ENCASTREMENT

peut mélanger à la gélatine une faible proportion de glycérine, qui l'ompèche de sécher trop et de devenir cassante. On emploierait de même la gomme laque dissoute dans l'alcool, ou la stéarine, mais pour dos pièces préalablement traitées par l'essence de térébenthine. Il est toujours important, quand on veut pratiquer des coupes utiles, de se ])ien assurer de la direction suivie par le rasoir ; pour cela il est nécessaire, quand l'encollage n'est pas transparent, de mettre des points de repère.

§ 41 . — Encnstrcmcnt.

V encastrement consiste à fixer au milieu d'un corps suffisamment dur un organe trop ténu ou trop mou pour être coupé sans cet arlifice.

La moelle de sureau est la substance dont on se sert généralement. Elle trouve surtout une application dans les coupes faites au microtome. On remplit de moelle les vides laissés par Fobjet à couper ou bien on encastre directement celui-ci dans un fragment de moelle. Quand la pièce est ainsi bien fixée, on plonge le tout dans l'alcool. La moelle de sureau se gonfle, se moule sur le tissu, et le retient en le pressant de tous côtés également. Nous répéterons encore ici ce que nous avons déjà dit: que nous ne pouvons entrer dans tous les détails de ces manipulations, qui ne peuvent s'apprendre que par la fréquentation des laboratoires. Chacun reste d'ailleurs en ces sortes de choses son grand maître ; chacun invente pour soi des procédés plus ou moins ingénieux, et desquels, en tous cas, il se sert toujours mieux que tout autre.

La cire, la paraffine, etc., servent comme la moelle de sureau à encastrer les pièces dans beaucoup de circonstances. On fait fondre la paraffine et aussitôt qu'elle est fondue on la verse dans de petites, caisses en papier de la grandeur voulue. On y plonge l'objet en ayant soin, si cela est nécessaire, d'observer Forientation qu'on lui donne, afin de pratiquer ensuite les coupes dans le sens le plus favorable.. On laisse refroidir. Alors on attaque la paraffine avec un instrument tranchant par un des côtés du bloc, de manière à atteindre la pièce, et on plonge le tout dans falcool, où on peut le conserver jusqu'au moment de s'en .servir. Avant de faire subir aux pièces ce traitement, et afin que la paraffine englobe bien le fragment à couper, on devra^ toujours Favoir laissé séjourner au préalable quelque temps dans- Falcool; on l'essuie avec du papier buvard de manière à le sécher ua peu, avant de le plonger dans la paraffine.

Le mélange iV huile et de cire s'emploie comme la paralline.

Flcmming- a proposé l'usage du savon transparent brut (prélei-abie à celui à la glycérine) que l'on fait dissoudre avec le tiers ou la moitié de son volume d'alcool, à la chaleur. On coule dans des aiisses de papier. Quand la masse est solide, on dégage la pièce (pi'on laisse sécher un ou deux jours. On peut alors pratiquer à sec avec le ratsoir les coupes les plus lines , qu'on lave ensuite à l'eau et qu'on conserve dans la glycérine. Dans cette pratique l'alcalinité du savon est un grave inconvénient que l'on arrive toutefois à prévenir [)ar quelques tours de main et spécialement en employant l'eau de sellz an lieu d'eau ordinaire pour dégager les coupes. On devra aussi .s'assurer que le savon ne contient point d'alcali libre.

,§ 42. — Coupes acs niciubrane»4 minces.

Pour pratiquer des coupes sur des membranes minces peu épaisses on a recours à divers tours de main dans lesquels on acquiert vile une très-grande habileté.

