CHAPITRE XI

Modifications hématiques consécutives à l'introduction du gsoudron dans la rate, les ganglions lymphatiques,

à son application sur la peau.

Dans les expériences que nous venons de relater, si l'espèce animale utilisée, si le corps injecté variaient, la voie d’introduction médullaire restait fixe ; cette voie d'introduction nous l'avons, dans une dernière série d’essais témoins. fait varier à son tour.

On était en effet conduit à se demander si la maladie déclenchée par l'introduction de goudron dans la moelle des os ne pouvait être reproduite soit sous la même forme, soit sous une forme voisine par l’application de goudron sur les autres organes considérés comme formateurs de sang : la rate, les ganglions lymphatiques.

Introduction de goudron dans la rate. — Nous avons succes-

sivement étudié les effets :

1° de Papplication directe de goudron sur la rate ; 2° de l'injection proprement intra-splénique de goudron.

Applications directes et répétées de goudron sur la rate. — TecuniQue. Comme les injections intra-médullaires les applications de goudron sur la rate devaient être répétées à maintes reprises.

Pour pallier au risque de péritonite que présentaient ces

ouvertures bi-hebdomadaires de la cavité abdominale, nous avons, dans un premier temps, interposé la rate entre peau et péritoine en lui conservant bien entendu ses vaisseaux. Une simple incision cutanée permettait ensuite d'appliquer l’huile goudronnée sur la surface de l’organe.

RésuLratTs. — L'expérience a porté sur 6 rats blancs de 5 mois. Le badigeonnage de la rate par le goudron était fait tous les 5 jours. On le répète 10 fois. Aucun incident ne survient ; en particulier, nous n'avons pas observé de suppuration en dépit des multiples interventions pratiquées. Il est possible que le pouvoir antiseptique du goudron ait prévenu les infections qu’il était légitime de craindre.

L'état général des rats s’est maintenu excellent. Bien loin de rester stationnaires ou même de décliner comme les rats soumis aux injections intra-médullaires de goudron, 1ls grossissent et prospèrent rapidement au cours de l’expérience.

Les modifications hématologiques sont insignifiantes. Nous n'avons pas noté de variations des globules rouges, des gene les blancs ou des plaquettes.

Voici à titre d'exemple, les numérations pratiquées sur le rat n0,95 :

{1 octobre 1933 (avant toute injection) : G. R., 5.800.000 ; G. B., 8.500 ; plaquettes, 650.000.

26 octobre 1933 (au milieu du traitement) : G. R. 5.500.000 ; G. B., 8.100 ; plaquettes, 725.000.

12 novembre 1933 “à la fin de la série) : G. R. 6.000.000 G. B., 8.100 ; plaquettes, 580.000.

21 décembre 1933, G. R., 5.750.000 ; G.B. , 7.900 ; plaquettes,

Cette fixité du nombre des globules rouges et blancs rend d'autant plus valables les variations constatées chez les rats soumis aux injections intra-médullaires.

Les éléments rouges n'étaient modifiés ni dans leur forme, ni dans leur taille. Pas d’hématies nucléées.

On ne notait pas de modification valable du rapport des éléments blancs mononucléés aux éléments blancs polynucléés.

Injections intra-spléniques. — Ainsi le sang ne nous a pas

paru modifié par les applications répétées de goudron sur la rate. On pouvait se demander si la pénétration insuffisante du goudron dans le parenchyme splénique n’était pas responsable de cet insuccès expérimental. Pour faire justice de cette hypothèse nous avons tenté d’injecter le goudron proprement dans la rate.

L'expérience porte sur 6 rats blancs de cinq mois. Dans un premier temps opératoire la rate est mise entre péritoine et paroi ; on lui conserve ses pédicules vasculaires. Puis les injections intra-spléniques sont faites avec une aiguille très fine ; chaque injection introduit dans la rate environ 1/30 centimètre cube de goudron. Après avoir poussé l'injection, on laisse l'aiguille quelques instants en place pour éviter l’issue du goudron hors de la rate. Les injections sont répétées tous les 10 jours pendant 2 mois. Ceux des animaux qui ont survécu ont reçu ainsi 6 injections intra-spléniques de goudron.

