ESSAIS D’ISOLEMENT DU PRINCIPE TOXIQUE

On a vu que les toxines proprement dites, sont comme les diastases, entrainées par les précipités de colloïdes que détermine lalcool au sein des liquides qui les renferment. Elles sont entraînées de même par un précipité de phosphate calcique, et ces caractères entrent en ligne de compte dans la définition des toxines vraies. T1 est naturel de chercher à voir si la toxine de l’Aspergillus fumigatus possède cette propriété.

J’ai d’abord essayé la précipitation par l’alcool.

Expér. LI. — Une culture de 31 jours sur liquide peptonisé glucosé, exposée à l'étuve à 30°, est filtrée au papier. Cinquante cent. cubes du liquide de culture sont traités par trois fois leur volume d'alcool absolu. Il se fait alors un précipité blanchätre peu abondant, que l’on recueille sur un filtre. On le dessèche à basse température dans le vide, et il est injecté en solution dans de l’eau, à un cobaye. Ce dernier ne se montre nullement incommodé et reste parfaitement normal.

Expér. LIL. — Cent cent.cub. de liquide d'une cullure d’un mois et 20 jours, sont traités par 300 c c. d'alcool absolu puis filtré à la bougie Garros, de l'extérieur à l’intérieur. Le précipité retenu sur les parois de la bougie est repris par l'eau et inoculé à un cobaye ; l’animal ne présente pas le moindre trouble.

Ce procédé d'obtention du principe toxique a donc totalement échoué ; le précipité recueilli est totalement dépourvu de nocivité. Je me suis alors adressé à une autre méthode qui sert encore à la préparation des diastases et qui consiste à former un précipité de phosphate de calcium au sein du liquide de culture.

Expér. LIII. - J'ai prélevé 60 c.c. de liquide d’une culture de 25 jours; et, à l’aide de solutions titrées de phosphate de soude et de chlorure de calcium, j'ai déterminé dans le liquide la formation d’un précipité abondant de phosphate calcique. Le précipité est séparé par filtration, puis mis à macérer un quart d'heure dans 10 c.c. d’eau distillée; on filtre à nouveau, et Le filtrat est injecté dans les veines d’un lapin. Ce dernier ne présente aucun accident, même léger.

ExPÉR. LIV. — Cent trente cent. cubes du liquide de culture précédent sont soumis au même traitement. Cette fois, le précipité de phosphate de chaux obtenu est trituré avec un peu d’eau, et.inoculé sous la peau d'un cobaye. Aucun accident ne se produit ; on n'observe qu’un très léger tremblemement, à peine perceptible.

ExpéR. LV. — Le liquide dans lequel s’est effectué le précipité caleique de l'expérience précédente, est repris, filtré, et inoculé sous la peau d’un cobave à la dose de 2) c.c. Au bout d'une demi-heure, l'animal présente les symptômes d'une intoxication violente ; les accidents apparaissent avec la. même netteté, avec la même violence, que s'ils étaient produits par le liquide non préalablement soumis à la precipitation, Au bout de trois heures, l'animal sst couché, complétement paralysé. 2! meurt dans la nuit.

Expér. LVI. — Ce mème liquide, encore pleinement toxique malgré une première précipitation, est repris encore une fois, et l’on y détermine un second précipité de phosphate de chaux. Le précipité inoculé au cobaye ne détermine aucun accident, même léger. Au contraire, le liquide clair surnageant, inoculé à un nouveau cobaye à la dose de 20 c.c., détermine chez cet animal des accidents tout aussi violents que la première fois, et en moins d'une demi-heure. Le cobaye succombe dans la nuit, après avoir manifesté les crises tétaniques et paralytiques bien connues.

Ces expériences me semblent des plus concluantes : toute tentative d'isolement partiel, ou de purification de la toxine à l’aide des procédés couramment employés pour les diastases, reste infructueuse. Non seulement les précipités n’ont entrainé aucun produit {oxique ; mais le liquide résiduel garde toute sa toxicité première. Le poison reste en solution ; loin d’être précipité par l’alcool absolu, il y est soluble. C’est là, je pense, une indication fort précieuse pour des recherches ultérieures, Du liquide primitif, pas une parcelle de toxique ne semble avoir été distraite par les opérations de précipitation ; et, si dans l’expérience LIV, on a pu observer un léger symptôme, il est plutôt attribuable à une imbibition par le liquide toxique, du précipité non lavé.

Ces caractères négatifs sont d’un grand poids pour déterminer la nature du poison aspergillien. IL ne pourra certes pas se placer à côté des toxines diphtérique ou tétanique. L'action de la chaleur l'avait déjà fait pressentir ; les procédés d’extraction que je viens d'exposer, et qui ont échoué, achèvent de le démontrer.

Un autre fait vient s'ajouter à cette manière de voir. J'ai observé dans quelques expériences que le poison de l’Aspergillus fumigatus dia!yse notablement. Dans l’eau distillée où baigne le dialyseur, on retrouve le principe toxique du liquide de culture, mais dilué, et par conséquent, apte seulement à reproduire des troubles légers ; en tout cas, ces troubles sont identiques à ceux que produisent l'injection de faibles doses de filtrats de culture. Or, l’on sait que les toxines proprement dites, comme les diastases, ne dialysent que très faiblement.

Faut-il maintenant ranger le poison de l’Aspergillus fumigatus à côté des ptomaïnes alcaloïdiques de A. Gautier ? Tout le fait supposer.