PROCÉDÉS DE CULTURE DES ANAÉROBIES
mine au dehors par une extrémité coudée à angle droit, portant un tampon de coton entre deux étranglements.
Stériliser à l’autoclave, A scellé. Après refroidissement, sécher le tampon d’ouate. Couvrir de cire Golaz les rainures du bouchon, pour assurer l'étanchéité.
Mode d'emploi. — Préparer la semence.
a. Flamber, puis casser la pointe de A; ensemencer le ballon en plongeant la hointe dans la semence, tout en aspirant par B. Sceller l’effilure à la flamme ;
b. Mettre B en communication avec la trompe à eau; faire le vide avec lavage d'hydrogène (Voy. p. 176);
c. Sceller dans l'hydrogène l’étrangle- — ment extérieur de B. RE Pour opérer un prélèvement, ouvrir l’ex- NES A AR
trémité de B; même remarque et même A Gnaérobies), précaution que ci-dessus, p. 179, &. Flam-
ber et casser l’extrémité de A. Souffler par B, recueillir le liquide dans un récipient stérile.
Cultures en tubes profonds, avec cubes d'albumine et sulfure de calcium. — Procédé recommandé. — Ce dispositif, très simple, se prête à La culture de presque tous les anaérobies.
Le bouillon est réparti en tubes, en grande profondeur; la hauteur de la colonne liquide doit atteindre 10 centimètres au moins.
Au fond du tube, on dispose deux outrois «cubes d’albumine» de un demi-centimètre cube environ. — L’albumine employée est le blanc d'œuf, cuit dur, et coupé en cubes.
Les tubes ainsi préparés sont stérilisés comme d'ordinaire.
Avant l'emploi, faire bouillir ou passer à l’autoclave. Refroiïdir rapidement. |
Au moment de l'emploi, avant ou après l’'ensemencement, prélever sur une spatule de platine un peu de sulfure de calcium, stérilisé au préalable à sec. Le tube étant maintenu verticalement, précipiter le sulfure dans le liquide.
Culture sous l’huile de vaseline (Legros). — ÆRépartir le bouillon en tubes sur une grande profondeur. Verser au-dessus de l'huile de vaseline sur 15 à 20 millimètres de hauteur. Stériliser.
Ensemencer à la pipette. |
Culture « en tube cacheté » sous lanoline (Rosenthal). — A l'huile de vaseline on peut substituer la lanoline, fusible à 420,
Préparer comme dans le procédé précédent; au moment de la préparation, chauffer la lanoline pour la rendre liquide. Liquéfier de même, en chauffant doucement, le bouchon de lanoline au moment des ensemencements et des prélèvements.
Si l'on prévoit un fort dégagement gazeux, il sera prudent d’étrangler un peu le tube au préalable, au niveau qui doit être occupé par la lanoline.
Milieux de Tarozzi. — À un fube de bouillon ordinaire, ajouter un fragment d’organe (foie, elc.) recueilli aseptiquement. Ensemencer ensuite le milieu sans autre préparation.
C. — Dispositifs pour ensemencement des milieux liquides par piqûre. |
Tube de Veillon. — Procédé de choix. — C'est une modification heureuse d’un procédé antérieur de Liborius.
a. Préparer de la gélose un peu faible, renfermant seulement 0,8 p. 100 de gélose sèche; additionner de glucose, 1,5 p. 400. képartir en grands tubes, de telle sorte que le cylindre de gélose atteigne 7 à 8 centimètres de hauteur. Stériliser.
b. Faire bouillir les tubes au bain-marie ; maintenir l'ébullition pendant quinze à vingt minutes. Laisser solidifier.
e. Ensemencer par piqüre profonde ; l'aiguille doit presque toucher le fond.
La partie superficielle du cylindre fait tampon ; elle absorbe un peu d'oxygène, mais elle protège la couche profonde contre loxydation. Les anaérobies stricts commencent à pousser seulement à partir de 2 centimètres de la surface.
Variante. — Pour certaines espèces, on additionnera la gélose de sérum, après ébullition, quand la température sera descendue vers 450.
On préparerait de même la gélatine glucosée.
Procédé du tube à essai profond (Gélatine). — Répartir la gélatine en grands tubes, sur une hauteur de 10 à 12 centimètres.
a. Au moment de l'emploi, faire bouillir pendant quinze à vingt minutes. Refroidir rapidement.
On mettra à fondre en même temps un tube de gélose. =
b. Refroidir rapidement et solidifier la gélatine. Refroidir la gélose, maintenir liquide vers 450.
c. Ensemencer la gélatine en piqüre profonde.
d. Verser à la surface de la gélatine quelques centimètres cubes de gélose. Refroidir très rapidement.
Le bouchon de gélose protège la gélatine contre l'oxydation,
