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et une quantité correspondante de sel ferrique est réduite à l’état de sel ferreux.

Cu20 + (S01)3Fe? + SO#H? — 2$01Cu + H?0 + 2S01Fe.

On dose alors le sel ferreux à l’aide d’une solution de permanganate de potassium préalablement titrée et on calcule le poids de cuivre réduit correspondant.

Pour obtenir, avec cette méthode, des résultats comparables, il est nécessaire d'opérer toujours dans les mêmes conditions. En particulier, la réduction de la liqueur cupro-potassique doit être faite en portant à lébullition pendant le même temps des solutions de même volume.

Tout récemment, M. G.BERTRAND (1)a précisé les détails techniques de cette méthode et publié des tables indiquant, de milligramme en milligramme, les quantités des principaux sucres réducteurs correspondant aux poids de cuivre trouvés.

J'ai d’abord appliqué cette méthode au dosage de quantités connues de glucose pur; j'ai pu m'assurer ainsi qu’elle était susceptible de donner des résultats d’une grande précision.

J'ai alors opéré avec la verbénaline et j'ai obtenu les résultats suivants :

L. 08",0270 de verbénaline réduisent comme 08r,0236 de glucose IL. O8r,0409 ee ee: a Or, 0357 æ LIL. 08r,0580 de FE: 06 0508 CRIE

Si on rapporte ces résultats à ! gr. de verbénaline, on voit que :

I. 18° de verbénaline réduit comme...,... 08r,8740 de glucose Il. — — — — sr,8750 — [I — — — — Osr,8758 —

soit, en prenant la moyenne de ces résultats :

Agr rarhénoal; 2 = 4 = 1#" de verbénaline réduit sensiblement comme 08",8749 de glucose

Le pouvoir réducteur que présente la verbénaline m'a fait supposer que ce glucoside pouvait posséder une fonc-

; (1) G. BERTRAND, Le dosage des sucres réducteurs (Bull. Soc. Chimique (3) XXXV, XXXVI, pp. 1287-1299, 1906)

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üuon aldéhydique libre, d'autant plus qu'elle réduit également, à froid, l’azotate d'argent ammoniacal. Pour vérifier cette hypothèse, j'ai essayé de la combiner à la phényl-

hydrazine, au bisulfite de soude, à l’hydroxylamine et à la semicarbazide.

Action de la phénylhydrazine. — L’addition à une soluüon aqueuse saturée de verbénaline d’une solution au cinquième d’acétate de phénylhydrazine détermine à la température ordinaire la formation d’une combinaison insoluble, de couleur rouge, qui se montre, au micros-

cope, sous la forme de sphéro-cristaux de très petites dimensions.

Action du bisulfite de soude. — 10% de solution aqueuse saturée de bisulfite de soude ajoutés à 5% de solution aqueuse saturée de verbénaline n’ont donné lieu à aucune cristallisation.

Action de l’hydroxylamine. — On a dissous 2 gr.,5 de verbénaline dans 12°% d’eau distillée et ajouté à cette solution 2 gr. de chlorhydrate d’hydroxylamine, puis 1 gr., 2 de soude caustique. Après dissolution, on a abandonné le mélange qui, au bout de 24 heures, a laissé déposer un composé à l’état cristallisé. On a recueilli les cristaux, on les a lavés avec un peu d’eau distillée et on a tenté d’en déterminer le point de fusion, mais on a constaté qu'ils noircissaient et se décomposaient vers 155° avant de fondre. Ce corps étant insoluble dans l’eau il a été impossible de s'assurer s’il était, comme la verbénaline, hydrolysable par l’émulsine.

Action de la semicarbazide. — À une solution aqueuse saturée de verbénaline on a ajouté deux fois son volume d’une solution au cinquième d’acétate de semicarbazide. On n’a constaté aucune cristallisation.

Enfin, à une solution de fuchsine décolorée par le bisulfite de soude on a ajouté de la verbénaline, la solution ne s’est pas recolorée.

Action de l'acide sulfurique étendu.— La verbénaline est

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hydrolysable à chaud par l’acide sulfurique étendu. On a fait une première expérience avec l’acide à 2 pour 100 sur une solution dont la déviation polarimétrique était, avant hydrolyse, égale à — 3° 36’ (p —0 gr., 9985, v — 100 5, / — 2). On a chauffé le mélange en vase clos au bain-marie bouillant. L'examen polarimétrique du liquide effectuétoutes les heures a montré que la déviation subissait un mouvement versla droite, et, après 14 heures de chauffage, cette déviation était devenue égale à + 11”, maximum qui n’a pas été dépassé par un chauffage plus prolongé. L'action de l’acide était done terminée dans les conditions de l’expérience. On a saturé l’acide sulfurique par la soude (un excès de soude colore le liquide en brun rouge) et déterminé le pouvoir réducteur de la solution par la méthode exposée plus haut. On a alors calculé, en tenant compte des dilutions, quele produitprovenantde l'hydrolyse de 1 gr.de verbénaline réduisait comme 0 gr.,9022 de glucose. Aveclacide à 5 pour 100, l’action de l'acide est terminée en 6 heures de chauffage dans les mêmes conditions. La déviation polarimétrique duliquide (p — 0 gr., 500, » — 503, 7 — 2) est passée de — 3°36" à +22’. La détermination du pouvoir réducteur du liquide, préalablement neutralisé par la soude, a permis de calculer que le produit provenant de l’hydrolyse de 1 gramme de verbénaline réduisait comme 0 gr., 925 de glucose.

