CHAPITRE IL

PRÉPARATION DE l’hÉMATINE.

( Procédés Cazeneuve)

\ er procédé. — Nous prenons un litre de sang que nous dépouillons préalablement de la plus grande partie de

Cazeneuve. -

sa matière albuminoïde par un ou deux lavages avec une solution de chlorure de sodium au dixième. Denis a montré depuis longtemps qu’une solution de chlorure de sodium au dixième, dans la proportion de dix volumes pour un de sang, n’altère pas les globules et permet de les recueillir par le repos et la décantation. Il fautat tendre vingt-quatre heures que les globules se déposent, et ne pas opérer à une température trop supérieure à 10 degrés, sous peine de voir une partie des globules s’altérer et une certaine quantité de matière colorante entraînée dans les lavages. Les globules, après décantation aussi minutieuse que possible, sont mis dans un ballon et additionnés de deux fois leur volume d’éther à 56 degrés, qui contient toujours, comme on sait, une certaine quantité d’alcool (environ 25 à 30 pour lOU). On agite fortement deux ou trois fois, puis on laisse en repos pendant vingt-quatre heures. La coagulation du sang, lente avec lether à 56 degres, est toujours complète au bout de ce laps de temps. Inutile d’ajouter que cette action coagulante de l’éther à 56 degrés est due à la présence d’une certaine proportion d’alcool. L éther pur et anhydre détruit les hématies sans coaguler la matière albuminoïde.

Le coagulum est recueilli sur un filtre où on laisse s’égoutter sans expression. Porté ensuite dans un mortier, il est traité par un kilogramme d’éther à 56 degrés, tenant en dissolution 20 grammes d’acide oxalique. On ajoute l’éther peu à peu, on agite avec le pilon pour favoriser la réaction de l’éther acide. Au bout d’une minute ce dernier est fortement coloré en rouge brun. On décante sur un filtre, on ajoute le reste de* l’éther dissolvant, on s’aide du pilon, et l’on jette finalement sur

le filtre la totalité delà matière. On lave avec de l’éther a 56 degrés, ce qui s’effectue facilement et rapidement, en ayant soin de renouveler les couches avec une baguette de verre. Le magma sanguin se trouve complètement décoloré dans cette manipulation.

La teinture obtenue renferme l’hématine dissoute dans l’éther à la faveur de l’acide oxalique, des corps gras, des acides gras, de la lécithine, de la cholestérine, etc. 11 s’agit d’isoler la matière colorante de ces substances étrangères. Pour cela, nous avons recours aune solution éthérée de gaz ammoniac, obtenue, soit par un courant de gaz dans l’éther à 56 degrés avec de l’ammoniaque pure, à volumes égaux. J’ajoute goutte à goutte le réactif alcalin en agitant la teinture renfermée dans un ballon à fond plat. Le premier résultat est de former un oxalate d'ammoniaque insoluble dans l’éther, qui gagne le fond du liquide ou adhère aux parois du récipient. Nous conseillons, lorsque le dépôt paraît assez abondant, de décanter la teinture dans un autre matras, ce qui s’exécute très -facilement. L’expérience indiquera à l’expérimentateur le moment propice à ce temps de l’opération. On évite ainsi de trop longs lavages à l’eau pour dépouiller l’hématine de l’oxalate d’ammoniaque qui s’y trouve finalement mêlée après précipaüon complète.

Nous continuons à verser goutte à goutte l’éther ammoniacal, en agitant et regardant de temps en temps à travers le col du matras incliné contre le jour si des flocons bruns n’apparaissent point en suspension dans le liquide. Le passage de la teinte rouge brun de la teinture à une coloration approchant du jaune brun est un indice de la précipitation de la matière colorante. On agite fortement et on laisse en repos vingt-quatre heures. La pré-

cipitation s’achève d’ elle-même, en même temps que l’hématine prend delà cohésion et se précipite au fond du récipient. Ii suffit de décanter l’éther à peine coloré, de recevoir le dépôt sur un filtre et de laver à l’éther pour déplacer la liqueur mère et enlever toute trace de matières grasses (1), à l’aide d’une spatule de platine on enlève le mélange 'd’hématine et cl’oxalate d’ammoniaque que l’on porte au sein de l’eau distillée additionnée de quelques gouttes d’acide acétique. L’oxalate d’ammoniaque est dissous. L’acide acétique facilite la précipitation de l’hématine au sein de l’eau et la fait se rassembler en flocons. Après des lavages sur le filtre à l’aide de l’eau distillée chaude, acidulée par l’acide acétique, et ensuite de l’eau distillée pure, on achève le lavage par un peu d’alcool, et on dessèche l’hématine à l’air libre.

