S 3. PRÉSURE

Cinq tubes à essai, contenant 2% de lait bien débarrassé de sa matière grasse par écrémage mécanique, sont stérilisés à 110. Dans le 4er À on ajoute 1/4 de © de liquide diastasifère

— X%B —— 4/2 ce — = 3e C — 4 cc es, — 4e D == 9 ce —— — GE — 4 « du même liquide bouilli

De cette façon, l’action présurante de la solution diastasique s’exerce successivement sur 8 fois, 4 fois, 2 fois son volume de lait; puis sur un volume égal.

Voici les résultats obtenus avec les filtrats de culture de chaque espèce :

Aspergillus fumigatus. — Avec le filtrat de culture de ce champi-

gnon, les tubes ainsi préparés et laissés à l’étuve à 870 durant 8 heures, ont présenté ce qui suit :

En A, Coagulum très net, mais peu consistant.

— B, Coagulum plus ferme.

— C, Coagulum très net, mais subissant déjà une dissolution.

— D, Absence de coagulation; le lait présente seulement un léger

épaississement.

— E, Absence totale de coagulation et d’épaississement.

Chaque tube a recu une dose proportionnellement croissante de présure et de caséase. Si, malgré cela, les modifications éprouvées par le lait dans les divers tubes ne sont pas analogues, cela tient :

4° À la dilution qui exerce une influence retardatrice bien connue sur la présure et sur les diastases coagulantes en général.

2: A la quantité croissante de caséase dont le fonctionnement antagoniste masque l’action de la présure, en partie ou complètement.

Dans les tubes À et B, au 8e jour, l’action diastasique aboutit définitivement à une coagulation ; à ce moment, la caséase n’a pas encore changé le sens de la réaction ; mais dans les tubes Get D, son action

contrariante se fait sentir plus rapidement, puisqu'elle s'y trouve er quantité plus considérable. La caséase entraine le système vers un état plus stable, celui de la caséine en solution.

Rhizopus equinus. — La puissance de coagulation du filtrat de culture de cette espèce est assez considérable pour permettre d’obtenir la coagulation d’un certain volume de lait avec des doses beaucoup plus faibles que précédemment. Ici, j'ai fractionné le filtrat à distribuer, en gouttes ; et chaque tube reçoit ainsi une dose de liquide présurant évaluée en fraction de cent. cubes.

Le tube 1 renferme 5 gouttes du filtrat, soit 1/10° de

— 9 — 10 1/5 — RAT — +2 — 3/10 — — 4 — 20 — 2/52 — — 5 — 25 — 4/2 cc — 6 — 50 — À cc — 7 — 9 ce — 9 ce —— 8 — 3 ce — 8 ce — 9 4 ce A Ace

Il m'a été impossible d'observer le moment précis de la coagulation pour des raisons déjà expliquées; car le lait passe insensiblement de l’état liquide à l’état de coagulum mou; il subit un épaississement graduel, sans transition, devient muqueux, puis gélatineux, et se résout de même en un liquide trouble.

Les observations possibles se limitent au suivantes :

Après deux heures d'exposition à 37: les tubes 4, 5, 6 et 7 sont déjà coagulés ; ceux qui les précèdent ou les suivent ne le sont pas encore. Au bout de quatre heures, la coagulation s’accentue dans ces tubes et s'étend à ceux où elle n'existait pas encore. C'est le tube 6 qui présente à ce moment le maximum de coagulation ; il renferme 1° de filtrat de culture.

Au-dessous de cette dose, la quantité de présure ne peut amener qu'une faible coagulation ; au-dessus, la proportion de caséase s'élève: et contrarie l’action présurante, aidée par la grande dilution.

Rhizomucor parasiticus, Trichophyton gypseum, Achorion Shœnleini, Microsporum canis abandonnent également dans le liquide une présure dont l’existence a pu être nettement constatée de la même facon que précédemment.

Tous les filtrats de culture ont ainsi présenté un pouvoir coagulant dont l'intensité ne peut être soumise à aucune mesure absolue,

Le

puisqu'il est constamment associé à un pouvoir décoagulant qui agit dans un sens opposé. On voit en outre, que la présure apparait dans un milieu de culture en labsence de la substance caséine sur laquelle elle exerce spécialement son action.

$ 4. CASÉASE.

Les expériences qui précèdent sont déjà suffisantes pour affirmer que les liquides de culture renferment, outre la présure, une diastase décoagulant le lait que la présure a coagulé : c’est la caséase.

Mais, l’action de la caséase peut être rendue plus nette encore si, à divers moments de son action sur le lait, on dose dans ce dernier la caséine résiduelle. Un dosage pondéral nous renseigne ainsi sur la quantité de caséine disparue, et par suite, sur l'activité de la caséase. Dans ce but, et enfin d’atténuer les erreurs d'expérience, j'ai opéré sur une plus grande quantité de lait.

Les filtrats de culture sont introduits par 5° dans des matras renfermant déjà 25e de lait, pur, écrémé et stérile. L'un d’eux, comme toujours il sera fait, est préparé en vue de servir de témoin ; il reçoit du filtrat diastasifère bouilli au B. M. Enfin tous les matras sont placés à l’étuve à 370.

On observe tout d’abord, sauf dans le matras témoin, une coagulation générale suivie d’une dissolution du coagulum formé. Le lait diminue d’opacité, prend une couleur grisâtre, et finalement, l’aspect d’un bouillon trouble. Ces modifications nous sont déjà connues:

A des intervalles bien déterminés, j'ai recueilli sur un filtre taré, la caséine précipitée par l'acide trichloroacétique. Une pesée à la balance de précision süffit maintenant pour faire connaitre le poids de caséine restant. Par différence avec le poids de la caséine précipitée de 25% du lait normal de même provenance, on a le poids de caséine disparue (1).

(1) Plusieurs procédés de dosage de la ca-éine ont été indiqués, (Hoppe-Sayler, Millon et Commailles, Patein, Denigés, etc.) et tout récem nent l'on vient d'en proposer un nouveau {l'ricrat et Sat Ton. Ann, de vInstit. Pasteur, décembre 1906), La méthole que j'ai employée est celle du dosage direct par l'emploi d’un acide qui précimite mmtégralemert la caséine sans la solubiliser notablement, L'aciule trichloroacétique présente précisément cet avaitage sur l'acide acétique, surtout quind l'opération est

conduite rapidement,

Voici quels sont les résultats :

Aspergillus fumigatus. — Liquide de culture de un mois et 11 jours. (Poids de la caséine initiale de 25 cc de lait normal, 1 gr. 027.)

Durée de l'action diastasique Caséine restant Caséine disparue 12 heures 0,966 0,057 1 jour | 0,950 | 0,063 2 — 0,915 | 0,108 3 — 0,892 0,131

Avec le liquide de culture glycériné peptonisé, les résultats sont un peu différents, le pouvoir caséinolytique semble diminué. (Poids de caséine initiale, 1 gr. 023).

Durée de l'action diastasique Caséine restant Gaséine disparue 12 heures 0,781 0,246 1 jour 0,740 0,287 2 — 0,671 0,356 cor 0,582 0,445 | LEE Rhizomucor parasiticus. — (Culture de 2 mois) :

Liquide glucosé peptonisé. (Poids de caséine initiale 1,164).

Durée de l'action dlastasique Caséine restant Caséine disparue 1 jour 0,944 0, 220 ele 0, 880 0,284 Re 0,768 0, 396 4 — 0,653 0,511 Lu 0,499 0, 663