Le procédé le plus simple et qui donne presque toujours d'excellents résultats est celui de la planchette. Celle-ci est communément on caoutchouc durci, mais on peut également, se servir de bois, et on prendra dans ce cas un morceau de buis poli pour la gravure. On étale la membrane sur la planchette et on en provoque l'adhérence en la laissant se dessécher très-légèrement. Parfois on l'a humectée avec un peu d'eau gommée, afin que cette adhérence se fasse mieux. Quand elle est suffisante on prend un rasoir à lame un peu courbe et on pratique rapidement et sans désemparer une série de coupes en avançant d'une extrémité à l'autre du fragmenta couper. On procède en somme comme avec un hachoir à deux mains. Pour enlever ensuite les coupes on verse sur elles une ou deux gouttes d'eau, après quoi on les fait glisser sans difficulté sur le plat d'un bistouri. On peut au besoin les prendre une à une dans leur ordre avec des pinces. Il est bien clair qu'on n'obtient jamais par ce procédé des coupes aussi régulières qu'en saisissantla membrane dans un encollage quelconque. Mais on y trouve d'autres avantages : en particulier celui de ne faire .subir à la préparation aucune déformation au cours de la recherclK!. Dans le nombre des coupes ainsi fiiites il s'en trouve de trop épaisses et de trop minces, mais il y en a toujours un certain nomi)re qui soni excellentes. Et il n'y a pas en somme de meilleur procédé pour l'étude de la rétine, des feuillets du blastoderme, etc.

ÉCLAlRCISSAiNTS. 61

Si on ne rcdoulc pas d'avoir recours à rencollage, on se trouvera bien d'appliquer la membrane que l'on met dans la gomme, puis l'aleool, sur une feuille de papier à filtre, avec lequel elle conserve des adhérences et avec lequel on la coupe. Les coupes se manient ensuite plus aisément, grâce à ce lambeau de papier qui les soutient et qui a de plus l'avantage de jouer le rôle de tasseau sous le verre mince.

Si la membrane est solide et résistante, on peut la rouler sur ellemême et en faire une sorte de petit cylindre qui se prête facilement à la coupe; on peut encore en saisir un fragment entre deux morceaux de sureau et le couper ainsi. Un autre procédé consiste à placer la membrane entre deux fragments d'un tissu mou, du foie par exemple, cl à durcir le tout par la gomme et l'alcool. Dans l'eau les coupes de la membrane s'isolent du tissu protecteur. Il est bien entendu que ces coupes de membranes minces doivent être pratiquées comme toujours sur des parties dont les éléments ont été fixés au préalable par les réactifs convenables.

§ 43. — Éclftîrcîssanls.

Les coupes ne peuvent pas en général être observées dans les liquides qui servent de véhicules ordinaires ; elles ont une épaisseur qui exige qu'on les rende transparentes ou, comme on dit, qu'on les éclaircisse. D'autres" fois on veut aussi les colorer. Nous prendrons ce dernier cas et nous indiquerons les diverses opérations par lesquelles il faut alors faire passer la coupe. Après l'avoir laissée séjourner dans l'eau le temps convenable pour la débarrasser de l'alcool (où le carmin rsl insoluble) et de la gomme qui a servi à la durcir, on la colore; quand on juge qu'elle est arrivée au point de coloration convenable, on la retire. Elle est opaque, mais comme les corps qui la rendront transparènte, la benzine, la térébenthine, la créosote, l'essence de l^irofle, etc., ne sont point miscibles à l'eau, ou du moins ne le sont iiu'en proportion ti'cs-faiblc, il devient nécessaire, avant d'avoir recours à ces agents, déshydrater la préparation. Cela se fait en la plongeant dans l'alcool absolu (celui du commerce peut suffire) qui enlève toute l'eau et permet dès lors l'action des liquides éclaircissants. Pour rendre la manipulation plus rapide, on peut étancher légèrement les 'oupes sur du papier buvard, ou du papier à cigarettes qui est excellent pour cela, avant de les faire passer d'un liquide dans l'autre.

Ou.'md la coupe est transparente, il ne reste plus qu'à la transporter après l'avoir encore une fois légèrement étanchée, dans un corps

résineux qui la conserve. Celui qu'on emploie acLuellemenl est le baume de Damar. On emploie également le baume du Canada rendu liquide soit par une faible cbaleur, soit par l'addition de clilorolonne. Dans ce dei'nier cas le baume diminue toujours entre les deux lames de verre. 11 se lait dès le premier jour des vides. On les comble en ajoutant une nouvelle goutte do la solution sous le bord du verre mince.

