T ECU N I 0 U E A P P L I Q UE E

généralement pour la reelierclie de ces derniers que cette méthode est employée. Le protoplasma est incolore ou grisâtre. Du reste la teinte varie suivant l'intensité delà coloration et le degré de la différenciation.

h. Autres colorants. — En dehors de l'hématoxyline au fer on emploiera, suivant le fixateur choisi, exclusivement les couleurs d’aniline ou concurremment avec ces dernières l’hématéine et l'éosine, ou bien le carmin aluné et l'éosine. L'étude des préparations doit être faite avec un objectif à immersion.

3° Exemples de quelques préparations cytologiques. — Nous donnerons ici quelques exemples de préparations cytologiques; chacun 71 r en trouvera d’autres dans sa propre pratique.

a. Mésentère de la salamandre. — Le mésentère de la salamandre fixé par la liqueur de Flemming et coloré au bleu de méthylène polychrome exactement comme il a été dit page 239, peut servir d’objet d'étude pour nombre d'éléments.

On y examinera avec fruit les cellules endothéliales, les fibres musculaires lisses, les vaisseaux sanguins, les globules rouges du sang et les globules blancs tant intra-vasculaires que extra-vasculaires. Des détails suffisants ont été donnés sur ces différents éléments pour qu'il n'y ait rien à ajouter ici.

b. Cellules épithéliales du rein de la salamandre. — Le rein fixé par la liqueur de Flemming et inclus à la paraffine est coloré à la safranine et au vert lumière : la striation longitudinale des cellules se voit admirablement. On préparera de

Rein de la salamandre (fixation au liquide de Flemming, coloration parlaméthode defienda).

te, tissu conjonctif. — nr , noyau des cellules rénales .

Stiassnie, ocul. 2, objcct. 5.

iao

même avec succès les cellules cylindriques à plateau strié de l'intestin du même animal.

c. Ecorce lymphoïde du foie de la salamandre. — Le foie de la salamandre comme celui d'autres Batraciens présente en dessous de son enveloppe péritonéale une couche de globules blancs pressés les uns contre les autres. Ces globules, de grande taille, permettent de voir les sphères attractives sous la forme de petits corps fortement colorés et souvent entourés d'un aster de petite taille. Les sphères attractives siègent surtout dans le protoplasma situé dans la partie concave du noyau généralement courbé en arc ou en fer à cheval.

Division cellulaire

Connue il est difficile de trouver un exemple parfait pour la démonstration de la karyokinèse, on étudiera cette dernière dans plusieurs cas, qui offrent l'avantage de montrer chacun d’une manière particulièrement nette un des côtés de la question. C'est ainsi que l'on verra très aisément le filament nucléaire et ses transformations dans les cellules épidermiques des larves de triton, tandis que les figures achromatiques et les centrosomes devront être recherchés dans les divisions cellulaires des spermatocytes. J'ajouterai, comme particulièrement favorable à l’étude de la division cellulaire, le blastoderme de la seiche.

1° Cellules épidermiques de la queue des larves de triton. — On choisit la queue de préférence à toute autre partie du corps parce qu'elle ne renferme pas de cellules à mucus qui, par leur présence, gênent l’observation des cellules épidermiques. On fixe les larves entières par le liquide de Kleinenberg; puis, après les avoir parfaitement décolorées par l’alcool à 70°, on les met dans l'eau et, se servant de pinces fines et de petits ciseaux, on arrache de grands lambeaux d’épiderme que l’on colore ensuite à l’hématéine et à l’éosine et que l'on monte au baume. On rencontre dans ces préparations de larges espaces dans lesquels les cellules épidermiques restent seules.

TECHNIQUE APPLIQUEE

En d’autres points il y a un peu de tissu muqueux, mais cela ne gêne en rien l'étude des figures de division que l'on trouve à tous les stades désirables. .

On peut aussi fixer les larves par le liquide de Flemming,

Fig. 100.

Karyokinèse dans l’épithélium de la queue des larves de triton (liquide de Kleinenberg, hématéine, éosine).

Stiassnic, ocul. 2, objccl. 8.

enlever des lambeaux d’épiderme et colorer au violet de gentiane et à l'orange G ou au bleu polychrome.

2° Division cellulaire dans la spermatogenèse. — On

fixe à l'aide du liquide de Flemming des fragments de testicule du rat : par exemple du rat blanc, animal facile à avoir dans les laboratoires. On inclut dans la paraffine et on fait des coupes très minces que l'on colore par la méthode de Flemming, par le bleu polychrome, l’hématoxyline d’Heidenhain, ou mieux encore par la safranine et le vert lumière. On trouve toujours certains points des tubes séminifères dans lesquels les gros spermatocytes sont en voie de division. On reconnaît alors les

G E I, L U 1. E ET D I V I S ï 0 X G E I, L U L A I H E

fuseaux dont les filaments sont colorés en vert. La sphère attractive est assez volumineuse et également colorée en vert.

3° Étude de la segmentation des œufs de seiche.

Bien que l’exemple que voici ne soit pas fourni par un animal vertébré, il me paraît avoir tant d’avantages pour l’étude de la division cellulaire que je ne puis le passer sous silence. La segmentation de l’œuf de seiche s’effectue dans une lame protoplasmique mince placée au pôle de l'œuf. Les cellules de segmentation sont très grandes, plates et minces, de sorte

qu’il est aisé de les observer par transparence sans être obligé d'y faire des coupes et que la position des figures de division dans un plan perpendiculaire au rayon visuel de l’observateur rend ces ligures très faciles à bien voir. Enfin, dernier détail de grande importance, la division ne s’effectue pas simultanément dans toutes les cellules à la fois, mais elle commence toujours à un des pôles du champ blastodermique et marche régulièrement vers l’afitre pôle, de sorte que l’on peut trouver dans un même blastoderme toutes les phases de la division cellulaire régulièrement échelonnées les unes après les

autres.

Voici comment on prépare les blastodermes. Les œufs sont dépouillés de leur enveloppe noire; on porte dans un mélange à parties égales de liquide de Kleinenberg et de bichromate de potasse à 2, 5 p. 100, le globe de l’œuf parfaitement clair et transparent. Sous' ce mélange on coupe l’œuf suivant l'équateur; le chorion se durcit rapidement. On le saisit avec des pinces fines et on l’enlève de la moitié de l’œuf portant le blastoderme (hémisphère pointu), puis, se servant de la spatule de platine, on se hâte de porter cet hémisphère blastodermique dans la liqueur de Kleinenberg pure. Au bout de deux heures, à l’aide de la pointe de la spatule de platine, on détache le blastoderme du vitellus, ce qui est assez facile, on le met dans l’alcool à 70° et on fait les lavages nécessaires. On colore ensuite ces blastodermes soit à la safranine, soit au carmin boracique, soit à l’hématoxyline de Kleinenberg.