Tant que l’hématine n’est pas dépouillée de l’oxalate d’ammoniaque, il faut se garder de faire intervenir l’alcool dans les lavages. Ce dernier, en effet, dissout l’ hématine à la faveur de l’oxalated’ammonique. L’eau ellemême si elle n’est pas additionnée d’un peu d’acide acétique dissout un peu d’hématine.

Voici l’essai que nous avons fait pour nous rendre compte de la solubilité de l’hématine dans l’alcool à la faveur de l’oxalate d’ammoniaque. De l’hématine encore mélangée d’oxalate d’ammoniaque sur le filtre traitée par l’alcool. La teinture est très-foncée. Nous étendons cl’eau ; pas de précipitation d’hématine au bout de 24 heures. Cette solution d’hydralcoolique d’hématine

(1) Après précipitation par l’éther ammoniacal, l’éther conserve une teinte légèrement jannàtre sans trace d’hématine, comme il est facile de s’en assurer au spectroscope.

est divisée en 2 portions ; l’une est additionnée de quelques gouttes d’acide acétique, l’autre de quelques gouttes d’une solution de chlorure de calcium. Dans les deux cas l’hématine s’est précipitée en ilocons par neutralisation d’influence de l’oxalate d’ammoniaque. Ces conditions de solubilité de l’hématine. à la faveur des sels, sont intéressantes à noter.

L’emploi de l’éther ammoniacal que nous prescrivons dans la seconde phase de l’opération peut paraître de prime abord difficile. Il n’en est rien. 11 est aussi simple d’arriver à la limite de saturation indiquée, par l’éther ammoniacal, qu’il est aisé de faire un dosage alcaümétrique avec la teinture de tournesol, grâce au virement de couleur. Si l’on versait imprudemmeut l’éther ammoniacal et que l’on dépassât le but cherché, immédiatement la solution prendrait la teinte rouge dicroïque caractéristique de l’hématine, verte par réflexion, rouge par transmission. Dans ce cas malheureux de la manipulation, il est facile de revenir aux conditions primitives avec de l’éther à 56 degrés acidifié par l’acide oxalique. L’inconvénient est de charger inutilement ses liqueurs d’oxalate d’ammoniaque.

Nous ferons remarquer, malgré la longueur apparente de la description, la facilité et la rapidité de l’exécution du procédé que nous préconisons, et qui peut se résumer en quelques lignes :

« Laver les globules d’un litre de sang avec dix litres de solution de chlorure de sodium au dixième. Décanter et agiter les globules avec deux fois leur volume d’éther à 56 degrés. Après vingt-quatre heures décanter de nouveau, et traiter le coagulum par l’éther à 56 degrés, contenant2 grammes pour 100 d’acide oxalique. Filtrer et saturer la teinture par de l’éther ammoniacal.

Après vingt-quatre heures recueillir le précipité, le laver à l’étlier, à l’alcool et à l’eau. »

Le chlorure de sodium que nous employons dans la première partie de notre opération a l’avantage incontestable d’éliminer une grande partie des matières albuminoïdes dont le coagulum abondant exigerait l’intervention subséquente d’une quantité d'éther considérable. Toutefois, il a un inconvénient qu’il est bon de discuter ici; il contracte fortement les globules. La matière albuminoïde du stroma de ces derniers, une fois l’action coagulante de l’éther exercée, se présente sous forme de masse élastique dure, qui nous offre tous les caractères physiques que nous allons précisément reconnaître défavorables à l’extraction de la matière colorante. L’action de l’éther chargé d’acide oxalique sera plus lente.

Avec le chlorure de sodium on évite l’emploi d’une grande quantité d’éther, mais en revanche la matière albuminoïde se dépouille plus difficilement de l’hématine. On pourra donc, si l’on veut, supprimer ce premier traitement. Nous tenions à insister sur le modusoperandi proprement dit, afin d’éviter à l’opérateur la série de tâtonnements qu’impose toujours une description approximative sans détails minutieux et circonstanciés.

