MÉTHODE DE COLORATION DES CILS

(20 centimètres cubes de (3 à 15 centimètres cubes de « pour 16 centimètres cubes d’encre). Voici des exemples:

Spirillum concentricum . Encre seule.

Choléra asiatique. ... 1/2 goutte de a dans 16 cc. d’encre.

Bacille typhique .... 1 cc. de (3 dans 16 cc. d’encre.

B. subtilis 20 à 30 gouttes dans 16 cc. d’encre.

Vibrion septique .... 37 gouttes dans 16 cc. d’encre.

Cette méthode occasionne d’abondants grumeaux très adhérents.

Elle a été modifiée par Nicolle et Morax qui jugent inutile l’addition d’alcali, ou d’acide et remplacent le colorant de Lôffler par la fuchsine de Ziehl, par Lutschke qui substitue l'acétate au sulfate de fer (moins de grumeaux) ; par Ramon y Cajal qui substitue, dans le mordant, la fuchsine anilinée à la fuchsine alcoolique, par Bunge, Cerrito, etc.

b. Procédé de Sclavo. Laisser une minute dans :

Tanin 1 gramme.

Alcool à 50® 100 —

Laver. Laisser une minute dans une solution aqueuse à 5 p. 100 d’acide phospho-tungstique. Laver rapidement dans l’eau distillée. Laisser trois ou quatre minutes dans la solution d'Ehrlich légèrement chauffée. Laver, sécher, etc. Mauvaise méthode.

c. Procédé de Van Ermenghen (1893) (le meilleur). — Laisser trente minutes à froid, ou cinq minutes à -f 60°, dans le bain fixateur :

A. osmique2p. 100 1 cent. cube.

Tanin 10 à 25 p. 100 2 —

A. acétique 4 à 5 gouttes.

Laver soigneusement à l’eau. Passer cinq à dix secondes dans du nitrate d’argent à 0,5 p. 100. Mettre, sans laver, dans le bain réducteur :

A. gallique 5 grammes.

Tanin 5 —

Acétate de soude fondu 10 —

Eau 350 —

Repasser dans le nitrate d’argent et de nouveau dans le bain réducteur. Laver, sécher, etc.

Le principe est la réduction d’un sel d'argent à la surface des cils préalablement fixés.

d. Procédé de Neuhaus (pour le Bacille typhique). — Mettre sur la lame quelques gouttes de la solution :

Tanin à 50 p. 100 (filtrer) 100 cent, cubes.

Solution saturée de sulfate ferreux . 50 ■ —

Sol. alcoolique saturée de fuchsine . 10 —

et chauffer, à quatre reprises différentes, sur la flamme jusqu’à dégagement de vapeurs. Laver à l’eau. Colorer au Ziehl. Laver, etc. Suivant que le microbe a une sécrétion alcaline ou acide, on neutralise avec quelques gouttes d’une solution à 10 p. 100 de soude ou d’acide sulfurique.

e. Procédé de de Rossi (1900). — Se servir d’une culture fraîche, sur agar, ne contenant pas de chlorure de sodium en excès. On verse sur la lamelle : 4 à 5 gouttes d’une solution de Ziehl et une goutte de :

Solution aqueuse à 1 p. 1 000 de potasse caustique . 100 grammes.

Acide tannique 25 —

(Dissoudre à chaud.)

On laisse en présence 15 à 25 minutes. On lave et on monte.

f. Procédé de Gemelli. — On laisse 10 à 20 minutes dans :

Permanganate de potasse 0sr,25

Eau distillée 100 grammes.

On lave dans l’eau distillée et on laisse 15 à 30 minutes dans :

Sol. de chlorure de calcium 0,75 p. 100 . . 20 parties.

Sol. de rouge neutre 1 p. 100 dans eau distillée. 1 —

On lave, on dessèche.

Tous ces procédés 1 sont délicats. Répétons les principales précautions. 11 ne faut pas employer une culture en bouillon,

1 Voir la thèse de R. Dupond (Nancy, 1905) sur la Motilité et les organes moteurs des bactéries, 180 pages et figures.