CHAPITRE II

Variations de. la teneur du Grassbacillus II° en Azote au cours de son développement Recherches personnelles

Si la constitution du bacille tuberculeux est loin d’être définitivement établie comme dit Lobstein, la constitution chimique du Grassbacillus IT est presque inconnue. Je me suis proposé d’étudier les variations intéressantes que les composants du bacille peuvent subir dans certaines conditions biologiques: au cours du développement microbien et surtout en faisant varier la constitution du milieu nutritif.

J’indiquerai chaque fois les techniques des dosages que j'ai employés et les remarques faites au cours de ces dosages.

Mes recherches furent faites sur des bacilles vivantes.

Variations des proportions d’eau et d'azote dans le bacille Grass I° au cours de son développement.

Technique des dosages

Eau: Pour la détermination du poids sec comme pour la détermination de l'humidité, j’ai employé la méthode suivante:

Le contenu des ballons de culture est versé dans un becher où les bacilles sont homogénéisés et lavés avec de l’eau distillée. Après trois ou quatre lavages, les bacilles sont transportés sur un filtre formé de deux papiers filtre sans cendres et en particulier sans phosphore, ni azote.

en ip

Pour accélérer le filtrage, je me suis servi de trompe. Après lavage complet, les deux papiers filtre sont enlevés et placés entre des papiers de filtre ordinaire jusqu’à ce que les premiers restent secs.

Les bacilles contenus dans le papier filtre sont pesés et puis mis à l’étuve pendant une heure, à une température de 105° et de nouvau pesés. Les dosages ont été opérés chaque fois, sur le contenu de deux ballons. Le calcul donne le pourcentage de l’humidité. C’est la méthode de Lobstein mais j’ai remplacé le coton serré par des papiers filtre, pour avoir la totalité de bacilles.

Azote total

Le dosage de l’azote total a été fait par la méthode de Kjeldahl et avec l’appareil de Parnas et Wagner.

Les composés azotés du bacille furent détruits par l’acide sulfurique concentré en présence de S Of Cu. (trace) comme réducteur. jusqu’à décoloration complète.

Dans ces conditions la totalité de l’azote est transformée en ammoniaque.

Le poids de la prise d’essai a varié de 0,2 gr. jusqu’à 0,85 gr. Le titrage de l’ammoniaque a été effectué avec une solution d’acide sulfurique décinormal et de potasse décinormale en présence de méthylorange. Les bacilles se sont développés sur le milieu chimique indiqué dans le premier chapitre. Le liquide nutritif était réparti dans des ballons de 500 cm* à raison de 50 cm? par ballon et ensemencé avec une partie égale d’une culture sur le même milieu âgée de 10 jours. Acidité du milieu—15 cem* n/1 PH—6.6.

Les premiers dosages ont été faits 10 jours après l’encemencement, ils ont été continués de 5 à 5 jours jusqu’à 51 jours.

Le tableau n° 3 indique les résultats obtenus.

Ils ont été établis en prenant la moyenne de dosages effectués sur le contenu de quatre ballons, et chaque dosage a été l’objet de deux déterminations. |

Tableau N° 3.

Récolte moyenne

Teneur en eau | Teneur en azote de pt de be Po HR pour 100 gr. del pour 100 gr. en jours te bacilles secs bacilles frais | de bacilles secs gr. gr. gr.

10 Asparagine 0,200 73,61 8,980 15 10 °/60 0,240 75,15 8,500 20 Ph. I 6,6 0,4350 80,06 8,314 25 » 0,3550 81,02 8,191 30 » 0,3235 81,87 8,255 35 » 0,2580 82,05 7,860 40 » 0,2590 82,51 7,104 44 » 0,2442 83,30 7,200 51 » 0,2530 85,46 7,214

La culture s’est développée jusqu’au 22° jour, puis après 25 jours le voile microbien s’est immergé partiellement. Entre 30 et 35 jours, il s’est formé une couche mince qui s’immerge aussi vers le 45° jour. Entre le 48° et le 51° jour, est apparu une troisième couche mince mais discontinue. Quand la culture s’immerge. il y a autolyse accompagnée d’une diminution du poids de la culture. Ces mêmes constatations ont été faites sur le Stérigmatlocystis nigra et sur le Bacille Tuberculeux.

L’examen du tableau permet de conclure: d’une part, il y a avec l’âge, au cours du développement, augmentation de la teneur en eau, d’autre part diminution de la teneur en azote. La teneur en eau passe par un maximum, la teneur en azote passe par un minimum. La décroissance de la proportion centesimale d’azote avec le développement fut observée par G. André dans les plantes vertes notamment sur le blé (plante totale). En Mai, il trouve 4,6 gr. d’azote p.% de matière sèche, tandis que, en Juillet, il trouve seulement 1,4 gr. Terroine Wurmser et Montané ont constaté aussi une décroissance au cours du développement du S{erimotocystis