En trois ou quatre jours au plus, on obtient de l’hématine pure que le procédé d’Hoppe-Seyler ne donne qu’au bout de quelques semaines. Bien qu’on perde un peu d’éther dans les manipulations, on peut en recueillir la plus grande partie par distillation, et parer, par des soins, au seul inconvénient qui s’offre à nous, la perte d’un produit coûteux.

Mais pourquoi cet éther à 56 degrés ? Pourquoi ne pas exprimer le coagulum? Pourquoi limiter l’acidification de 1 éther employé comme dissolvant?

La justification de notre procédé apporte autant d’éclaircissements sur la chimie du sang; aussi croyonsnous opportun d'y insister quelques instants.

Si nous coagulons brusquement le sang par deux fois son volume d’alcool fort, par exemple, la coagulation est immédiate sous forme de petites granulations albuminoïdes fort rétractées, L’éther acide se trouve avoir peu de prise sur ce coagulum albumineux qui retient cette fois énergiquement la matière colorante qu’il n’abandonne jamais complètement, L’éther à 5G degrés, au contraire, dont l’action coagulante est lente, mettra l’albumine dans un état physique plus favorable à l’extraction des matières mélangées, Mais nous ajoutons qu’il faut se garder d’exprimer le coagulum, sous peine de détruire précisément cet état physique nécessaire pour les suites de l’opération. On transforme le tout parla pression en une masse élastique dure, cohérente, que le véhicule faiblement acide, que nous employons, ne peut plus pénétrer.

En coagulant le sang par l’éther à 56 degrés, on enlève au sang une matière colorante jaune spéciale signalée par Sanson, en 1835, sans qu’elle ait été étudiée par

(I) Nous avons essayé d’isoler cette matière colorante jaune du liquide sanguin. L’alcool éthéré, qui a servi à la coagulation, la contient en quantité assez notable pour présenter à l’œil une belle teinte dorée.

Distillant cet éther, nous avons fait bouillir le résidu, dans un essai, avec la chaux ; dans un autre essai, avec de l’oxyde de plomb récemment précipité. Nous voulions saponifier les matières grasses qui souillaient la matière colorante. Malheureusement, la présence des lécithines et de quelques matières extractives nous a empêché d’obtenir rien de défini. Les essais que nous avons faits pour obtenir un corps cristallisé ont été vains. Il faudrait, d’ailleurs, disposer de quantités plus considérables pour tenter un mode de purification

cet auteur (1). Coagule-t-on brusquement par l’alcool fort, il est impossible de soustraire ensuite au coagulum par l’éther ce principe colorant que l’albumine retient dans un réseau serré et impénétrable. On doit prévoir, par suite, que le sang desséché sera bien autrement rebelle. Nous avons fait F expérience. Du sang desséché au

sérieux, et la soustraire aux matières étrangères nombreuses auxquelles elle se trouve mélangée. Une source plus abondante de cette matière, qui permettrait alors d’en aborder sérieusement l’étude, réside dans le sérum des abattoirs.

Le sérum de sang de bœuf, qui s’isole du caillot formé, laisse quelquefois apparaître des flocons jaunes qui se rassemblent à sa surface. Ces flocons se dissolvent dans l’éther avec la teinte jaune dorée signalée plus haut. Ils sont constitués incontestablement par une forte proportion de matières grasses et d’un peu de cette matière colorante. Seulement, cette apparition n’est pas constante.

Si la coagulation par l’alcool éthéré permet de soustraire au sang une matière colorante, jaune, particulière, elle se prête encore à l’extraction de la plupart des principes immédiats contenus dans le sang. La coagulation lente de la matière albuminoïde ne détermine pas la formation de ce réseau qui enlace, en se formant, l’une des matières. Au microscope, le sang coagulé par l’alcool éthéré est un amas de granulations très-ténues, qui n’ont entre elles aucune adhérence cohésive.

Veut-on rechercher dans le sang l’urée, par exemple, on est sûr de la soustraire par cette méthode, comme nous avons pu d’ailleurs nous en assurer sur du sang d’urémique que l’on a mis à notre disposition. Nous avons opéré sur 43 grammes de sang. La solution élheralcoolique des parties solubles, après coagulation, a été évaporée. Le résidu a été épuisé par l’eau distillée. Cette dernière, évaporée, nous a donné, avec l’acide azotique, des cristaux caractéristiques d’azotate d’urée.

