I II

; mgr. mer.

Correspondant en 0/0 à . . . 0,276 0,256 Trouvé azote du précipité phospho- ù LUNPSUOIC SAN EEE LT T 0,041? 0,0598 Soit en azote diaminé 0/04 . . 3,86 3,94 Trouvé azote du liquide restant . 0,1162 0,1691 Soit en azote monoaminé 0/0. ir 10,92 11,05

En calculant ces résultats en 0/0 de l'azote total, je les mettrai en regard de ceux qui ont été trouvés par OsBonne (/oc. cit.) pour une albumine végétale, la léguméline des pois :

Cérévisine Cérévisine

0/0 de substance 0/0 de substance

(=) «© (er

azote ammoniacal. . .. .| 5,89] 0,95 | 5 1,04] 6,40

humique 1,69] 0,256! 1,56] 0,38] 1,80

diaminé ou basique. 3,86 23,69] 3,91 Ë 3,45| 23,90

monoaminé. . 67,0311,03 | 67,42] 11,33] 67,90

total déterminé. . .16,046| 98,30/16,166! 98,50] 16,20/100,00 ‘au lieu de 16,29 | 400,00/16,39 [100,00

La concordance est très remarquable, bien qu’il s'agisse de deux substances d'origine aussi différente ; elles appartiennent toutes deux au groupe encore très restreint des albumines végétales typiques, solubles dans l'eau et coagulables par la chaleur.

Nature de l’azote basique

Les deux substances étudiées contiennent une quantité assez élevée d'azote sous forme d'azote basique et il m'a paru inté-

ressant d'en étudier la nature de plus près. Nous possédons, en effet, dans la méthode décrite en 1900 par Kossez et Kurscaer (1) et devenue classique un procédé qui dépasse de beaucoup, au point de vue de la précision des résultats, la méthode de E. Fiscuer pour la séparation et le dosage des acides monoaminés (2). En d'autres termes, il apparait comme plus facile de caractériser les deux nouveaux protéiques par la détermination des quantités d’arginine, d'histidine et de lysine qu'ils fournissent à l'hydrolyse que par celle des acides aminés obtenue au moyen de la distillation fractionnée de leurs éthers.

La recherche à été faite en suivant exactement les données du mémoire de Kossez et Kurscuer : hydrolyse sulfürique, précipitation par la baryte, enlèvement de l’histidine et de l'arginine à l’état de combinaisons argentiques et de la lysine sous forme de phosphotungstate que l’on transforme ultérieurement en picrate. Pour la séparation de l’histidine et de l’arginine, j'ai utilisé la modification de Kossez et Priéce (3) qui repose sur l'emploi du carbonate de baryum.

1° Hydrolyse de la zymocaséine. — 1” ttes a porté sur 60 gr. le produit séché dans le vide à 37°, qui correspondaient à 54 gr. de substance séchée à 110° jusqu'à poids constant, L'hydrolyse a été obtenue par chauffage de 8 heures avec un mélange de 180 gr. d'acide sulfurique à 66° B. et 360 gr. d’eau. |

Le liquide amené au volume de 600 ce. ne réduit pas la liqueur de Fenuine. Un dosage d'azote indique une teneur de 8 gr. 232 soit seulement 15,24 0/0. Après saturation presque complète de l'acide au moyen d’hydrate de baryum pulvérisé, on essore et on épuise le sulfate de baryum par l’eau bouillante. La totalité du liquide est évaporée à 500 cc. ; un dosage d’azote

(1) koi et Kursoner, Zeits. physiol. Chemie, t. 31, p. 463 (1900).

(2) E. Fischer, Zeits. physiol. Chemie, t. 33, p. 151 (19014). V. aussi Untersuchungen ueber Aminosäuren, Polypeptide und Proteine, Berlin

(3) Kossez et PRiNGLE, Zeits. physiol. Chemie, 1. 49, p-318 (1906).

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ne donne que 7 gr. 469, soit une perte de 0 gr. 763, correspondant à 9,26 0/0 d'azote humique entrainé par le précipité barytique.

Le dosage de l’ammoniaque, par distillation sur un léger excès de magnésie, donne 3,97 0/0 de l'azote total sous forme d'azote ammomacal, soit 0,605 0/0 du protéique. Le liquide débarrassé d’ammoniaque par la magnésie, de magnésie par la baryte et de la baryte en excès par l'acide sulfurique est additionné à chaud de sulfate d'argent jusqu’à léger excès ; on refroidit, on précipite par la baryte, on filtre et on essore le précipité d’argi-

‘nine et d’histidine argentiques. Ce précipité décomposé donne les bases en solution ; on amène le volume à 500 ce. et on dose l'azote. On trouve 2 gr. 1224, soit 25,78 0/0 de l'azote total.

