CHAPITRE IY

SELS DÉFINIS d’hÉMATINE.

§ 1. Chlorhydrate d'hématine.

Teichmann en chauffant de sang avec l’acide acétique reconnut, à l’aide du microscope, qu’il se faisait des cristaux de matière colorante. 11 prit ces cristaux pour de Thématine cristallisée, et les désigna sous le nom d’hémine pour les distinguer de l’hématine amorphe ordinaire. (1)

Rollett, dans un travail trop peu connu en France, donna une méthode générale pour obtenir des cristaux de matière colorante du sang. Il procède d’abord comme Wittich dans lapréparation de son hématine. Il prend du sang défibriné, y verse une solution concentrée de potasse, jette sur un filtre le coaguium formé, et sèche à une température qui ne dépasse pas 40°. Le coaguium, repris par l’alcool absolu, donne une teinte très-ehargée à la faveur de l’alcali. Une solution alcoolique d’acide tartrique versée dans la teinture alcaline détermine d’abord la transformation d’un précipité, puis redissout la matière colorante. On filtre, on évapore au dixième la solution acide, on laisse refroidir et l’on obtient ainsi de grandes quantités de cristaux très-nets. Mis a égoutter

(1) Teichmann, Zeitschrift für rationelle médicin, neue solge. Bd. III, p. 375, und Bd. Y, p. 43.

sur un filtre et lavés à l’eau distillée, il sont complètement purs. (1)

Avec les acides oxalique, citrique, lactique, Rollett obtient des cristaux analogues, cristallisant sous des formes correspondant à deux systèmes. Les uns dérivent du système rhombique et se présentent sous forme de tables ou d’aiguilles; les autres sont des prismes à six faces.

L’auteur allemand examine les caractères de solubilité de ces cristaux, qu’il n’analyse point, et qu’il confond avec l’hématine amorphe de Lecanu (globuline), sans songer à la possibilité d’une combinaison de l’hêmatine avec un acide.

Ajoutons que Lehmann, avant Rollett, en traitant du sang par un mélange d’alcool et d’éther tenant en dissolution de l’acide oxalique, et abandonnant la solution au repos, avait obtenu également des cristaux.

Toutefois la composition de ces cristaux avait été méconnue jusqu’à Hoppe-Seyler qui en reprit l’étude, en prépara des quantités suffisantes et les soumit à l’analyse. Il leur assigna la composition G96 H102 Az12 Fe3 O18, 2 HCI, reconnaissant la présence de l’acide chlorhydrique dans la molécule. Gorup-Besanez a confirmé les assertions d’Hoppe-Seyler.Les acides organiques, mis en présence du sang, n’agiraient qu’en décomposant les chlorures en présence de Thématine, mettant l’acide chlorhydrique en liberté, qui a une grande affinité pour le pigment sanguin.

(1) Rollett, Kurze Mittheilung einiger Resultate über die Farbes toffkrystalle welche sich unter dem Einflusse von Saüren aus dern Blute abscheiden (Vorgeiey, in der Sitzungvorn, 23 Juli 1863).

Partant donc de ce fait que l’hématine peut former avec l’acide chlorhydrique une combinaison définie, d’après les assertions de Hoppe-Seyler, nous avons cherché à former cette combinaison directement. Teichmann, Lehmann, Kollett ne l’ont produite en effet que par l’intermédiaire des chlorures. Après de longs tâtonnements, nous avons réalisé la combinaison de la façon suivante : Nous introduisons au fond d’un tube fermé par un bout, de l’hématine pure récemment précipitée, encore gélaniteuse, sous cet état privé de cohésion qui se prête à l’influence dissolvante de l’éther faiblement acide. On verse sur cette hématine, 4 centimètres cubes d’éther pur, exempt d’eau, très-légèrement acidifié par l’acide chlorhydrique. Disons que nous entendons par éther acidulé, de l’éther pur additionné d’une demigoutte d’éther saturé de gaz acide chlorhydrique. Cet éther saturé s’obtient en faisant passer un courant de gaz acide chlorhydrique sec dans de l’éther anhydre, refroidi par un mélange réfrigérant.

Par agitation avec l’hématine, cet éther acidulé prend une teinte faible rouge brun, quelquefois une teinte un peu plus foncée. Par un repos de quelques heures, la coloration a visiblement diminué d’intensité. Si nous examinons alors au microscope l’hématine primitivement pulvérulente et amorphe, nous trouvons des cristaux très- nets, de coloration marron, se présentant tantôt sous forme de fers de lance allongés, groupés en étoiles, tantôt sous formes de prismes tronqués aux extrémités. A côté de ces cristaux, on voit en général quelques grains d’hématine amorphe, échappés encore à l’action de l’acide chlorhydrique. Il suffit de répéter l’acidulation de l’éther avec beaucoup de précautions,

pour ne trouver bientôt sous le microscope que des cristaux.