Certains principes toxiques de nature organique, même quelquefois de nature minérale, peuvent être soustraits directement au sang par celle méthode, qui ne repose, après tout, que sur l’étude raisonnée de la formation dn coagulum albumineux. Dans le cas d’alcaloïdes, il suffira de soumettre à l’évaporation la solution étheralcoolique, provenant du traitement du sang défibriné, de reprendre par l’éther pur et d’agiter ce dernier avec de l'eau acide, qui entraîne généralemsnl la base organique. Suivant l’alcaloïde, suivant Télé-

bain-marie, pulvérisé et tamisé au tamis de soie, a été traité par l’éther à 56 degrés, saturé par les acides les plus énergiques. Ce n’est qu’au bout d’un long temps de macération que nous sommes parvenu à soustraire des traces d’hématine à cette albumine dure et cornée. Ces considérations expliquent pourquoi nous avons été rebuté, lorsque nous avons voulu appliquer notre éther acide à la reconnaissance des taches de sans- en médecine légale.

Nous croyons la quantité de 2 pour 100 d’acide oxalique, en solution dans l'éther, suffisante pour l'extraction rapide de l’hématine. Un véhicule trop acide a le grave inconvénient de gonfler la matière albuminoïde,

ment à isoler, on terminera l’opération d’une façon différents que nous laissons à l’inspiration de l’expert.

Ce procédé de coagulation par l’éther alcoolique doit permettre également d’isoler la matière albuminoïde du sérum, la sérine, et de l’avoir très-pure. Le sérum, étendu de deux fois son volume d’eau, est traité par de l’acide acétique étendu jusqu’à ce qu’il ne se fasse plus de précipité. La caséine et la paraglobuline se précipitent. La liqueur filtrée, et très-légèrement alcalinisée, est soumise à la dialyse dans un dialyseur en baudruche, au milieu d’eau souvent renouvelée. Au bout de peu de temps, toutes les parties dialysables, peptones, fibrine soluble, matières extractives, sels minéraux, sont entraînées par l’eau. Il reste en solution une sérine encore souillée de matières grasses, de lécithines etc., que les auteurs se contentent généralement d’évaporer dans le vide. Nous proposons de terminer l’opération par une coagulation à l’aide de l’éther alcoolique, afin d’éliminer précisément une certaine quantité de matières échappées aux précédents traitements, et compromettant la pureté du produit définitif. Nous contentant d’évaporer dans le vide jusqu’à consistance de sirop très-clair, nous ajoutons à la solution de sérine deux fois son volume d’éther à 5G degrés. Au bout de 24 heures, nous décantons et lavons à l’éther, jusqu’à ce que ce dernier ne donne aucun résidu par évaporation. La sérine, ainsi coagulée sous forme de granules microscopiques, sera séchée rapidement à l’air.

de la transformer en une masse comme gélatineuse, que les lavages les plus patients ne dépouillent pas de sa matière colorante d’une façon complète. En revanche, l’éther fortement acide entraînera de l’albumine, ou un produit de sa modification, qui souillera l’hématine difficile à purifier.

Le procédé de préparation de l’hématine, que nous avons institué après une étude approfondie de la constitution du liquide sanguin, permet, comme on le voit, de préparer rapidement de l’hématine pure, nous devrions même ajouter économiquement. Car l’éther employé peut être recueilli à peu près complètement par la distillation. Toutefois nous ne nous dissimulons pas que si l’on effectue les manipulations en été, les décantations et les filtrations ont bientôt livré à l’atmosphère une large partie du véhicule; en hiver, cet inconvénient est partiellement conjuré, s

Pour une préparation de cours notre procédé assurément se recommande de lui-même. Mais lors qu’il s’agira de préparer une notable quantité d’hématine pour étudier précisément ses dérivés, ce maniement d’une énorme quantité d’éther demandera une installation réellement industrielle et spéciale.

Un grand appareil de fer blanc, muni à la partie inférieure d’un robinet et fermé supérieurement par un couvercle à vis, sera très-commode pour une opération en grand. On pourra ménager dans le centre de la face supérieure du couvercle un orifice propre à introduire un agitateur, destiné à remuer, les couches du magma albuminoïde à épuiser. La coagulation et l’épuisement pourront s’effectuer dans l’appareil sans aucune décantation ou filtration. L’éther qui aura servi à la coagula-

tion, une fois écoulé parle robinet inférieur, sera remplacé par le véhicule acide que Ton écoulera à son tour après macération et agitation. Le récipient inférieur pourra être disposé de manière à recevoir l’éther sans craindre sa volatilisation.