Trois rats sont morts pendant le premier mois de l'expérience, l’un, deux jours après la première injection — son autopsie montra la nécrose de la rate autour du point de piqûre, — les

deux autres 22 et 24 jours après le début de l'expérience.

Les trois autres rats ont parfaitement supporté ces interventions répétées. Leur état général n’a été à aucun moment altéré ; ils ont continué à se développer et à grossir comme les rats témoins de même âge. Nous n’avons pas constaté chez eux de

modifications sanguines.

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Les laparotomies réitérées ont permis d'apprécier les modifications du volume et de l’aspect de [a rate. Chez deux animaux, la rate conserva sa forme et ses dimensions habituelles.

Chez le troisième rat, la rate augmenta nettement de volume : cette hypertrophie était macroscopiquement appréciable dès le 182 jour ; vers le 60 jour, la rate avait triplé son volume ; elle était épaisse, élargie, avait pris une forme ovoïde bien différente de sa forme effilée habituelle. Au même moment on notait une hypertrophie modérée du ganglion mésentérique. L'état général n’était pas altéré.

Ultérieurement le volume de la rate diminua. Lorsqu’au 100€ jour, on sacrifia l'animal, elle était en voie de reprendre sa

PMR Ge dual 0?

Persistance des flaques de goudron. Réaction giganto-cellulaire.

forme normale et pesait À gr. soit à peine deux fois le poids normal.

L’étude histologique permit les mêmes constatations chez les deux rats dont la rate n’avait pas été manifestement modifiée et chez celui qui avait présenté cette splénomégalie importante. Ces constatations sont les suivantes :

19 P£RSISTANCE DU GOUDRON DANS LA RATE. — Dans les 3 cas on trouve, en divers points de la rate, des flaques, plus ou moins étalées, de goudron, tantôt isolées, tantôt groupées en taches petites et serrées autour d’une flaque principale.

2° RAPPORTS DU GOUDRON ET DU TISSU SPLÉNIQUE. — Le goudron tantôt ne provoque aucune réaction cellulaire ; il occupe une partie de la région examinée et rappelle l’aspect que donnerait une tache de colorant fortuitement tombée sur la lame ; tantôt il est entouré d’une couronne de cellules de grande taille, mais cette réaction giganto-cellulaire reste toujours modérée. |

Nous n'avons, dans aucun cas et en aucun point des coupes, pu déceler le goudron à l’intérieur même des cellules spléniques.

30 INTÉGRITÉ DE LA RATE. — En dehors des flaques de goudron et des couronnes giganto-cellulaires, qui parfois les entourent, la rate n’est pas altérée. En particulier, on n’y décèle pas ces foyers de métaplasie myéloïde si fréquemment provoqués dans la rate des rongeurs par les agressions toxiques et infections les plus banales.

Le ganglion mésentérique prélevé, un peu hypertrophié dans un cas, normal dans les deux autres cas, était histologiquement normal. La moelle osseuse, le foie n’étaient pas altérés.

EN RÉSUMÉ : Les injections intra-spléniques répétées de goudron ne provoquent pas de modifications sanguines. Parfois la rate augmente de volume. La persistance du goudron dans la rate en amas extra-cellulaires, l'intégrité du tissu splénique sont les constatations que permet de faire l'examen histologique.

Injections intra-ganglionnaires. — Les injections intra-médullaires de goudron ne provoquent pas d’altérations gan-

glionnaires. Nous n’avons constaté de modifications macroscopiques ou histologiques des ganglions lymphatiques chez aucun des 354 rats soumis depuis deux ans aux injections intra-médullaires de goudron. THomsen et ENGELBRETH-Horm, étudiant la leucémie déclenchée chez la poule par les injections intramédullaires de goudron, ont cependant noté l'invasion du thymus et de la rate par du tissu myéloide.