L'acide à 5 pour 100 détermine donc une hydrolyse plus rapide et plus complète que l’acide à 2 pour 100; on observe dans les deux cas, un retour à droite de la déviation polarimétrique accompagné d’une légère augmentation du pouvoir réducteur.

Action de l’émulsine. — Avec une solution aqueuse de verbénaline à 2 gr., 0445 pour 50°%3, on a préparé les deux solutions suivantes :

J. . Solution. de verbénalines. 00m 20cm8 Fau distillée CESR RE RTE 20cm3 I NSolution desverbenaline ee 20cm3 Solution d'émulsine à 0,5 p. 100....... 20cm$

on

La rotation (!—2) de ces deux solutions était, au moment de leur préparation, de 4=— 7° 24, Elles furent placées à l’étuve à 32-33 et l’on ne tarda pas à constater dans lasolution Il une diminution de la rotation, ce qui indiquait que la verbénaline était hydrolysée par l’émulsine. Après quatre jours, l’action du ferment paraissant terminée, on a fait l'examen polarimétrique des deux solutions et on a trouvé pour is 2"

SOUTON MIRE tr A u —= — 7024 Solution II æ—+ 30°

La détermination du pouvoir réducteur a démontré qu'il était le même pour les deux solutions.

Par ses propriétés, la verbénaline se rapprochait donc des glucosides hydrolysables par l’émulsine; comme eux, en effet, elle était lévogyre et donnait, sous l’action de l’enzyme, un composé dextrogyre, mais elle en différait par un point. En effet, la plupart de ces glucosides actuellement connus ne réduisent pas la liqueur cupro-potassique, quelques-uns seulement sont doués d’un faible pouvoir réducteur. De plus, l’hydrolyse par l’émulsine détermine chez tous ces glucosides une formation de sucre réducteur corrélative du changement optique observé au polarimètre. Or, nous venons de voir que pour la verbénaline le pouvoir réducteur était resté le même après hydrolyse. Pour conclure à la formation d’un sucre, il fallait donc l’isoler, ce que j'ai fait de la façon suivante :

On a dissous 10 gr. de verbénaline dans 500% d’eau distillée et additionné cette solution de 1 gr. d’émulsine; on a placé la solution à l’étuve à 32-33°; au bout de quatre jours, l’action de l’émulsine était terminée et la déviation polarimétrique initiale : «——7°12" était devenue : «—+ 30" (1=—2). On a filtré le liquide et on l’a agité deux fois avec 250" d’'éther ordinaire dans une ampoule à décantation. L'éther a enlevé un produit de dédoublement dont il sera question plus loin.

La solution aqueuse séparée a été distillée à sec, sous pression réduite, et le résidu a été épuisé à l'ébullition à deux reprises :

eMenaole en ste ieren es) elles

EAN /1 "et

1° Par 32m d'alcool absolu +103 d’eau distillée. 2° Par 31cm$ — + 10m En

On a filtré les liquides bouillants dans des flacons séparés et amorcé avec du glucose-d. On a bientôt constaté une cristallisation dans les deux flacons. On a recueilli, essoré et séché le produit cristallisé et on lui a fait subir une recristallisation dans un mélange de 32 parties d’alcool absolu et d’une partie d’eau distillée.

Les cristaux obtenus, essorés et séchés, fondaient à 144,5 (corr.) (point de fusion du glucose-d : 146°).

Le pouvoir rotatoire a été déterminé en solution aqueuse (p=0 gr., 3052, v— 15%, /—2). On a observé que le corps était doué de la multirotation. La solution examinée immédiatementaprès filtration avait une déviationaæ— +48" correspondant à un pouvoir rotatoire : an 101°,56; ce pouvoir rotatoire a baissé progressivement et, après 16 heures, la solution avait une déviation «—=+2°6" correspondant à un pouvoir rotatoire : «b—+-51°,6 (pouvoir rotatoire du glucose-d : #n—+520,5).

L’hydrolyse de la verbénaline fournissait donc du glucose-d et la règle formulée à propos du dédoublement des glucosides hydrolysables par l’'émulsine se trouvait vérifiée une fois de plus : « Tous ceux de ces glucosides actuellement connus sont lévogyres et dérivent du glucose-d. » (1)

Pour obtenir le second produit de dédoublement, on agite la solution éthérée (voir plus haut) avec du sulfate de soude anhydre, on filtre et on évapore; on obtient ainsi un produit amorphe, jaune clair, très peu soluble dans l’eau froide, soluble dans Palcool absolu et dans l’éther. Je n'ai pas encore réussi à obtenir ce produit à l’état cristallisé.

En solution aqueuse, il donne avec le perchlorure de fer dilué une coloration violet foncé qui disparaît par agitation avec l’éther. La solution éthérée évaporée, reprise par l’eau et additionnée de perchlorure de fer

(1) Em. Bourqueror, Sur l'emploi des enzymes comme réactifs dans les recherches de laboratoire (Journ. de Pharm. et de Chim. (6), XXV, p- 383, 1907).