L’hématine est alors complètement combinée.

L’examen microscopique doit se faire avec un grossissement de 300 diam. environ.

Ces cristaux parfaitement lavés ont été analysés, ils renferment de l’acide chlorhydrique et peuvent être envisagés comme une combinaison d’hématine avec cet acide. On les traite par de l’eau bouillante sans leur enlever trace d’acide. Dissous alors dans de l’ammoniaque pure, ils abandonnent à cette base l’acide chlorhydrique. Précipitant en effet l’hématine par l’acide acétique, on reconnait dans le liquide filtré la présence évidente du chlorhydrate d’ammoniaque à l’aide du nitrate d’argent.

Ces cristaux sont très-friables, et doivent être soumis à l’examen microscopique en évitant de les comprimer entre les lames, sans cela, on n’a plus qu’une masse marron granuleuse, dans laquelle on retrouve à peine quelques débris de forme cristalline.

L’eau, l’alcool, l’éther, ne les dissolvent pas.

L’alcool et l’éther très-acides les dissolvent, encore, faut-il que ces véhicules soient rendus acides par des acides forts. L’alcool très-chargé d’acide chlorhydrique le dissout, puis abandonne par l’évaporation lente des globules noirâtres, résinoïdes.

L’éther m’a donné dans ces conditions des cristaux cubiques, noirs, opaques, que j’ai montrés à M. Gautier, agrégé de la Faculté, mais sur la nature desquels je n’ose me prononcer. Toujours est-il qu’ils contiennent de l’acide chlorhydrique dans leur molécule.

Ces produits de l’évaporation, au sein d’une liqueur

acide, m’ont paru se rapprocher de l’hématine de Robin et Verdeil, que ces savants obtiennent en évaporant sur l’eau la solution alcoolique d’hématine dans l’acide chlorhydrique. Ils ont en effet despropriétés identiques» sont solubles dans l'alcool et l’éther, après lavages à l’eau pour enlever toute trace d’acide.

L’hématine de Robin, comme nos analyses nous l’ont indiqué, contient de l’acide chlorhydrique dans sa molécule. G est à une combinaisen acide d’un dérivé de l’hématine. Nous disons dérivé, car la solution alcoolique ou éthérée de cette substance ne présente plus la teinte rouge brun ordinaire dessolutions acides d’hématine, mais bien une teinte jaune- brun. Au spectroscope on n’obtient plus les bandes caractéristiques des solutions acides d’hématine pure.

Les solutions étendues et froides de carbonate de soude attaquent lentement ces cristaux de chlorydrate d’hématine. Les alcalis concentrés les dissolvent, ainsi que les solutions alcooliques d’alcalis.

Nous trouvons, en un mot, les propriétés de l’hémine de Teichmann.

Les auteurs qui nous ont précédé n’ont pu préparer la chlorhydrate d’hématine que par l’intermédiaire des chlorures, comme nous l’avons dit en commençant. Hoppe-Seyler qui a donné un procédé régulier de préparation des cristaux de chlorhydrate, étend du sang défibriné de son volume d’eau et le traite par l’acétate de plomb, en évitant d’en employer un excès. L’albumine combinée à l’oxyde de plomb se précipite. La liqueur filtre colorée en rouge; on la débarrasse de l’excès de plomb par le carbonate de soude, on filtre de nouveau et on évapore dans le vide. Le résidu est broyé avec 13

et 20 fois son poids d’acide acétique cristallisable, avec addition d’une petite quantité de chlorure de sodium. Le mélange brun est abandonné à lui-même pendant quelques heures, puis chaude pendant deux heures au bain-marie. On ajoute au liquide cinq fois son volume d'eau pure, et le tout est abandonné à la température ordinaire pendant une semaine. Il se sépare des cristaux d’hémine qu’on recueille et qu’on dissout dans l’acide acétique bouillant Une addition d’eau amène de nouveau la séparation des cristaux qu’on recueille et qu’on lave à l’eau.

Cette hémine présente des propriétés générales identiques à celles que nous avons signalées plus haut. Toutefois, la forme cristalline diffère un peu. Ensuite, les cristaux que nous obtenons directement avec l’éther acide sont minces, friables, marron. Par le procédé d’Hoppe Seyler ils sont durs, d’un marron bien plus foncé.

