinique. Il est aisé et précis grâce à la micro-méthode qui vient d’être décrite. Mam de nouvelles recherches étaient nécessaires pour savoir

si la relation établie sur du sang normal par Peters et par Fontes et Thivolle entre la quantité totale d’hémoglobine, le 1er et la capacité respiratoire se retrouvait dans tous les cas.

Les résultats obtenus dans le laboratoire de G. Schaeffer ont en effet démontré que dans différents cas d’anémie, l’hémoglobine est anormale. Mais des recherches personnelles ont prouvé que cette anomalie ne touche pas aux relations entre le fer et la capacité respiratoire d’une part et la molécule globale du cbromoprotéide sanguin d’autre part. Dans tous les cas possibles, la quantité de fer trouvée par cm3 de sang donne, lorsqu’elle est multipliée par 30, la quantité totale d’hémoglobine en grammes p. 100 cm^ de sang. D’autre part cette même quantité de fer, multipliée par le coefficient 40, donne la capacité respiratoire du sang étudié. Ce dernier produit, multiplié par le coefficient 5, exprime en p. 100 la quantité d’hémoglobine sanguine.

Si, par exemple, la quantité de fer trouvée par cm^ de sang est deOrag.,50, l’iiémoglobinémie sera de 0,50 X 30 = 15 g.,1a capacité respiratoire : 0,5 X ‘40 = 20 et Hb p. 100 20 X 5 = 100 p. 100.

Une telle détermination comporte une erreur relative de 1 à 2 p. 100.

L’emploi du colorimètre de Sahli, au contraire, s’est révélé comme très infidèle. Pour un sang normal, l’erreur moyenne déterminée sur 25 cas est de ± 12 p. 100. Pour un sang anémique cette même erreur, déterminée sur 38 cas, est de — 10 à -j- 22 p. 100 mais peut atteindre 120 p. 100.

Un élémentaire souci d’approximations meilleures devrait donc faire substituer le dosage de l’hémoglobine par le fer à celui pratiqué couramment par voie colorimétrique.

La détermination de l’intensité de l’hémoglobinurie peut également se déduire d’un dosage du fer total urinaire.

Dans les chapitres qui vont suivre, seront exposés succintement certains résultats biochimiques, médicaux et thérapeutiques obtenus grâce à la mise en œuvre de ces méthodes rigoureuses.

Leur élaboration était non un but, mais un moyen d’investigation de l’immense domaine bio-pathologique.