Les coupes ainsi obtenues sont bonnes pour les vues d'ensemble , ce ne sont pas toujours, ce sont môme rarement les meilleui-es pour l'étude intime des éléments. Cette série de manipulations et de réactions par laquelle passe la préparation n'est pas sans nuire un peu à sa perfection. Quand on a des coupes très-minces, il est toujours pivîférable de les placer directement et de les conserver dans la glycérine. Il faut au reste bien distinguer ce que l'on pourrait appeler les jmparations de collection, qui comportent une certaine élégance, certains soins de détail, des préparations d'étude auxquelles on demande avant tout d'être démonstratives d'un fait ou d'une particularité donnés. A ce point de vue, on ne devra jamais négliger d'observer les coupes incomplètes. Il arrive souvent que ces coupes taillées en biseau sur un de leurs bords laissentvoir des détails de structure qu'on n'aperçoit pas sur des préparations dites vulgairement : mieux réussies.

§ ii. — Colorants. Carmin.

On tire un grand parti en histologie de la coloration partielle ou totale des fragments de tissu que l'on soumet à l'examen du microscope. De tous les procédés employés pour les colorer, le plus pratique est l'usage du carmin. On emploie aujourd'hui de préférence le picrocarrainate d'ammoniaque, qui a l'avantage de colorer certains éléments ou certaines parties des éléments en rouge, tandis que l'acide picriquc se portant sur d'autres parties les colore en jaune. Nous n'avons pas besoin de rappeler que les colorants ne doivent jamais être employés que pour rendre plus visibles, ou mieux, plus distinctes des parties qui le seraient moins sans cela.

Pour préparer celte solution, on imbibe d'eau un fragment de carmin de première qualité, puis on le place au fond d'un tube en versant sur lui quelques gouttes d'ammoniaque. Le lendemain le carmin est entièrement dissous ; on ajoute de l'eau distillée, puis on neutralise l'ammoniaque au moyen d'une solution concentrée d'acide picrique. Le mélange doit avoir une couleur rouge orangée. Le picrocarminate sera d'autant meilleur qu'on se sera plus approché sans l'atteindre

UÉACTIFS USUELS. 63

lia point de saturation de l'ammoniaque. On peut employer de même l'acide acétique, et cette solution olïVc dans certains cas des avantages marqués sur la précédente. L'important est que le carmin, par suite du laible excès d'ammoniaque qui tend lui-même à s'évaporer, soit pour ainsi dire en état de combinaison instable. Aussitôt que le carmin dans cet état se trouve en présence de corps qui en sont avides, il se précipite sur eux. iNous avons dit que le nucléole, le noyau, le corps des cellules avaient, dans l'ordre même où nous les désignons, une affinité de moins en moins grande pour le carmin. Si la solutionpar laquelle on a traité la substance est très-faible, le noyau seul est coloré et non le corps des cellules que le carmin traverse sans s'y fixer. Nous avons dit précédemment que les substances organiques encore vivantes n'élaient pas en général teintes par le carmin. On n'obtient d'autre part que de mauvaises imbibitions quand la préparation que l'on veut carminer est encore imprégnée de liquides acides ou alcooliques : l'acide s'emparant de l'ammoniaque précipite sur place le carmin, en dehors des lieux d'élection où il se serait déposé sur une pièce imbibée d'un liquide neutre.

Certaines solutions de carmin dans lesquelles la matière colorante se précipite lentement, et qui sont à cause de cela louches, sont souvent les meilleures ; il suffira dans ce cas de filtrer pour l'usage de chaque jour quelques gouttes de cette solution sur un très-petit filtre de papier.

§ 4-5. — Fermeture des préparations.

La fermeture des préparations est un des côtés les plus grossiers de !la technique microscopique. Nous ne nous y arrêterons point, nous - bornant à énumérer les substances employées dans ce cas : le bitume -de Judée, le baume de Damar, la cire, la gomme laque en dissolution dans l'alcool, la paraffine, etc. Celle-ci s'applique généralement au moyen d'une tige de fer creuse que l'on chauffe à la lampe. On peut l'appliquer tout aussi bien en faisant fondre la paraffine et en la portant ur les bords du verre mince au moyen d'un pinceau que l'on a soin <le couper carrément à un millimètre environ de la pointe.