L’opération deviendra plus difficile, lorsqu’il s’agira de saturer par de l’éther ammoniacal de grandes masses d’éther acide. Apprécier la limite de saturation au sein de récipients peu maniables est une tâche pénible, bien que l’on puisse agir en plusieurs fois au sein de flacons en verre blanc. Le choc des couches supérieures du liquide contre les parois par l’agitation suffira pour indiquer l’hématine acide ou alcaline.

Deuxième procédé de préparation de l’hématine. — Nous avons tenté un autre mode de préparation de l’hématine en vue d’abréger encore s’il était possible la longueur des manipulations. Nous avons atteint notre but par l’emploi de l’éther acétique.

On sait que ce liquide s’obtient très-facilement en traitant trois parties d’acétate de potasse par un mélange de trois parties d’alcool fort et de deux parties d’acide sulfurique. Si on emploie cet éther acétique tel que le livre le commerce, on utilise un produit impur qui renferme une certaine proportion d’eau d’alcool, et d’acide acétique libre. Ce mélange est très-favorable à l’extraction de l’hématine. Si l’éther acétique est pur, c’est-à-dire exempt d’acide acétique, son action vis-à-vis du sang est nulle. La présence de l’acide acétique libre est indispensable. Il transforme d’abord l’hémoglobine en hématine et dissout ensuite cette dernière.

Nous coagulons le sang défibriné avec l’éther pur

mélangé de 30 p. 100 d'alcool. Au bout de vingt-quatre heures, nous décantons le liquide coagulateur comme dans notre premier procédé. Le coagulum non exprimé est traité par l’éther acétique, qui le décolore très-rapidement, Plusieurs lavages à l’éther acétique laissent le magma albumineux incolore.

Nous avons remarqué qu’aucune trace de matière al- ♦ buminoïde n’était entraînée par l’éther acétique.

Nous additionnons l’éther acétique de deux fois son volume d’eau. La majeure partie de l’éther et la presque totalité de l’acide acétique libre passent dans l’eau. Cette dernière est surnagée finalement, après forte agitation par une faible couche d'éther tenant en suspension l’hématine. A l’aide d’un entonnoir à robinet, on recueille la partie supérieure où figure l’hématine sous forme pulvérulente. On jette sur un filtre, on lave à Peau bouillante jusqu’à ce que l’éther acétique et l’acide acétique soient complètement entraînés. On lave à l’alcool et, à l’éther, et on fait sécher l’hématine à Pair libre. Elle se présente avec tous les caractères que nous lui connaissons.

Nous avons fait un dosage de fer afin de nous assurer de sa pureté. Notre essai a porté sur une quantité trèsfaible, et malgré ces conditions défavorables, nous avons obtenu une quantité de fer correspondant à la teneur habituelle de l’hématine. 0 gr. 0651 de matière nous ont donné 0,0079 de peroxyde de fer, autrement dit 12 gr. 15 p. 0/0. Tenant compte de la faible quantité de matière sur laquelle nous avons opéré, nous pouvons considérer le chiffre 12 gr. 15 comme le fer d’un produit parfaitement pur, exempt de matières albuminoïdes. Ces dernières substances étaient particulièrement à redouter.

Au point de vue de la préparation en grand, notre procédé par l’éther acétique offre de singuliers avantages de rapidité et même d’économie.

En deux jours, on obtient la totalité de l’hématine du sang; et l’éther acétique est recueilli à peu près intégralement par distillation. Pour épuiser un litre de sang coagulé, il faut 3 kilogr. environ d’éther acétique . La décoloration de la matière albuminoïde est alors complète. Une fois desséchée elle ira plus qu'une teinte légè rement grisâtre.

Le procédé par l’éther acétique offrirait le petit inconvénient de nous présenter l’hématine sous cet état mo léculaire qui résulte de Pactionde la chaleur, et s’oppose aux combinaisons directes et rapides de l’hématine avec l’acide chlorhydrique et bromhydrique au sein de l’éther. Nous ne retrouvons pas là cet état gélatineux particulier de l’hématine, obtenue dans notre premie r procédé par saturation à froid de l’acide oxalique qui la tient en dissolution.

Dans un cours où l’on voudra montrer aux élèves les préparations extemporanées de chlorhydrate et bromhydrate d’hématine, il sera préférable de recourir à notre procédé par l’éther chargé d’acid e oxalique.