LIQUÉFACTION DE LA GÉLATINE

L'étude de la caséinolyse et de l'albuminolyse, entraînait celle de la gélatinolyse. Ces trois phénomènes diastasiques sont entièroiT^ent liés l'un à l'autre par la raison même que l'on ne sait pas encore bien si l'on doit les distinguer ou les confondre.

Souvent, ils ont été confondus en un seul, désigné sous le nom de protéohjse ; et le système de diastàses capable de transformer les substances albuminoïdes complexes et variées prend dans ce cas, le nom deprotéase. C'est ainsi que Malfitano(i) en 19C0, désigne la diastase ou le complexe diastasique qui s'attaque aux substances protéiques, disant que ces substances ne sont pas encore assez bien définies pour qu'on puisse spécialiser leurs diastàses comme on avait commencé à le faire pour les sucres.

Il étudie, dans ce genre d'idée, l'action delà protéase de VAspergillus niger sur trois principales substances protéiques : la gélatine, l'albumine, la caséine.

(1) Mai.hiano : La pretéohjse chez l'Asperyillus nUjer. Ann. )nstit. Pasteur, t. XIV, p. 60, 19()0. d» : ^nr la protéase dp t'Asp. nigtn\ — Ann. Inslit. Pasteur, t. XIV, p, '»20, 1900.

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Aujourd'hui, à la suite de faits nouveaux, on a commencé à faire des études plus morcelées de cette action diastasique ; on a pris l'habitude de ne plus la considérer comme une, et de la dissocier. Mais encore, faut-il s'appliquer à montrer que cette dissociation de la protéolyse en trois actions diastasiques distinctes n'est pas purement hypothétique, et qu'elle répond à la réalité des faits. C'est ce que j'ai essayé de faire, et c'est pourquoi la gélatinolyse a ici un chapitre spécial, non le moins important.

J'ai pensé qu'en reprenant l'étude de la gélalinase chez les champignons parasites, je serais conduit à des observations qui, ajoutées aux premières, conduiraient à des déductions d'un certain intérêt.

La diastase qui liquifie la gélatine est très répandue dans le monde microbien ; il suffit en effet de laisser exposée à l'air une petite masse de gélatine en gelée pour la voir en peu de temps se peupler de colonies bactériennes et de moisissures qui y font naître des zones de liquéfaction ; c'est même là, un caractère biologique assez précieux pour la détermination de quelques espèces.

On a voulu quelquefois identifier la gélatinase avec la caséase, ou même avec la trypsine, en se basant sur ce fait que l'on trouve fréquemment deux de ces diastases associées ; mais, comme je l'ai dit, l'argun;ent n'est pas suffisant pour tabler sur leur identité ; et il y a un profond intérêt à essayer d'éclaircir ces connaissances peu précises encore.

Un assez grand nombre de champignons inférieurs liquéfient la gélatine. Quelques expériences exposées ci-après m'ont montré que les champignons pathogènes, objets de cette étude, partagent cette propriété, mais avec des variations considérables suivant les espèces. La constatation chez eux, d'un pouvoir gélatinolytique est des plus simples. Les champignons sont ensemencés sur gélatine ; ils ont ainsi, comme dans les cas précédents, la substance à transformer soumise directement à leur acîivité.

Une solution de gélatine à 12 p. 100, clarifiée puis amenée à neutralité est répartie au fond de petits matras, de faron à y former une couche solide de 1 cm. d'épaisseur environ. Le tout est stérilisé à IIO»; puis, chaque matras est ensemencé avec les six espèces de champignons nommés plus haut. Les cultures sont mises à l'étuve à 23^ ; A cette température, un matras témoin non ensemencé, reste indéfiniment solide ; la température ne peut donc, en aucune façon être rendue responsable des liquéfactions qui surviendront dans les matras ensemencés.

Il est assez remarqrable de voir que, dès le lendemain de Vensemencementy il existe dans les matras à Trichophyton^ Achorion et Xlicrosporum, une zone de gélatine liquéfiée autour du point d'ensemencement.

Au bout du cinquième jour, Trichophyton et Achorion forment une masse centrale de 8™/'" environ de diamètre. Autour de ce mycélium, la zone de liquéfaction atteint déjà un diamètre de 2 centimètres. MU croporum canis révèle une puissance gélatinolytique bien supérieure encore. Au cinquième jour, la culture forme, au centre du substratum. nutritif, une petite éminence de 2 à 3 "»/"» seulement de diamètre ; elle est déjà entourée d'une zone concentrique de gélatine liquéliée de deux centimètres de diamètre. Très rapidement, comme on s'en doute, la liquéfaction est totale ; et la végétation se poursuit avec les caractères habituels de chaque espèce.