§ 46. — Réactifs» usducls.

Nous nous étendrons un peu plus sur l'action d'une série de réactifs ■({ue nous allons passer en revue et qui sont mis à profit pour les études histologiques. La connaissance de ceux-ci n'a plus trait simplement à la technique ; elle importe à la science des éléments et des

o* TECHNlQUi:.

tissus eiix-mômcs, puisqu'elle n'est que l'expression des modifications qu'ils ollVent en présence de ces divers aj^ents. On ne devra pas oublier que ces réactions sont l'apportées en f^énéral à la substance organiqui? telle qu'on la trouve sur l'animal vivant ou le cadavre. Elles cban}^ent si on l'ait agir les mêmes réactifs sur des tissus ayant macéré daus des solutions spéciales. C'est ainsi que l'acide acétique ne gonllera plus le?; fibres lamineuses d'un tissu durci par l'acide chromique : de môme des autres réactions. Ce point ne doit jamais être perdu de vue par l'élève^ qui débute.

Nous suivrons un ordre absolument artificiel, le même à peu près qu'a adopté M. Ch. Robin dans son traité Du microscope.

Ecm. — L'eau, avons-nous dit, altère très-rapidement un grand nombre d'éléments anatomiques, par exemple les globules du sang el du pus ; l'eau gonfle le tissu cellulaire, lui donne une apparence gélatineuse, et le rend légèrement transparent, condition qui pourra être utile, mais qu'on obtiendra beaucoup mieux avec les solutions étendues d'acide acétique, azotique, etc.

L'eau à une certaine température devient un durcissant ; on peut l'employer pour les muscles dont les stries se voient très-bien sur la viande bouillie.

Elle devient aussi un dissociant si l'on ne fait qu'y plonger certaine I issus. C'est ainsi qu'on observera très-bien les fibres cellules des estomacs du bœuf sur le gras double acheté chez les marchands Iripiers. On dissocie, en les plongeant dans l'eau à 55 degrés, les fibresd'un muscle de grenouille (1).

Eau oxygénée. — L'eau oxygénée peut rendre parfois de grands, services comme décolorant. En laissant tremper des coupes faites sur des tumeurs mélaniques dans un mélange à parties égales d'eau oxygénée et de glycérine, on détruit en partie la couleur noire du pigment et la préparation se trouve sensiblement éclaircie (voy. § 26). L'eau oxygénée détruit également la matière colorante des cheveux et celle du test de certains insectes ayant une couleur foncée, comme les dytiques, les hydrophiles, etc.

Glycérine. — La glycérine est d'un usage constant pour conserver les préparations microscopiques délicates. Elle altère profondémeni les éléments et les tissus frais qu'on y plonge. Pour conserver les

(l) Il no semble point qu'on ail fait jusqu'ici des recherches hislologiqucs au nioyon di" la marmite de Papin, qui donneraient sans doute d'intéressants résultats.

n^ACTIFS USUKLS. bo

préparations faites sur des tissus macérés, il importe qu'elle soil légèrement acide. 11 est d'habitude de la rendre acide avec une très-petite quantité d'acide ibrmique ou d'acide oxalique.

Quand on a sous le microscope une préparation heureuse que l'on désh-e conserver, il suffira d'ajouter sur le bord du verre mince une goutte de glycérine. Celle-ci pénètre peu à peu sous la plaque en se mêlant au' liquide qui sert de véhicule. Ce mélange est toujours excellent pour la conservation de la préparation et vaut mieux que la glycérine pure : il se produit une substitution partielle de celle-ci l une certaine quantité d'eau qui s'évapore. Au bout de quelques jours on m'a plus qu'à fermer la préparation. Mais la condition essentielle pour cela est d'enlever de la surface de la bande de verre, autour de la lame mince, toute trace de glycérine qui s'y pourrait trouver; autrement le corps résineux employé n'adhère pas au verre.

La glycérine est un réactif spécial du tissu osseux où elle fait apparaître les cavités de la substance osseuse en y provoquant la production d'un gaz qui les remplit ainsi que leurs plus fins prolongements.