L’histidine est séparée au moyen du carbonate de baryum ; le précipité est décomposé et l'azote dosé dans la solution. Trouvé : 0 gr. 3858 d'azote, soit 4,68 0/0 de l'azote total, correspondant à 1 gr. 424 d'histidine ou 2,63 0/0 de zymocaséine. J'ai pu extraire à l’état de dichlorhydrate 0 gr. 998 d’histidine, ce qui correspond seulement à 1,85 0/0.

L'arginine argentique étant précipitée par un excès de baryte est décomposée ultérieurement ; la solution contient 0 gr. 623 d'azote, soit 7,56 0/0 de l'azote total, correspondant à 1 gr. 936 d'arginine ou à 3,58 d’arginine 0/0 de zymocaséine. La quantité d'arginine isolée en fait sous forme de nitrate était seulement de 1 gr. 35, soit 2,50 0/6 seulement. |

Le liquide dont on à précipité l’histidine et l'arginine est débarrassé d'argent; un dosage d’azote y indique 4 gr. 648 d'azote, soit 56,46 0/0 de l’azote total. On précipite par l'acide phosphotungstique ; le précipité lavé est décomposé par la baryte et l'azote dosé. On trouve 1 gr. 0396 d'azote, soit 12,63 0/0 de l’azote total.

Le liquide restant, contenant les acides monoaminés, doit donc renfermer 56,46 — 12,63— 43,83 0/0 de l'azote total. Si le précipité phosphotungstique ne contenaît que la lysine, celle-ci représenterait environ 10 0/0 de la zymocaséine. La trans-

formation en picrate étant effectuée, on obtient seulement 5 gr. 672 de picrate cristallisé, correspondant à 2 gr. 208 de lysine ou 4,09 0/0 de zymocaséine. Celle-ci ne représente donc que 5,14 0/0 de l'azote total (1).

On voit qu'indépendamment de l'azote resté dans les précipités, 1l reste dans les liquides dont on a extrait l’histidine et l’arginine d'une part, la lysine d’autre part, des quantités importantes d'azote sous forme inconnue (2).

Néanmoins, ces résultats vont nous permettre d'établir une comparaison entre la zymocaséine et la caséine du lait, ainsi qu'avec la glutencaséine. On peut, en effet, en s’en tenant à la répartition de l'azote basique entre l'ammoniaque et les trois bases hexoniques de Kossez, obtenir le tableau suivant :

Zymocaséine Caséinogène Glutencaséine de levure du lait (3) de blé (3)

— ee ——

ANHDODIIQUE, 0 STE 0,73 | 2,0° 4,0 HISUdIRE PC RTE 2,63 2,6 1,8 ATOITIN SEAT LE ER NNINE E ee 3,58 4,8 4,7 ETS RS ET en 4,09 5,8 1,9

C’est donc surtout par la quantité d'ammoniaque fournie que les différences apparaissent. De plus, la zymocaséine se rapproche de la caséine du lait par sa teneur en lysine, tandis que la glutencaséine est beaucoup plus pauvre.

2 Hydrolyse de la cérévisine. — Cette hydrolyse a été effectuée en chauffant 58 gr. 6 de produit séché à 110° jusqu’à poids constant avec un mélange de 180 gr. d'acide sulfurique à 66° B. et 360 gr. d'eau, à l'ébullition, pendant 8 heures.

Le liquide refroidi est amené à 500 cc. ; on dose l’azote sur

(4) Tous ces calculs ont été établis en tenant compte des quantités employées aux dosages ; ils sont toujours rapportés à la totalité de la substance soumise à l'hydrolyse. Les chiffres indiqués ne nécessitent par suite aucune correction

(2) Cet azote est probablement sous forme d'acides monoaminés ; on sait déjà que le liquide duquel a été isolée la lysine renferme une partie importante de la phénylalanine libérée par hydrolyse, et précipitée en même temps par l'acide phosphotungstique. È

(3) Aspernauvex, Lehrbuch d. physiol. Chemie, 3° édition, p. 400 (1944).