L'introduct:on du goudron — non plus par voie médullaire — mais par voie intra-péritonéale parait, au contraire, capable d’agir sur le tissu lymphoïde.

M. L. Mercier par injection intra-péritonéale de goudron a pu d’un élevage de souris dont aucun individu n'avait jamais présenté de Iymphadénome, isoler une lignée dont certains membres sont atteints de cette variété de cancer. Tantôt, 1l s’agit d’un lymphadénome du type lymphome malin de Haaland avec hypertrophie de tous les ganglions de la rate et tumeurs multiples du poumon, tantôt d’un lymphadénome massif du poumon dont un lobe très hypertrophié prend l'aspect histologique d’un ganglion.

K. LowenrTHAL chez une souris soumise à des injections intrapéritonéales de goudron à vu se développer une volumineuse tumeur abdominale. L’autopsie montra une infiltration massive et diffuse du foie par des cellules rondes lymphoïdes et l'auteur discute la nature leucémique ou lymphosarcomateuse de la tumeur hépatique. Le sang ne fut pas altéré.

Il est vraisemblable que dans les cas de M. MERGIER, comme dans celui de LowenrHatz, le goudron a favorisé l’éclosion d’une maladie spontanée. On sait la fréquence chez la souris des leucémies spontanées, des lymphomes, des lymphosarcomes divers. Les tumeurs que l’on voit chez elle apparaître après les tentatives expérimentales les plus diverses ne sauraient sans grandes réserves être rapportées à l’agent expérimental mis en œuvre.

Cette fréquence des réactions leucémiques et Iymphomateuses de la souris devait conduire à l’étude des effets des injections intra-ganglionnaires de goudron. Lunp, en 1931, espérant élucider les rapports des leucémies et des lymphosarcomes, injecte du goudron dans les ganglions lymphatiques de la souris ; il ne réussit pas à provoquer de leucémie, mais assiste au développe-

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ment à distance du point d'injection d’une tumeur inguinale du type endothéliome.

Nous avons préféré étudier chez le rat la sensibilité au goudron du tissu lymphoïde et, comme Lun, nous avons employé la méthode la plus directe, l'injection de goudron dans les ganglions lymphatiques.

L'expérience porte sur 8 rats blancs de 5 mois. L’injection de goudron est faite tantôt dans le ganglion mésentérique, tantôt dans le ganglion iléo-caecal. L'intervention est relativement simple, après laparotomie on découvre aisément le ganglion iléo-caecal, on doit parfois chercher un peu plus longtemps le ganglion mésentérique. Il faut éviter de confondre avec le ganglion, les amas de graisse voisins, qui parfois pelotonnés, peuvent prendre un aspect adénoïde. Le goudron est introduit à l’aide d’une aiguille extrêmement fine : on injecte chaque fois 1/20 à 1/30 de centimètre cube d'huile goudronnée. Au moment de l’injection, le ganglion se colore vivement en noir et la preuve est ainsi faite que l’aiguille est en bonne place.

Les injections sont répétées tous les 15 jours pendant 2, 3 ou 4 mois. Certains rats ont reçu ainsi 8 injections intra-ganglionnaires de goudron.

Des 8 rats ainsi mis en expérience, 2 sont morts précocement à la suite d'incidents opératoires divers (lésions intestinales, périviscérite occlusive due à l'introduction intempestive d’une quantité importante de goudron dans le péritoine), 2 rats n’ont présenté aucun trouble clinique, hématologique ou ganglionnaire notable, 4 rats, au contraire, survivent et présentent des lésions ganglionnaires assez particulières et assez identiques pour qu’on en donne une description d’ensemble.

Chez aucun d’entre eux ne furent observés de désordres hématiques, le sang resta normal pendant toute l’évolution chez les rats, ni de troubles généraux, les animaux étaient florides et de bel aspect lorsqu'on les sacrifia 150 jours après le début de l’expérience.

