M É T H O D ES G É N É R A L E S

cela, car les coupes se colorent toujours aisément, même après un séjour prolongé des pièces dans le fixateur.

§ 6. — Liquide au bichromate de potasse

ET AU SULFATE DE SOUDE (Liquide de Müller.)

Ce liquide fut introduit dans la technique par H. Müller, qui obtint avec lui de meilleurs résultats qu’avec l'alcool pour certaines structures délicates, telles que celle de la rétine.

11 se compose du mélange suivant :

Bichromate de potasse 2 grammes

Sulfate de soude 1 —

Eau distillée 100 —

La dissolution du bichromate dans l’eau exige au moins vingtquatre heures; si l’on est pressé, on abrège ce temps en broyant les cristaux de bichromate et en élevant la température de l’eau.

Le liquide de Müller est un liquide jaune-orange, comme le bichromate qui entre dans sa composition, et qui paraît devoir ses propriétés fixatrices à ce sel, le sulfate de soude ne paraissant servir qu’à augmenter sa densité et son pouvoir pénétrant. C’est un réactif bon marché, dont on peut user de grandes quantités.

1° Mode d’emploi. — Comme il a été dit plus haut, ce liquide pénètre assez bien, de sorte que l’on peut y mettre des pièces relativement volumineuses , telles qu’un segment de rein d’homme comprenant à la fois la substance corticale et une pyramide de Malpighi. Les pièces sont suspendues par un fil dans une grande quantité de réactif que l’on a soin de renouveler tous les jours pendant la première semaine et de temps à autre par la suite.

La fixation est peu rapide et demande huit et même quinze jours ; au bout de ce temps, la pièce peut être débitée en

coupes, mais elle peut sans inconvénient rester dans le liquide des semaines et même des mois. C’est généralement au bout d’un mois ou deux que les pièces conservées dans le liquide de Millier présentent la consistance la plus favorable pour y faire des coupes directement et sans inclusion préalable. Au bout de plusieurs mois elles deviennent friables et les épithéliums de revêtement s’enlèvent facilement, laissant à nu les surfaces qu'ils recouvraient.

Il faut éviter soigneusement le développement des moisissures dans les flacons qui renferment les pièces; pour cela on doit les bouclier avec soin et renouveler fréquemment le liquide.

Lorsqu’on veut mettre en préparation une pièce lixée par le liquide de Muller, on commence par la laver à l’eau courante pendant quelques heures pour enlever tout l'excès de bichromate non fixé sur les tissus. Pendant le cours de cette opération, il faut surveiller la direction et la force du courant d'eau employé, parce qu’il peut très bien, s’il arrive directement sur la pièce, en détacher certains éléments. L’épithélium de la peau de certains poissons fixés depuis quelques mois dans le liquide de Muller s’enlèvera très aisément sous l’action d’un simple filet d’eau. Une fois le lavage terminé, les manipulations ultérieures se font suivant le mode de préparation choisi, c’est ainsi que l'on passera la pièce dans les alcools successifs , 70, 90u, si l’on veut l'inclure plus tard dans la paraffine, ou au contraire on la portera directement dans la solution de gomme arabique si l'on se contente du durcisse ment produit par cette substance, et ainsi de suite.

J’emploie souvent avec succès, lorsqu'il s'agit de petites pièces, la liqueur de Millier additionnée d’un peu d'acide osmique dans les proportions suivantes :

Liqueur de Millier 100 centimètres cubes

Acide osmique (sol. à i p. lUOj. 2 à 5 —

On plonge la pièce suspendue par un fil au milieu de ce liquide. On le renouvelle deux ou trois fois en vingt- quatre heures, puis on le remplace par de la liqueur de Millier pure.

iüi

Ce liquide fixateur, que j’ai appris à connaître il y a une quinzaine d’années au laboratoire du professeur Kexaut, m'a constamment donné de bons résultats. Il existe du reste d’autres mélanges osmio-bichromiques (liqueurs d’ÂLTMANN, de Llndsay, de Cajal). L’action de l’acide osmique ne se fait sentir que sur une faible épaisseur de la pièce, mais elle est suffisamment marquée pour conserver des structures délicates.

2° Indications. — La liqueur de Millier est un réactif très utile. Elle fixe et conserve bien des éléments délicats tels que ceux de la rétine, les cellules épithéliales des parenchymes du rein, du foie, etc. Elle peut donc être employée pour la fixation ordinaire des pièces provenant des autopsies. Son faible prix de revient permet d’en consacrer de grandes quantités à recueillir et garder pendant quelque temps des matériaux que l’on laisserait peut-être perdre s'il fallait employer pour eux des réactifs plus chers.

Une indication très importante et même capitale de l’emploi de la liqueur de Millier, est le désir d’examiner dans une pièce les vaisseaux capillaires remplis de globules rouges comme ils le sonl pendant la vie. et produisant par conséquent l'effet d'une injection naturelle. En effet, cette liqueur fixe les tissus en laissant les vaisseaux de petit diamètre gorgés de globules rouges — ce qui n'arrive pas au même degré avec les autres fixateurs — de telle manière que leur trajet est facile à suivre et que l’on peut aisément étudier les rapports des vaisseaux avec les autres éléments constituant l’organe. Les globules rouges ont pris une teinte brun rougeâtre qui permet, à défaut même de toute autre coloration, de suivre le trajet des capillaires. Ils ont aussi assez bien conservé leur forme. Si l’on a eu soin d’empêcher les gros vaisseaux de l’organe fixé de se vider de leur sang, au moment où l'on a fait l’autopsie, on a, par ce mode de fixation, des injections naturelles admirables et très précieuses. A cause de cette propriété on ne devra jamais négliger d'employer la liqueur de Müller pour la fixation de pièces destinées à l’élude de l’Anatomie microscopique.

Pour les études de cytologie, la liqueur de Millier pure doit être rejetée, parce qu'elle donne des fixations insuflisantes pour les fins détails. L'addition d'une certaine quantité d’acide osmique l’améliore beaucoup pour ces cas.

§ 7. — Bichlorure de mercure (sublimé)

Le bichlorure de mercure est un excellent fixateur, qui rend de grands services dans la fixation d’êtres très délicats comme certaines planaires, que seul il permet d’obtenir en bon état. Il est aussi employé pour fhistologie des Vertébrés, comme on le verra ci-dessous. Il y a un grand nombre de formules de solutions fixatrices au sublimé ; nous employons d'habitude la suivante :

Eau 100 grammes

Sel marin 0 gr. 5

Bichlorure de mercure q. s. (7,5)

Acide azotique I goutte

Pour faire cette solution on met du sublimé dans l’eau salée à 0,5 p. 100, et on fait chauffer. La liqueur se trouble ; on laisse refroidir lentement et il se dépose au fond de longues aiguilles de sublimé. Ce mélange est tout simplement une solution aqueuse concentrée de sublimé, le chlorure de sodium ajouté à l'eau augmente la solubilité du sel de mercure dans cette dernière, et donne par suite une liqueur plus riche en sublimé. L'acide azotique est destiné à neutraliser l’ammoniaque atmosphérique qui amène la formation d'un précipité très fin (Bolles Lee). Ce précipité se forme moins rapidement dans les solutions contenant de l’acide, néanmoins celles-ci ne se conservent pas longtemps à l’état de limpidité parfaite, et il est bon de les préparer seulement au fur et à mesure des besoins. Rawitz recommande de les mettre dans un llacon de verre sombre ou dans un endroit peu éclairé.

1° Mode d’emploi. — Des fragments très petits sont placés dans une grande quantité de solution. On les y laisse jusqu'à