CULTURES SUR LA GELATINE

La gélatine est répartie dans les tubes d'essai de deux façons, ainsi riue nous l'avons dit ailleurs.

(«) Elle forme un cylindre remplissant exactement le tiers inférieur du tube;

{b) Elle est étalée en couche oblique reposant sur une seule paroi, et allant en s'amincissant vers la partie supérieure du tube.

Nous désignerons, par ellipse, les tubes do la première catégorie sous le nom de tubes droits, ceux de la deuxième sous le nom de tubes obliques.

Les tubes droits seront ensemencés par piqûre; les tubes obliques seront ensemencés par strie.

Ensemencement de la gélatlne par piqûre. — 1° Technique générale. — Le tube de gélatine étant ouvert avec toutes les précautions de règle, portez avec la main droite le fil de platine stérilisé et chargé de la semence à son extrémité dans l'intérieur du tube, cl piquez-le droit dans l'axe du cylindre gélatineux, en ayant soin de le pousser jusqu'au fond du lube; cecifait, retirez doucement le fil de platine, et fermez le tube.

2° Technique des divers ensemencemenis pur piqûre dans lu gélatine. — Comme nous l'avons fait pour

CULTURE nES MICROBES AÉROBIES.

les eiisemenceraeuLs dans les milieux li(|iii(les, nous allons passer rapidement en revue les cas divers qui se présentent dans la pratique des ensemencements par piqûre.

1. Ensi'menccinenl des produilsremeiUh a l' autopsie. — Ces produits sont contenus dans des pipettes fermées., rensemencemcnt immédiat et direct avec la pipette iv'étant pas possible ici comme il l'était pour les malras.

L'opération comprend deux temps : on va d'abord, suivant la technique que nous avons exposée ailleurs, cueillir avec le fil de platine stérilisé, la semence dans la pipette ouverte e{, flambée à son extrémité ; })uis on porte par piqûre cette semence dans le tube de yélatine.

2. Ensemencement d'une culture 'provenant d'un milieu liquide. — Ouvrez purement le matras qui contient la culture; avec le fil de platine stériiisé allez cueillir une goutte de liquide, et piquez-la dans le tube de gélatine.

3. Ensemencement d'une culture provenant d'un milieu solide transparent ou denii-o-pnque. — La technique est la même, que le tube où l'on va puiser la semence soit un tube de gélatine, de gélose ou de sérum, et qu'il contienne ces milieux nutritifs sous forme de cylindre droit ou sous forme de couche oblique.

Placez les deux tubes, le tube qui porte la culture et le tui)i! à ensemencer, côte à côte entre le pouce et l'index gauches, le pouce étant en dessus et donnez-leur une position exactemcid liorizontale, ou très légèrement inclinée, liulevez les bouclions d'ouatt; de l'un cL l'autre tube, et posez-les cnliv les doigts libres do la main gauciu! dans le même intervalle ou à, des intervalles difr(''r(Mi ts. Av(!c Taiguille de platine sié'iilisée, allez puisfi- la cullure dans le lubc ensemencé, et pi(iuez-la ininié-

TECHNIQUE DES CULTURES

diatement dans Tautre tube. Achevez l'opération en fermant aussitôt les deux tubes.

Un cas particulier est celui où la semence doit être puisée dans un tube de gélatine liquéfiée; il faudra dans ce cas donner aux deux tubes disposés entre le pouce et l'index gauches, non plus la position horizontale que la liquéfaction de l'un d'eux rend impossible, mais une position aussi voisine qu'il se pourra de V horizontale.

L'opération se fera d'ailleurs, sauf cette modilication, comme nous l'avons indiqué ci-dessus.

4. Ensemencement d'une culture provenant d'un milieu opaque. ■ — Allez prendre purement (nous dirons plus tard de quelle façon) sur la pomme de terre, etc., une parcelle de semence, à l'aide du lit de platine stérilisé, et piquez-la dans la gélatine.

Ensemencement de la gélatine par strie. — En règle générale, pour réussir un ensemencement par strie, il faut choisir de la gélatine fraîchement préparée. La gélatine ancienne s"écaille sous la pointe du 111 de platine ou sous la friction de la palette de platine et le résultat obtenu est défectueux. Cette règle s'applique également à la gélose.

i° Technique générale. — Le tube étant ouvert, introduisez le fil ou la palette de platine chargés de la semence, et promenez-en doucement l'extrémité sur la surface de la gélatine de la profondeur du tube vers l'ouverture. La strie peut se faire aussi à l'aide de la pipette chargée de semence liquide, et dont on promène doucement l'extrémité finement effilée sur la surface gélatineuse : une goutte de semence se dépose en traînée.