Les modifications de l’aspect des ganglions évoluèrent selon un type régulier et que les laparotomies successives permirent d'étudier avec précision. À

Pendant les 15 jours qui suivent la première injection, les ganglions ne sont pas modifiés ; leurs dimensions restent réduites ; et la seconde injection, comme la première, est ainsi faite dans un ganglion de petite taille. Un mois après le début de l'expérience, le ganglion injecté est considérablement augmenté de volume. Il semble avoir doublé ou triplé ses dimensions ; les chaînes ganglionnaires voisines ne sont pas modifiées.

Deux mois après le début, les troubles sont à leur maximum ; les ganglions injectés ont encore augmenté de volume ; tout le mésentère est bordé par un gros cordon lymphangitique, le long duquel on aperçoit des nodules lymphatiques, les uns de petite taille, les autres volumineux, pouvant atteindre ou même dépasser, bien qu'ils n'aient jamais reçu de goudron, le volume des ganglions, siège des injections. Certains de ces nodules prennent une forme bilobée.

Pendant tout le troisième mois, cette adénomégalie abdominale persiste stationnaire ; les autres groupes ganglionnaires ne se modifient pas ; dans un cas, la rate fut transitoirement hypertrophiée.

Puis, vers le 90€, 100€ jour, bien que l’on continue les injections de goudron, le volume des masses ganglionnaires diminue, les cordons lymphatiques s’amincissent ; longtemps les ganglions paraissent plus volumineux qu’en leur état normal.

On les voit enfin vers le 120€ jour devenir tout petits, en même temps que transparaît le goudron que, sans doute, masquait l’hypertrophie ganglionnaire. Lorsqu'on sacrifie l’animal le 150€ jour, l’aspect du mésentère est très particulier ; son bord : libre présente un chapelet de grains noirâtres dont chacun représente l’amas central de goudron, qui servait de noyau aux nodules lymphoides hypertrophiés, observés trois mois auparavant.

HiSTOLOGIE DES GANGLIONS. — Aspects des ganglions prélevés en période adénomégalique. — Fait très remarquable, les ganglions ayant reçu l'injection de goudron, et les ganglions voisins hypertrophiés sans que le goudron ait été porté à leur contact ont le même aspect.

On peut distinguer trois zones concentriques du centre à la périphérie :

19 La zone centrale noirâtre est manifestement formée par le goudron. On doit admettre que le goudron s’est partagé, restant pour une part dans le ganglion où on l’avait introduit, tandis que d’autres parcelles vont s’arrêter en divers points du système lymphatique abdominal ;

20 Autour de cette zone centrale, existe une zone claire très large correspondant à l’hyperplasie des centres folliculaires. Ce centre est formé de cellules réticulaires pressées les unes contre les autres, et de cellules lymphoiïdes moins nombreuses ;

30 Une zone plus étroite périphérique est formée presque exclusivement de tissu lymphoïde.

Dans l’ensemble, la structure du ganglion est conservée. Dans un cas seulement — et dans un ganglion qui n’avait pas reçu directement le goudron — les modifications histologiques étaient plus profondes ; l’architecture du ganglion bouleversée ; la glande tout entière envahie par une hyperplasie lymphoïde diffuse qui cernait une tache minuscule et noire centrale de goudron.

Aspect des ganglions prélevés lors de l’autopsie. — Les petits amas noirâtres qui persistent quelques mois plus tard lorsqu'on sacrifie l’animal, se montrent presque uniquement formés de goudron.

Autour du goudron, une mince coque de sclérose dans laquelle se trouvent épars quelques amas lymphoides pauvres en cellules représente la trace du ganglion atrophié.

La moelle osseuse, la rate, le foie, les poumons, n’étaient pas altérés.

EN RÉSUMÉ : les injections intra-ganglionnaires de goudron ne provoquent pas chez le rat de troubles hématiques, ni de troubles généraux ; mais on voit sous leur influence sè produire d’importantes altérations ganglionnaires caractérisées après 15 jours de latence : 1° par l'hypertrophie du ganglion injecté ; 20 le développement de nodules lymphoïdes tout le long du mésenière ; 39 ultérieurement, la diminution de volume puis l’atrophie des ganglions qui se réduisent à une coque scléreuse entourqgnt l’amas de goudron.