nr

5 ce. et on obtient 9 gr. 442 d'azote, soit 16,11 0/0 de la cérévisine. Après saturation de l'acide par l'hydrate de baryte, essorage et lavage du précipité, il'ne reste plus que 8 gr. 8536 d'azote, soit une perte de 0 gr. 5884 ou 6,22 0/0 d'azote humique, en 0/0 de l'azote total. Le dosage de l’ammoniaque donne une teneur de 3,43 0/0 de l'azote total, correspondant à 0,55 d'azote ammoniacal 0/0 de protéique. s

Après séparation de l’histidine et de l’arginine à l’état de combinaisons argentiques, on décompose le précipité et on dose l'azote dans la totalité de la solution obtenue : on trouve ainsi 1 gr. 774 d'azote, soit 18,78 0/0 de l'azote total pour le précipité renfermant les deux bases. L'histidine argentique étant de nouveau séparée au moyen du carbonate de baryum, on la met en solution et on dose l’azote : on trouve 0 gr. 32 d'azote, soit 3,39 0/0 de l'azote total. Ce chiffre correspond à 1 gr. 184 d'histidine, soit 2,02 0/0 de protéine. La quantité d'histidime obtenue n'a été que de 0 gr. 87.

La combinaison argentique de l’arginine est précipitée, lavée et décomposée. On dose l'azote dans la solution et on obtient, pour la totalité, 0 gr. 7474 d’azote, soit 7,91 0/0 de l’azote total, correspondant à 2 gr. 318 d’arginine, ou 3,95 0/0 de protéine. La quantité d’arginine, obtenue à l’état de nitrate cristallisé, était de 1 gr. 95.

Le liquide dont on a séparé l'histidine et l’arginine étant debarrassé d’argent et soumis au dosage de l'azote, on trouve en tout 6 gr. 2733, soit 66,44 0/0 de l'azote total. Le précipité phosphotungstique renferme 1 gr. 352 d'azote, soit 14,32 0/0 de l'azote total. IL y a done pour les acides monoaminés 66,44 — 14,32 — 52,12 0/0 de l’azote total. :

Ce précipité étant décomposé, on précipite la lysine à l'état : de picrate. Ce sel recueilli et séché pèse 10 gr. 752, qui correspondent à 4 gr. 186 de lysine, soit 7,14 0/0 de protéine. L'azote correspondant est 0 gr. 8028 ou 8,50 0/0 de l’azote total.

On peut déduire de ces divers dosages que les quantités d'histidine et d’arginine obtenues après purification des combinaisons argentiques de ces deux bases sont notablement plus

faibles que celles qui paraissaient devoir être présentes d’après le dosage de l’azote dans l’ensemble du précipité argentique.

J'ai essayé, dans une deuxième hydrolyse, d'améliorer les rendements et je suis arrivé aux chiffres suivants :

L'hydrolyse a porté sur 30 gr. de cérévisine, qui ont été chauffés pendent 14 heures avec 90 gr. d'acide sulfurique et 180 gr. d’eau. J’ai obtenu, en azote ammoniacal, 2,634 0/0 de l'azote total ou 0,424 0/0 de substance. Par suite d'un accident, la fraction histidine a été perdue après sa séparation. Pour l’arginine, la combinaison argentique est décomposée, la liqueur débarrassée d’acide sulfurique par la baryte et de l'excès de baryte par un courant de gaz carbonique. On concentre, on filtre et le liquide évaporé à 10 ec environ est additionné d'un léger excès d’acide picrolonique (1) dissous dans l'alcool chaud. Après quelques instants, le liquide se trouble et il se dépose un abondant précipité cristallin jaune clair. On recueille après 20 heures, on lave, on sèche et on pèse. On obtient ainsi 3 gr. 45 de picrolonate d’arginine, correspondant à 1 gr. 37 d’arginine, soit 4,42 0/0 de protéine. Quant à la lysine, on a obtenu 6 gr. 25 de picrate de cette base, correspondant à 2 gr. 43 de lysine, soit 8,10 0/0 de protéine (2).

On peut maintenant comparer les résultats obtenus pour la cérévisine à ceux qui ont été publiés pour d’autres albumines

(D) L’acide ‘picrolonique, décrit par BEerTrAM (Dissertation, Iéna 1892), est le {-paranitrophényl-3-méthyl-4 nitropyrazolone-5, C12HS805N4. C'est une antipyrine dinitrée en paraphényl et en (4), et déméthylée en (2) :