Notre méthode directe est, dans tous les cas, une confirmation éclatante des affinités de l’hématine mises en évidence par Hoppe Seyler. Mais cette méthode, telle que nous l’avons exposée, entraîne irrévocablement de nombreux tâtonnements pourla quantité d’acide à mettre vis-à-vis de l’hématine, en vue d’une combinaison complété. Préciser d’un autre côté le degré d’acidité nécessaire pour un poids d’hématine humide rapporté à un poids donné d’hématine sèche, est une tâche difficile. L’éther chargé d’acide chlorhydrique est peu maniable, et l’hématine, que l’on obtient toujours en petite quantité ne se prête pas à une méthode pondérale de cette nature.

Nous avons trouvé un mode de séparation, qui juste-

ment n’exige aucune précaution dans les manipulations, et doit donner des résultats constants, entre des mains même inhabiles:

Préparation clu chlorhydrate d’hématine. — On prend du sang que l’on traite exactement comme pour la préparation de rhématine, c’est-à-dire qu’on le coagule par l’éther à 56 degrés, après lavages des globules, si l’on veut, par le chlorure de sodium ; on fait la teinture d’hématine à l’aide de l’éther tenant en dissolution 2 pour 100 d’acide oxalique. Soit 50cc de cette teinture com^ntrée, on l’additionne de cinq gouttes d’éther saturé ae gaz acide chlorhydrique; on agite pour mélanger, puis l’on verse cette teinture dans un matras contenant 200cc d’eau distillée. On a soin de ne pas remuer. La teinture acide surnage et abandonne par le repos, sur la zone de séparation des liquides, une matière pulvérulente, noirâtre, que le microscope permet de reconnaître parfaitement cristallisée. Ces cris • taux sont du chlorhydrate d’hématine doué de toutes les propriétés signalées plus haut.

Il faut avoir soin de laisser le matras débouché, afin que l’éther s’évapore lentement. Avec quelques précautions on peut obtenir ainsi, au bout de vingt-quatre heures, des cristaux visibles à de très-faibles grossissements. (Voir planche I, fig. 2.)

Si l’on agitait directement avec de l’eau la solution éthérée, on obtiendrait aussi des cristaux de chlorhydrate, mais beaucoup plus petits. L’eau s’emparant brusquement dans ces conditions d’une grande partie de l’acide et de l’éther, le sel se précipite, insoluble dans l’éther doué dès lors d’une faible acidité.

On pourrait également, mais en petite quantité, et d’une façon plus irrégulière, préparer les cristaux de chlorhydrate en traitant par l’éther chargé d’acide chlorhydrique le sang coagulé par l’éther-alcool. Il faut que cet éther ne soit pas trop riche en acide chlorhydrique sous peine de voir se gonfler l’albumine qui retient énergiquement la matière colorante. Un volume d’éther saturé pour 10 volumes d’éther à 56° suffi tparfaitement. Un peu d’alcool dans l’éther est très-favorable à l’extraction del’hématine. Il suffît de laisser reposer vingtquatre heures dans un ballon cette solution chlorhydrique pour voir les parois du récipient tapissées de cristaux. Je les ai obtenus deux ou trois fois assez volumineux pour les apercevoir à la loupe et même à la rigueur à l’œil nu.

Cette solution agitée avec de l’eau donne aussi des cristaux de sel d’hématine. Mais il est une condition indispensable à la réussite de l’opération : l’absence dans la solution éthérée d’hématine de matière albuminoïde ou de matières grasses. Sans cela le chlorhydrate précipité est amorphe. Et disons en passant que cet amorphisme se retrouve toutes les fois que la formation de chlorhydrate a lieu en présence de substances étrangères.

La présence d’une certaine quantité d’alcool dans l’éther est très-utile à la formation des cristaux.

Nous ne pouvons omettre en passant de signaler un procédé, de préparation de l’hématine inédit, dû à M. Cdénard de Lyon, et basé précisément sur l’emploi de l’éther chargé d’acide chlorhydrique. Le sang est coagulé par l’alcool, puis traité dans un mortier par l’ éther-acide. On agite ensuite cet éther-acide avec de

l'eau ammoniacale qui lui enlève sa matière colorante. Avec l'acide acétique ou tout autre acide, on précipite au sein de l’eau la matière colorante de sa solution alcaline. Il faut avoir soin de ne pas employer un éther trop acide, sous peine d’entraîner ces principes albumineux. L’eau ammoniacale devra être modérément alcaline, sinon l’éther par l’agitation dissoudrait du gaz ammoniac et retiendrait de la matière colorante.