■ A /cooL — L'alcool est dans beaucoup de cas un excellent durcissant, soit qu'on l'emploie seul, soit qu'on en combine l'usage avec celui de l'acide chromique ou de l'acide picrique. Il doit être seul employé pour durcir les tissus injectés. Nous donnerons en parlant du système vasculaire les indications générales sur la pratique des injections. L'alcool est essentiel pour faire les coupes, le rasoir doit toujours en être imprégné. L'alcool méthylique peut être employé pour ce dernier usage à la place de l'alcool ordinaire.

Ranvier a préconisé l'emploi de l'alcool à 30 degrés centésimaux (alcool au tiers, deux parties d'eau distillée pour une partie d'alcool à 36 degrés Cartier) pour fixer les éléments anatomiques, 'particulièrement ceux qui sont isolés, tels que les hématies, les leucocytes, les spermatozoïdes, les ovules. Il fixe également les cellules nerveuses avec leurs prolongements, seulement la macération doit être prolongée pendant plusieurs semaines, tandis qu'on obtient le même résultat en deux ou trois jours par l'acide chromique à 1/3400.

On peut également employer l'alcool comme dissociant, en y laissant séjourner les fragments de tissu pendant vingt-quatre ou quarantehuit heures. On isole ainsi rapidement les cellules épithéliales. La liqueur de Millier demande un temps plus long, mais le résultat est meillcin-.

Chloral. — Le chloral rend de grands services en histologie comme durcissant. Il peut servir à préparer les rétines. Il coagule aussi la

POUCHKT. 5

68 TECHNIQUK,

myéline [des nci'fs, comme l'alcool absolu. Il nous a paru qu'alors la myéline devenail susceptible d'être colorée par le carmin.

- Acide acétique. — L'acide acétique jouit de la propriété de rendre gélatineux et transparent le tissu lamineux, tandis qu'il est à peu près sans action sur le tissu des glandes; il favorisera donc la recherche de celles-ci. Par le même cflet il tend à détacher les revêtements épidermiques des tissus lamineux (derme ou chorion) sous-jacents.

L'acide acélique est aussi employé très-fréquemment comme éclaircissant. Faisant disparaître certains éléments des tissus, tels que les fibres lamineuses, les fdDres - cellules , il rend visibles les noyaux contenus au milieu de ces éléments et devient un utile auxiliaire pour les rechercher.

L'emploi de l'acide acétique faible se combine aussi, comme nous le dirons, avec l'emploi du chlorure d'or et de l'acide osmique. Il sert dans ce cas à gonfler et rendre transparents les tissus afin de faciliter l'examen des terminaisons nerveuses, après qu'on a artificiellement coloré celles-ci par les deux autres réactifs en question. On empêche les végétations de se développer dans les solutions étendues d'acide acétique en y mettant une goutte d'acide phénique.

On forme avec un mélange de huit à dix gouttes d'acide acélique dans 30 grammes d'alcool , le liquide de Beale où beaucoup de tissus acquièrent peu à peu un durcissement qui les rend propres à en faire des coupes, en même temps qu'ils deviennent transparents et un peu gonflés.

Acide chlor hydrique. — L'acide chlorhydrique faible a à peu près les mêmes propriétés que l'acide acétique. On l'emploie en particulier à 1 ou 2 pour iOOO environ, pour la recherche des terminaisons nerveuses dans les muscles. Plus concentré il sert à détruire la plupart des éléments anatomiques en ne respectant que quelques rares substances dans l'économie : les fibres élastiques, la cristalloïde , la cuticule des dents. L'acide chlorhydrique très-étendu est un excellent dissociant, surtout pour les tissus des animaux inférieurs.

Acide azotique. - L'acide azotique, comme les précédents, gonfle et rend transparent le tissu lamineux, mais il a une action spéciale sur la substance musculaire ; il la durcit et finit par l'isoler, Il la colore en même tem])S en jaune, suiiout quand il n'est pas pur; On a conseillé à cause de cela de laisser plonger des fragments de bouchon dan? l'acide azotique dont on se sert pour ces sortes de recherches;