RECHERCHES DANS LES COUPES DE TISSL'S

puis on dispose les coupes comme il a été dil, on les lixe avec le pinceau, on fond la parralTine, etc. comme il est dit ci-dessus.

Recherche des jucroues dans les tissus par la jiéthode de kûhne.

Cette méthode est très avantageuse à employer, car elle permet de colorer des espèces microbiennes qui se colorent mal par les procédés Habituels. Il est donc indiqué de l'employer non seulement dans la recherche de microbes connus, mais surtout lorsqu'il s'agira d'examiner des coupes susceptibles de contenir un agent inconnu.

C'est par l'emploi combiné du bleu de raéthyle et du krystalviolet que Kuhne est arrivé à colorer tous les microbes, sauf le prétendu microbe de la syphilis. D'après le résultat de ses expériences, il divise les microbes au point de vue de la façon dont ils se comportent vis-à-vis de ces deux nuxtières colorantes en trois classes:

1° Ceux qili se colorent par le bleu seulement.

2° Ceux qui se colorent par le krystalviolet seulement.

3° Ceux qui prennent indilTéremment les deux matières colorantes.

I.orsqu'on a à examiner des coupes dans lesquelles on soupçonne l'existence de microbes, il faut donc les traiter des deux façons pour être certain de colorer les micro-organismes.

Manuel opéniloire. — Avant de placer les coupes dans les solutions ([ue nous allons indiquei', il faut les déshydrater dans l'alcool nbsolu.

V' Solulion au bleu dr nidUii/lènc :

IMacez les coupes pendant i'6 minutes dans une solulion àl p. 100 de carlionate d'ammoniaquedans laquelle vous ajoutez goutte à goutte une solution

lîXAMEN DES MICRO-ORGANISMES.

aqueuse concentrée de bleu de méthyle jusqu'à ce que vous ayez obtenu une teinte bleu foncé.

Lavez rapidement ensuite les coupes dans une solution d'acide clilorhydrique à un millième, puis dans l'eau distillée.

Montez la coupe sur une lame; séchez sans employer l'alcool; éclaircissez par le xylol et montez dans le baume.

2° Solution au kristaUviolet :

Placez les coupes pendant 10 minutes dans une solution de carbonate d'ammoniaque à 1 p. 100, dans laquelle vous ajoutez goutte à goutte une solution aqueuse concentrée de krystalviolet, jusqu'à ce que vous ayez obtenu une teinte violet foncé (pour la tuberculose, les coupes doivent rester deux heures dans le bain colorant). Traitez ensuite les coupes pendant deux minutes par la solution iodoiodurée de Grara.

Portez ensuite la coupe dans une solution alcoolique concentrée de fluorescéine, jusqu'à décoloration presque complète. Achevez la décoloration dans l'alcool absolu; éclaircissez par l'essence de girolle; enlevez l'excès d'essence par le xylol, et montez dans le baume.

En employant ces deux procédés simultanément on colorera sûrement les microbes contenus dans les coupes, soit en bleu, soit en violet ou indilTéremmcnt eu bleu ou en violet.

On peut obtenir des doubles colorations avec le krystalviolet en solution alcaline, en colorant la coupe au picro-carmin avant de la placer dans la solution violette.

Kiihnc est arrivé à remplacer l'alcool comme liquide d'extraction par l'huile d'aniline; seulement, ici, la solution colorante est acide. On peut obtenir par ce procédé de belles doubles colorations en colorant au préalable la coupe par le

RECUERCIll'S DANS LES COUPES DE TISSUS. 163

picro-carmin, le brun de Bismarck ou la vésuvine.

Placez la coupe colorée au picro-carmin dans? le liquide suivant, pendant un quart d'heure :

Solution rn|ueuse coiiceatroc de krystallviolet. 30 gr. Acide clilorliydi-ique 1 gîte.

Lavez ensuite la coupe dans Teau ; traitez-la pendant deux minutes par la solution iodo-iodurée de Gram. Montez sur lamelle; séchez; décolorez par l'huile d'aniline; enlevez l'excès d'huile par le xylol et montez dans le baume.