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Nous nous sommes proposé de préparer le ferment soluble suivant le procédé de Bussy (1).

Dans ce but, un macéré de moutarde blanche est filtré, puis évaporé à consistance sirupeuse, à une température ne dépassant pas 40°; la liqueur est alors additionnée d’alcoo!l; le précipité formé est lavé, séché, puis redissous dans l’eau, la solution filtrée est évaporée.

Le produit ainsi obtenu est peu actif et s’altère avec le temps; de plus, il est peu soluble dans l’eau, aussi est-il préférable d’utiliser un procédé de préparation calqué sur celui indiqué par Hérissey (2), pour l’obtention de l’émulsine. :

Dans cette méthode, au macéré aqueux chloroformé de moutarde blanche, on ajoute trois fois son volume d’alcool à 95°: le précipité formé est recueilli par filtration, traité par un mélange à volumes égaux d’alcool et d’éther, puis desséché dans le vide sulfurique.

Enfin, Renvessane (3) préfère extraire le ferment soluble d’un macéré aqueux de Sinapis arvensis, auquel on ajoute de l’alcool à 90°, sans concentration préalable.

Dans nos recherches, nous avons trouvé avantageux d'utiliser un macéré de Sinapis alba (4), obtenu de la façon

suivante :

__ Une macération à 37°, avec un gramme de poudre de moutarde blanche et 10 cc. d’eau, a été effectuée en présence de quelques gouttes de toluène; après 24 heures de contact, le filtrat a été traité par un courant d’air, pour chasser les traces d’allylsénévol (5) et l’hydrogène sulfuré

(1) Journ. de Pharm. (2), t. xxvI, p. #4.

(2) Th. Doct. Univ. (Pharm.). Paris, 1899, p. 44.

(3) Union Pharm., 1913, p. 137.

(4) Nous avons constamment utilisé un même lot de graines de moutarde blanche.

(5) La proportion d’allylsénévol n’était que de 0,015 0/0.

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ayant pris naissance. Nous avons constaté la disparition de ces corps gazeux à l’aide de papiers à l’azotate d’argent ammoniacal et à l’acétate de plomb. De plus, le filtrat

a été neutralisé par la soude À en présence de phtaléine.

Pour les diverses expériences décrites ci-après, 5 ec. de

liquide diastasique étaient en général utilisés.

Possédant ainsi ferment et glucoside, il était possible d'envisager, l'étude de l’équation fermentaire de Bussy; dans ce but, il fallait déterminer les proportions de produits de réaction se formant progressivement, en particulier le glucose et l’allylsénévol.

Examinons d’abord le dosage du glucose. |

Nous nous sommes proposé d’effectuer les détermina tions par la méthode polarimétrique, mais la liqueur se troublant rapidement par formation de soufre, la visibilité devenait nulle. |

Le procédé optique étant impossible à réaliser, nous avons examiné l’application du microdosage de Foxrès et Tarvoucé (1), basé sur le principe suivant:

Le précipité d’oxyde cuivreux provenant de la réduction de la liqueur cupro-potassique par le glucose est floculé par le carbonate de magnésie, puis traité par le réac-

tif phospho-molybdique, qui prend alors une teinte bleue,

due à la formation de sous-oxydes de molvhdène; une solution de permanganate titrée, versée à l’aide d’une microburette, jusqu’à disparition de couleur bleue, fournit la teneur en glucose. Ce procédé, quoique très sensible, ne nous à pas donné satisfaction, l’aleali de la liqueur cupro décomposant le myronate restant, en fournissant plusieurs composés, entre autres du glucose.

De plus, toute défécation, capable d’élminer le glucoside à l’aide de sels de métaux lourds, tels que: acétate de

(4) Bull. Soc. Chim. Biol., 1921, t. 1x, p. 226.

sb roma

plomb, azotate d’argent, azotate de mereure.… le décomposent en libérant constamment du glucose.

Le dosage du sucre réducteur, en présence de myronate de potasse, est donc difficile à effectuer ; aussi avonsnous songé à réaliser un microdosage d’allylsénévol, conçu et mis au point après de nombreux essais et basé sur les données suivantes:

1° Entraînement de l’allylsénévol par les vapeurs d’eau et d’alcool (l’alcool favorisant cet entraînement) ;

2° Formation de thiosinamine en présence d’ammoniaque, puis de sulfure d'argent, à l’aide d’une solution argentique titrée;

3° Microdosage de l’excès d'argent.

L'appareil utilisé est semblable à celui que Parnas et WacxEr (1) ont indiqué pour le dosage de l’azote (micro-

kjeldahl) ; il comprend: un générateur de vapeur d’eau,

réuni à un ballon; un ballon à fond rond et à long col de 75 cc., incliné de facon à empêcher les projections et muni d’un entonnoir à robinet; un réfrigérant vertical, relié au ballon précédent, et terminé par un tube à boule pénétrant dans un tube à centrifugeuse.

D'autre part, l’étude de la réaction de Bussy, comportant la détermination de la quantité d’äjlylsénévol en présence de ferment et glucoside, ce microdosage ne peut être réalisé qu'après destruction de la myrosine, qui pourrait continuer son action hydrolysante vis-à-vis du myronate.

Nous avons tout d’abord cherché à annihiler le ferment par différentes substances jouant le rôle de poison: cya nure de potassium, chlorure mercurique, azotate d’argent acide salieylique.., mais l’action diastasique n’est qu’atte nuée et non pas empêchée; seule, la soude, à la dose de 0 gr. 500 pour 100 cc. de liqueur fermentaire, permet

() Cité par NicLoux, Bull. Soc. Chim. (4), t. xxxv, p. 1059.