Il est bien difficile de définir la nature exacte de ces désordres

ganglionnaires. On ne se trouve pas en présence d’adénites infectieuses ; les diverses recherches bactériologiques sont restées négatives et le bon état des animaux ne s’accorderait guère avec une telle infection ganglionnaire.

Il s’agit peut-être de phénomènes de blocage du système lymphatique abdominal tels ceux qu’on a pu observer au cours des essais de blocage du système réticulo-endothélial. Peut-être enfin s'agit-il simplement d’une inflammation lymphatique subaiguë et curable provoquée par le goudron lui même, d’une sorte d'adéno-lymphite par irritation. L’aspect de remaniement structural complet du ganglion observé dans un cas semble démontrer que la limite là encore n’est pas très nette entre ces processus d’inflammation chronique, et certaines tumeurs bénignes des ganglions.

Nous nous bornerons, sans les discuter plus avant, à l’énoncé de ces hypothèses.

La comparaison des effets des injections intra-ganglionnaires ou spléniques à ceux des injections intra-médullaires, met en lumière deux différences capitales. Le goudron introduit dans la moelle disparaît très vite, cesse d’être visible et provoque d'importants troubles hématiques ; introduit dans la rate ou dans les ganglions, il persiste sans se résorber et ne provoque pas de désordres sanguins appréciables.

Modifications du sang et des organes hématopoïétiques consécutives aux applications cutanées et sous-eutanées de goudron. — Modifications sanguines : Les badigeonnages de la peau par le goudron, les injections sous-cutanées ou intra-veineuses de goudron ne semblent pas provoquer de modifications notables des éléments figurés du sang. Dans la plupart des travaux ayant trait au cancer du goudron, il n’est guère fait mention de la formule sanguine ; parfois on signale son intégrité.

Quelques auteurs pourtant se sont particulièrement attachés à cette recherche.

Les variations sanguines consécutives à l'application cutanée de goudron ont été étudiées par MocLer, par Morais et Bace- LAR.

Mozrrer chez les souris soumises à des badigeonnages répétés

de la peau par le goudron a constaté une augmentation considérable des globules blancs ; cette augmentation porterait surtout sur les lymphocytes. Moraïs et BacELAR ont étudié chez 20 lapins les modifications leucocytaires au cours du goudronnage, en tentant d’établir les formules hématologiques particulières aux diverses phases du développement des tumeurs.

Il semble que le nombre des leucocytes et le pourcentage des polynucléaires neutrophiles se réduisent au commencement des badigeonnages, ces réductions se maintenant lors de la formation des tumeurs bénignes et disparaissant quand celles-ci subissent une transformation cancéreuse. Mais ces modifications sont peu marquées et inconstantes.

Les effets sur la formule sanguine des injections sous-cutanées de goudron ont été l’objet des travaux de BABÈS et SERBANESCU. Chez les 5 lapins soumis à des injections sous-cutanées de goudron, BABÈS et SERBANESCU ont observé des modifications assez importantes des globules blancs. La première injection de goudron est suivie d’un abaissement notable du nombre des leucocytes ; cette leucopénie paraît proportionnelle à la quantité de goudron injectée ; ultérieurement le nombre des leucocytes augmente et atteint ou approche son taux normal. Les Iymphocytes sont parmi les éléments blancs, les plus éprouvés par cette brusque diminution de nombre. Les polynucléaires ne sont que modérément diminués. Les monocytes ont le plus souvent une tendance à augmenter en nombre.

Brick au contraire, étudiant il est vrai les effets des injections intra-veineuses de goudron, a noté une augmentation du nombre des lymphocytes chez certaines des souris mises en expériences.

