COLORATION

a. Colorer pendant une à deux minutes à la thionine phéniquée.

b. Laver à l'eau. Déshydrater par l’alcool absolu.

c. Passer au xylol, monter.

Ce procédé est excellent. Il faut s’y habituer. On surveillera particulièrement Le temps b; l'alcool enlève une partie du colorant. S'il: agit trop longtemps, tout peut être décoloré, y compris les microbes:

S'il agit trop peu, le tissu demeure trop coloré, les microbes sont peu

visibles. Il est facile de trouver le juste milieu.

DougLe cocorarion. — On peut obtenir sans peine une double coloration avec les méthodes précédentes. Pour le procédé à la thionines on procédera comme suit :

a. Colôrer à la thionine phéniquée.

b. Décolorer légèrement par l’alcool; laver à l’eau.

c. Traiter rapidement par l’éosine à 1 p. 1000 ; laver à l’eau.

d. Déshydrater à l’alcool absolu. — Pour ne pas trop décolorer, éponger d’abord au papier de soie ; déshydrater ensuite.

e. Passer au xylol, monter. |

Coloration par la méthode de Gram. — Les microbes prenant le Gram se prêtent facilement aux doubles ou triples colorations.

DougLE coLORATION. — Procédé de choix. — a. Colorer au violet de gentiane phéniqué, vingt à quarante secondes (suivant l'épaisseur).

b. Traiter par le liquide de Gram, cinq à dix secondes, renouveler deux ou trois fois.

c. Décolorer à l’alcool-acétone. Laver à l’eau.

d. Colorer à l’éosine au millième, quinze à trente secondes (teinte rose). Laver à l’eau.

e. Déshydrater à l'alcool absolu. £

f. Passer au xylol, monter. |

Les microbes, colorés en violet foncé, tranchentsur le fond rouge du tissu. Mais la teinte du fond est uniforme, sans différenciation ;

‘la triple coloration permet de mieux étudier le tissu.

TRIPLE COLORATION. — Procédé de M. Nicolle. — Traiter pendant quinze minutes par le carmin de Orth alcoolisé :

Carbonate de lithine, à saturation dans l'eau....... ducs... 40 centimètres cubes,

Cr n0e40,..5%.:00, 7 .... À gramme.

Triturer au mortier. Filtrer.

Ajouter un sixième d'alcool absolu.

Laver à l’eau.

b. Colorer au violet de gentiane phéniqué.

COUPES BACTÉRIOLOGIQUES.

c. Traiter par le liquide dé Gram.

d. Décolorer par l’alcool-acétone (p. 241). x e. Faire agir l'alcool picriqué quelques secondes :

AICOOLDADSOME SRE RSR N 150 centimètres cubes. ACIAB\PLOTÉTUE SAN ie ve 1 gramme.

f. Déshydrater à l'alcool absolu.

g. Passer au xylol, monter.

Les microbes sont teintés en violet; les noyaux, en rose ; le protoplasma, en jaune.

Méthode de Claudius. — On peut employer la méthode de Claudius : faire agir le colorant et la solution picriquée (Voy. p. 241) pendant deux minutes ; décolorer à l'essence de girofle, goutte à goutte, jusqu’à ce que la préparation prenneune teinte jaunâtre. Pour double et triple coloration, on opérera comme il a été indiqué pour la méthode de Gram.

Méthodes spéciales. — D'autres méthodes, applicables seule-

ment à quelques espèces, seront décrites dans la bactériologie spéciale (Voy. en particulier Tuberculose, Syphilis).