UAspergillus fumigatus se comporte un peu différemment des espèces précédentes. Le mycélium gazonnant envahit assez promptement toute la surface de la gélatine; il y forme une couche un peu irrégulière en épaisseur. La gélatine sous-jacente se ramollit graduellement, et uniformément puisque le mycélium est en contact avec elle par tous ses points. Au cinquième jour, la sécrétion de gélatinase n*est cependant pas encore assez abondante pour que la liquéfaction du disque gélatineux soit parfaite. Ce n'est qu'au dixième jour que j'ai pu l'observer nettement.

Rhizopus equinus développe lentement ses hyphes lâches, cotonneuses et blanchâtres ; il forme au 5^ jour une surface gazonnante de deux centimètres d'épaisseur environ, recouvrant entièrement la gélatine sous-jacente sans que celle-ci présente le moindre indice de ramollissement ; la liquéfaction n'est apparue que vers le 18*^ jour. Avec le Jihizomucor parasiticus^ la liquéfaction de la gélatine est aussi lente à se produire. Le pouvoir gélatinolytique de ces deux dernières espèces est donc excessivement faible, surtout si on le compare à celui du Microsporum canis.

D'après leur aptitude à liquéfier la gélatine, on peut faire deux parts des six champignons étudiés ici. L'une comprend des espèces qui liquéfient très rapidement la gélatine ; elles ont un mycélium compact, blanchâtre. {Trichophyton^ Achorion, Micro^o^mm). L'autre comprend des espèces qui liquéfient lentement, et assez difficilement la gélatine ; ce sont des espèces à mycélium lâche, gazonnant et de couleur sombre (Af^pergillus, Ilhizomucor, RhizopnsJ,

Dans ce chapitre se trouvent réunies, à la suite d'une première série

(Inexpériences, quelques observations dont le seul objet est de montrer comment se comporte un groupe de champignons, vis-à-vis de quelques substances albuminoïdes oiïertes à leur nutrition. Mais parmi elles, il est un point qui attire plus particulièrement l'attention. C'est que, deux espèces, /Hhizopiis eqiiinns, Rhizomucor parasilicusj qui dissolvaient et dégradaient avec facilité la caséine, se sont montrées à peu près dépourvues d'action sur l'albumine et la gélatine. Or, cette absence de pouvoir albuminolytique et cette faculté de ne dévoiler qu'une très faible activité gélatinolytique en présence des substances les plus aptes à favoriser la sécrétion des diastases correspondantes, tendent à prouver déjà, que la caséase produite par les deux Mucorinées existe chez elles, indépendamment de la trypsine et de la gélatinase, et que, par suite, elle est susceptible d'avoir une individualité propre.

Mais, ces résultats ne permettent pas de refuser d'une façon définitive des pouvoirs albuminolytique et gélatinolytique aux deux espèces en question, ou même de ne le^ leur accorder que dans de faibles proportions. Il se peut que dans d'autres conditions de milieu, les trois diastases apparaissent simultanément et avec des activités sensiblement équivalentes. L'absence d'une diastase ici, n'a rien d'absolu ; nous ne décelons que les diastases qui ont diffusé dans le milieu ambiant, à la faveur d'un aliment donné. Cet aliment peut favoriser l'élaboration de telle diastase au détriment de telle autre ; et l'on ne saurait en déduire l'impossibilité pour le végétal, de sécréter cette autre, lorsque les conditions de nutrition seront changées.

Les cultures sur lait ne nous ont donné que des renseignements relatifs à la caséase ; de même, l'albumine ne nous a renseigné que sur la trypsine ; la gélatine, sur la gélatinase. Les trois diastases protéolytiques pourraient être sécrétées simultanément, soit sur lait, soit sur albumine, soit sur gélatine sans qu'on puisse en être averti par la simple constatation d'une digestion, puisque chacune des substances protéiques ne nous renseigne que sur la présence d'une seule diastase ; celle dont elle constitue en somme le réactif spécifique.

De là, la nécessité d opérer avec un milieu de composition uniforme, si l'on a en vue de rechercher la simultanéité possible d'existence des trois diastases : caséase, trypsine et gé atinase.

Or, on ne peut songer à cultiver les champignons sur un milieu nutritif constitué à la fois par de la caséine, de l'albumine et de la gélatine, pour déceler une triple action digestivci L'expérience serait délicate à réaliser et se prêterait mal à Tétude des produits de transfor'

mation qui reviennent à chacune des diastases. Mais, il est possible d'adopter un liquide nutritif de composition identique pour chaque champignon, et qui leur assure en même temps un développement facile. Au terme de la végétation, ce liquide renfermera toutes les diastases que les champignons y auront sécrétées, et il sera essayé alors, à un triple point de vue diastasiqùe, sur de la caséine sur de l'albumine, et sur de la gélatine.

Qu'un tel liquide ne soit pas capable de solubiliser à la fois, la caséine, Talbumine et la gélatine, ou même, qu'il présente dans la réalisation respective de ces trois opérations, une disproportion marquée^ évidente ; il y aura lieu de le noter avec soin, car ces faits constitueront un argument solide en faveur de la non identification des diastases en question.