2° Des divers ensemencements par strie sur la gélatine. — Ce serait une redite inutile que de décrire ici l'ensemencement par strie sur la gélatine des

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produits recueillis à l'autopsie dans des pipettes, des cultures provenant de milieux solides, transparents, demi-opaques et opaques. La technique spéciale est la même en tout point que dans le cas d"eiisemencenient par piqûre, et nous prions le lecteur de s'y reporter. Seul le mode d'inoculation diffère : le fil de platine porteur de la semence est promené sur la surface de la gélatine, au lieu d'être piqué dans son épaisseur.

Pour les produits en provenance de milieux de culture liquides ou liquélîés (gélatine liquéliée) nous conseillons de rejeter le fil de platine et de jirocéder avec la pipette de la façon suivante : effilez très finement sur la lampe à alcool l'extrëmil'': d'une pipette, de façon à la terminer par un tube capillaire dont vous briserez la pointe. Allez cueillirpurement avec cette pipette, dans le matras de bouillon ou dans le tube de gélatine liquéfiée, quelques gouttes du iiquidede culture ; introduisez la pipette dans le tube de gélatine, et promenez son extrémité sur la surface de la gélatine : b' liquide s'y déposera en fine traînée.

Ce procédé éh'gant nous conduit à parler d'une méthode générale de transplantation des cultures en provenance d'un milieu solide, quel qu'il soit (gélatine, gélose, sérum, pomme de terre) sur un nouveau milieu solide quel qu'il soit.

Le procédé que nous avons décrit pour transporter sur la gélatine une culture sur milieu solide eu provenance de la gélatine, do la gélose, (lu sih'um, de la pomme de terre, se résume en ceci : aller avec un fil de platine recueillir la semence sur le milieu solide, et la pi(|ucr dans le cylindre gélatineux, ou la déposer en traînée sur la surface (HaliM; de la gélal inc avec ce lil de plal inc.

Ce procédé est bon et correct, mais il i)réseiile le

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léger inconvénient que voici : la semence fait une traînée cvpparente sur le nouveau milieu, etl'observation de son développement s'en trouve gênée.

Pour éviter cet inconvénient, qui se reproduit avec la gélose, le sérum et la pomme de terre comme avec la gélatine, procédez de la façon suivante :

Recueillez avec un fil de platine stérilisé la semence sur le milieu solide; portez-la dans une pipette stérile A que vous aurez remplie de bouillon stérile et qui, pour recevoir la semence, sera coupée, ouverte et flambée comme il a été dit bien des fois. Répandez la semence dans le bouillon en agitant le liquide civec le fil de platine.

Retirez alors le fil de platine qui ne porte plus aucune parcelle compacte de semence à la surface, mais est seulement mouillé par le bouillon ensemencé, et piquez-le dans le tube de gélatine droit qui doit être (.'nsemencé.

Si l'opération doit porter sur la gélatine, lagélose, le sérum à surface obliquement étalée ou sur la pomme de terre, introduisez dans la pipette A où la semence vient d'être, délayée une pipette B finement effilée à son extrémité; cueillez quelques gouttes du liquide de A et portez la pipette B dans le tube de gélatine, gélose ou sérum, ou sur la pomme de terre; la pipette promenée à la surface de ces milieux y déposera le liquide d ensemencement en fine traînée.

Cette manœuvre, qui est infiniment moins compliquée que la description ne le laisserait supposer, donnera avec un peu d'adresse et d'habitude d'excellents résultais : la semence étant déposée sous forme insensible à la surface du milieu de culture, son développement sera aussi facile qu'intéressant à suivre

Les cultures sur gélatine, précieuses parce

CULTURE DES MICROBES AÉROBIES

qu'elles pormetlent d'observer des l'onaos de développement souvent caractéristiques, ont l'iiicouvonient de ne pouvoir être portées à l'éluve, où elles se liquéOent ; elles seront donc laissées à la température atmosphérique, et placées soit dans des vases garnis de coton au fond, soit dans des supports en bois.

CULTL'RES SUR LA 'gÉLOSE.

La gélose est, ainsi que nous l'avons dit, répartie dans les tubes à essai soit en cylindre plein, soit, et plutôt, en plaque étalée. Tout ce que nous avons dit sur l'ensemenceraent des tubes de gélatine par piqûre et par strie, sur la manière iVouvrir et de fermer purement les tubes, d'y transporter la semence de provenances diverses s'applique absolument aux cultures sur la gélose : il est donc inutile de répéter ici l'article précédent.

Les cultures sur gélose seront mises à l'éluve l'astcur, ou à l'étuvc d'Arsonval suivant le cas.

CULTURES SUR SKRUM.

^'ous pouvons dire de la culture sur le sérum ce que nous disions de la culture sur la gélose, c'cst-à-dir(; renvoyer le lecteur jjour la pratique de ces cultures à notre article sur la gélatine.

Ajoutons seulement que le sérum ne se cultive (jue sous forme étalée; son peu do transparence en ferait un milieu imijroprc à l'observation du développement des cultures, s'il était réparti dans les tubes en cylindre plein.