Ce procédé auquel M. Glénard n’a pas donne suite, queje sache, offre l’inconvénient d’épuiser difficilement le coagulum sanguin, et d’enlever quelquefois un peu de matière albuminoïde si l’éther est tant soit peu alcoolique.

Toutefois, nous devons l’avouer, ce procédé trèsingénieux que nous connaissions avant d’imaginer notre méthode de préparation de l’hématine, n’a pas été sans influence sur notre innovation. Il a été pour nous une première base de recherches.

Dans le procédé de préparation du chlorhydrate d’hématine, tel que nous l’avons indiqué, en laissant évaporer sur l’eau la solution éthérée acide d’hématine, il faut prendre la précaution de bien laver le coagulum sanguin avec del’éther avant le traitement acide. Comme dernière disposition pratique, nous prescrivons de ne pas laisser complètement évaporer l’éther. La zone de séparation de l’eau et de l’éther qui la surnage offre déjà des cristaux avant l’évaporation complète. Sinon il suffira d’une trace de matière grasse pour donner au microscope une bouillie méconnaissable.

Dès que Ton verra la couche à chlorhydrate formée, on recueille les cristaux que Ton dépose délicatement

Cazeneuve.

sur la lame de verre, et cela avec un tube creux depetit calibre, que l’on utilise comme pipette, en fermant l’orifice supérieur avec l’index. La lamelieune fois superposée avec précaution, on regarde au microscope etl’on constate les formes caractéristiques.

Nous ne pouvons terminer ces considérations sur le chlorhydrate d’hématine, sans ajouter encore un procédé rapide de préparation, que nous avons expérimenté avecsoin. Il consiste à traiter de l’hématine pure, séchée à la température ordinaire, par de l’alcool additionné de quelques gouttes d’acide chlorhydrique pur. On chauffe ; l’alcool est bientôt coloré en rouge brun par l’hématine acide. On décante ou Ton filtre la teinture pour laisser l’hématine indissoute. Par refroidissement il se dépose des cristaux de ciilorliydrate d’hématine, bien moins friables que ceux obtenus par l’éther, d’un noir foncé, et sous forme de petits fers de lance groupés en étoiles. Nous leur reconnaissons toutesles propriétés de l’hémine ordinaire. (Voir planche II, fig. 2.)

Si nous chauffons à 200° ces cristaux au sein de la teinture-mère, nous remarquons qu’ils se dissolvent; chauffant pendant quelque temps, si nous laissons ensuite refroidir nous remarquons qu’aucune cristallisation ne réapparaît. Le liquide a pris une teinte qui tend vers le jaune brun, au lieu du rouge brun primitif. Au spectroscope, cette solution ne présente plus la bande caractéristique de l’hématine acide. Evidemment l’hématine a déjà subi une modification profonde.

C’est là un chapitre d’études à ajouter à tant d’autres, lorsque nous voudrons quitter le champ des généralités' que nous nous sommes astreint à parcourir dans ce travail.

— bl —

S II. Bromhydrate d'hêmatine. — Grâce à certains tours de main, nous avons vu comment nous avions formé directement le chlorhydrate d’hêmatine. Il était logique de penser que les acides qui se rapprochent de l’acide chlorhydrique par leurs affinités, donneraient aussi des combinaisons définies avec le pigment sanguin. L’expérience a confirmé nos présomptions. De l’hématine récemment précipitée, mise dans un tube fermé par un bout et traitée par l'éther acidulé à l’aide de l’acide bromhydrique, donne très- rapidement des cristaux de bromhydrate (1). Ils offrent égalementjles mômes propriétés: insolubles dans l’eau, l’alcool et l’éther, ils se dissolvent dans l’alcool et l’éther trèsacides, dans les liquides alcalins. (Voir planche I, fig. 4).1

À propos du bromhydrate, nous ferons les mêmes réflexions que nous faisions en traitant du procédé de prépara tion du chlorhydrate, llfautuneméthode exempte d’incertitude et de tâtonnements.

Additionner la teinture oxalique d’hêmatine de quelques gouttes d’éther chargé d’acide bromhydrique, comme nous avons fait avec l’éther chargé d’acide chlorhydrique, est une façon d’opérer appelée peut-être à être entachée d’erreur. La solution oxalique d’hêmatine contient toujours, par suite de sa préparation avec le sang, une certaine quantité de chlorure de sodium. Spontanément, comme Lehmann l’a observé, il peut se

1) L’éther s’acidifie avec une demi-goutte d’éther, saturé de gaz acide bromhydrique. L’éther saturé s’obtient en faisant réagir le brome sur le phosphore amorphe humide, et recevant le gaz formé dans de l’éther pur et anhydre, au sein d’un mélange réfrigérant.

former des cristaux de chlorhydrate par la simple réaction de l’acide oxalique sur les chlorures en présence de l’hématine. Qui nous a dit, lorsque nous exposons sur l’eau (1) la teinture oxalique d’hématine, addition* née de quelques gouttes d’éther acide par le gaz bromhydrique, qu’il ne se formera pas simultanément des cristaux de chlorhydrate, grâce à la réaction signalée plus haut? Pour parer à cet inconvénient nous avons donc dû chercher une méthode différente de préparation.