Nous avons chez le rat, cherché à apprécier l'influence sur la formule sanguine des applications cutanées, des injections souscutanées ou intra-veineuses de goudron. Dans la majorité des cas la formule sanguine n’est pas modifiée. Les désordres qu'il est parfois donné de constater sont ou minimes ou extrêmement éphémères ; ils restent dans la grandeur des modifications physiologiques. L’extrême instabilité du sang du lapin, la variabilité moins considérable mais nette aussi du sang de la souris expliquent peut-être certains des résultats relatés et certaines contra-

dictions tout au moins apparentes. Dans certaines conditions expérimentales, les applications de goudron sur la peau sont peut-être capables de modifier la formule sanguine mais la preuve formelle de cette action n’a pas encore été fournie. On doit jusqu’à plus ample informé conclure avec Morais et BacE- LAR qu’il n’est pas possible actuellement d’établir un tableau hématologique particulier au cancer expérimental du goudron.

Modifications des organes hématopoiétiques. — RaTE : Plus que des modifications sanguines, le badigeonnage de la peau par le goudron paraît capable de provoquer des altérations des organes hématopoïétiques, de la rate essentiellement.

De nombreux auteurs parmi lesquels on peut citer BABËS, BorcGui, ont signalé ces lésions. WaATERMAN en a récemment repris l’étude. Les lésions observées consistent le plus souvent en foyers de dégénérescence myéloïde, plus fréquemment limités qu’étendus. BABÈS a noté, après badigeonnage de l'oreille du lapin, des lésions spléniques comparables — selon cet auteur — à celles de la maladie de Gaucher ; il s'agissait — il est vrai — de lésions précoces qui furent éphémères et suivies de phénomènes d’hyperplasie splénique avec intense activité des centres germinatifs malpighiens.

Ces diverses constatations histo-pathologiques, assez comparables à celles que nous avons observées dans la rate des animaux soumis aux injections intra-médullaires de goudron, obligent aussi à évoquer la fréquence des foyers spontanés de métaplasie myéloïde splénique chez les rongeurs. On est pourtant autorisé — dans la majorité des cas — à les rapporter au badigeonnage par le goudron. C’est du moins l’avis de la plupart des auteurs qui ont écrit sur le sujet.

L'accord en revanche n’est pas fait sur la relation qui unit Ces altérations spléniques au cancer cutané provoqué par le goudron. Les uns considèrent qu’il s’agit d’une réaction viscérale en rapport direct avec le badigeonnage par le goudron, mais indépendante du cancer. Les autres estiment au contraire qu’il n’est pas de lésions spléniques sans qu’il y ait cancer et soupçonnent entre les deux phénomènes un rapport étroit, dont d’ailleurs la nature même reste encore obscure. À

l’appui de cette conception viennent les faits suivants observés par WarErMaAn dans un élevage de souris badigeonnées avec du goudron. La rate reste indemne chez les animaux porteurs de tumeurs cutanées bénignes du type papillome. Elle est altérée lorsque les tumeurs cutanées sont malignes du type carcinome.

Ici trouve sa place le fait curieux et très particulier observé tout récemment par L. D. Parsons. Un sarcome de la souris obtenu par introduction d’un composé dibenzanthracénique est greffé avec succès et atteint sa 20€ génération. Depuis la 4€ génération apparaît chez les souris greffées une leucémie désormais transmissible avec la tumeur :; c’est une leucémie incontestable caractérisée par une leucocytose considérable (90.000 à 400.000 leucocytes) et augmentant au cours des greffes successives, une anémie avec normoblastémie, une transformation myéloïde de la rate, la substitution au tissu normal de la moelle d’un tissu puriforme jaunâtre formé de polynucléaires, de myéloblastes, d'hémohistioblastes.

On peut discuter les rapports avec les injections de goudron, des désordres sanguins ; il est néanmoins très remarquable de voir une leucémie coïncider avec un cancer provoqué par le goudron, et se transmettre avec lui.

EN RÉSUMÉ : les applications cutanées répétées de goudron ne modifient guère la formule sanguine. Avec une certaine fréquence au contraire on voit se développer des foyers de métaplasie myéloide splénique chez les animaux soumis aux badigeonnages répétés de la peau par le goudron.