Préparation du bromhyd'rate d'hématine. — On prépare d’abord, par notre procédé, de l’hématine pure. Récemment précipitée, encore humide sur le filtre, elle est traitée par de l’éther acide par le gaz bromhydrique. Le dissolvant, formé par un mélange de lcc d’éther saturé et 3cc d’éther pur anhydre suffit dans cette opération. La dissolution est très-rapide. La teinture rouge brun est filtrée, en cas qu’une partie de l’hématine ait échappé à la dissolution ayant subi partiellement la modification moléculaire sur laquelle nous noussoinmes arrêté précédemment. 50cc de cette teinture sont versés à la surface de 200cc d’eau distillée contenue dans un matras, et abandonnés ainsi à une évaporation lente. Les cristaux de bromhydrate ne tardent pas à apparaître au niveau de la zone de deux liquides. Ils sont appréciables parfois à de faibles grossissements.

Nous avons pu obtenir également à l’aide de l’alcool chargé d’acide bromhydrique des cristaux de bromhydrate, mais dans un système tout différent. Avec l’éther chargé d’acide bromhydrique on obtient de petites lames

prismatiques tronquées à leurs extrémités. Ces lames sont d’une friabilité considérable. Avec l’alcool acide on obtient un bromhydrale, sous forme de petits cubes à arêtes souvent émoussées, de manière à simuler des formes losangiques ou complètement rondes. Ces cristaux sont durs, d’un brun foncé, souvent réunis ensemble et présentant un aspect moniliforme. (Voir planche II, fîg. 3).

Quant aux propriétés générales du bromhydrate, elles se rapprochent considérablement de celle du . «chlorhydrate. Traité par l’ammoniaque et d’une façon générale par les alcalis, le bromhydrate abandonne son brome à la base plus forte en même temps que l’hématine reste en solution. Après précipitation de Thématine par l’acide acétique, on pourrait constater dans le liquide la présence du bromhydrate d’ammoniaque avec les réactifs ordinaires.

S III. Iodliydrate d'hèmcitine.

L’acide 'iodhydrique, qui se rapproche par ses affinités des acides chlorhydrique et bromhydrique, a été mis en présence de l’hématine dans les conditions où nous avons expérimenté pour ses analogues. Nous avons réussi à obtenir de l’iodhydrate d’hématine cristallisée sous formes de prismes brunâtres tronquées à leurs extrémités. Seulement la décomposition facile de l’acide iodhydrique nous a arrêté un instant dans la formation du composé. 11 est d’abord impossible de conserver une dissolution d’acide iodhydrique dans l’éther; la solution est rapidement colorée en brun par l’iode mis en liberté. Si ensuite on fait réagir sur de l’hématine une solution acide faible d’éther produite extemporanément

avec l’acide iodhydrique gazeux, comme en même temps que l’hématine est attaquée, l’acide iodhydrique tend d’un autre côté à se décomposer spontanément dans la liqueur, on se trouvera en présence de résultats irréguliers. Le procédé suivant nous a toutefois donné u u bon résultat. Nous mettons de l’hémaline pure récemment précipitée en suspension dans l’éther à 56°. Nous faisons arriver un courant d’acide iodhydrique jusqu’à dissolution. Agitant ensuite cette teinture avec de l’eau distillée, nous obtenons de l’iodhydrate d’hématine cristallisée. (Voir planche II, figure 4). • M. Husson s’inspirant très-probablement des faits que nous venons d’exposer et qui ont été publiés sommairement dans le journal de M. Ch. Robin (1) serait arrivé, dit-il, à préparer les bromhydrate et iodhydrate d’hématine en procédant comme Teichmann pour le chlorhydrate. Il traite le sang par l’acide acétique, en présence d’un bromure ou d’un iodure ; les cristaux de sels d’hématine apparaissent rapidement sousle microscope. Nous discuterons à propos des recherches médico-légales la valeur du procédé de M. Ilusson.

Nous verrons que ses vues sur les sels d’hématine sont complètement erronées.