morte

{1} A partir de 1313 la Q ne pond plus que des œufs non fécondés.

Comme on le voit, tandis que dans certains cas, dès le troisième passage (23 mai), toutes les progénitures furent aseptiques, dans d'autres cas la femelle déposa tantôt des œufs aseptiques, tantôt des œufs accompagnés de quelques cellules de Levure, qui se multiplièrent ensuite. Un cas typique est celui d’une Mouche qui, après avoir pondu des œufs aseptiquement pendant 15 jours (1299 à 1419), mourut le seizième (en 7/33) et dont le cadavre devint le point de départ d'une culture de Levure.

Les descendants aseptiques issus des pontes de ces femelles furent isolés, contrôlés, puis accouplés et mis en reproduction sur Levure de boulangerie stérilisée, Ce milieu qui convient admirablement bien au développement des Drosophiles aseptiques est préparé de la façon suivante : 300 grammes de Levure du commerce, comprimée en pains, sont délayés dans l’eau jusqu’à obtention de 1.000 centimètres cubes du mélange. Cette émulsion est versée sur du coton hydrophile (10 centimètres cubes de dilution et 1 gramme de coton dans les tubes d’élevages ; 250 centimètres cubes et 15 grammes dans les fioles coniques à fond plat). Le récipient d’élevage ainsi garni est alors stérilisé à 120°.

Contrôle de l'asepsie des élevages. — Le contrôle de l’asepsie des élevages ainsi obtenus a été effectué avec le plus grand soin.

Des larves, des pupes et des Mouches ont été ensemencées et écrasées dans les milieux suivants : bouillon peptoné, gélatine coulée en boîtes de Petri, gélose ordinaire, gélose glucosée et maltosée, pomme de terre, carotte, sérum coagulé. Les tubes ensemencés ont été, soit laissés à la température ordinaire (15 à 20°), soit mis en étuve à 24° et à 37°. Tous sont restés aseptiques. Dans un mortier stérilisé, des larves et des Mouches ont été broyées aseptiquement puis introduites dans des tubes de bouillon ou de gélatine. Après mélange intime, ces liquides ont été aspirés et scellés en pipettes de Roux, maintenues à 20°, 24° et 37°. Aucune culture anaérobie ne s’est manifestée.

La conclusion était donc formelle : les élevages essayés se trouvaient bien en état aseptique.

Conclusion. — Les lignées aseptiques ont été maintenues

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régulièrement en cet état de mai 1911 à juillet 1914. Ceci représente plus de 80 génér ations dont chacune a été constituée par plusieurs centaines d'individus. Jamais une plus complète démonstration n’a été fournie de la possibilité pour des organismes animaux de mener une vie aseptique. Tandis que les expériences, faites sur ce sujet, avaient simplement montré qu'il était possible de faire vivre aseptiquement des animaux pendant quelques jours, ou même d'obtenir le développement complet de quelques individus (expériences de WozcLmax), mes recherches indiquent péremptoirement que cette vie aseplique peut être maintenue pendant une très lonque suite de générations et pour des milliers d'individus, sans qu’il en résulte aucune suite fâcheuse pour leur développement, leur nutrition, leur fécondité. Bien au contraire les élevages aseptiques ont montré une régularité d'évolution, une fécondité qu'aucune autre condition n'avait permis d'obtenir. On peut dire que dans ces conditions — les causes de mort accidentelle (Mouches noyées, larves coincées ou écrasées) étant écartées — tout œuf fécondé aboutit à une Mouche capable de se reproduire.

Il est par contre bien évident que cette expérience ne peut être réalisée que si l’on dispose d’une technique impeccable et si on peut offrir aux organismes aseptiques la nourriture qui leur convient alors. Placées en effet sur les milieux qui leur suffisent en état septique, tels que marmelade de pommes, pommes de terre, les Drosophiles aseptiques sont incapables de s’en nourrir et d'atteindre le terme de leur développement.

Cest en étudiant le comportement des Drosophiles aseptiques sur différents milieux nutritifs comparés à la Levure stérilisée qui est le milieu optimum, que j’ai pu faire de fructueuses expériences, dont je parlerai plus loin, sur la fécondité de ces Mouches. Le milieu levure stérilisée représente, en effet, pour les Mouches aseptiques un milieu nutritif très constant, dans lequel on n'a plus à craindre l'intervention de toutes les perturbations liées au développement successif des microorganismes et aux transformations chimiques où physiques que leur présence provoque dans le substratum nutritif et dans la composition de l'atmosphère des récipients. Je ne saurais trop le répéter, après avoir élevé des Drosophiles dans tant de conditions différentes, Je puis affirmer que l'élevage aseptique pratiqué de cette ma-

nière est supérieur à tous les procédés que j'ai pu essayer et à tous ceux que d’autres auteurs ont utilisés pour leurs recherches sur le même organisme.

Précision des autres conditions d'élevage. — Dès le début de ces recherches, je me suis attaché à préciser, dans la mesure du possible, les conditions d’élevage autres que celles tenant à la pature du milieu nutritif, Cette précision atteint nécessairement des degrés différents, suivant le facteur externe que lon considère.

Température. — Les élevages ont tous été maintenus dans des étuves réglées à 23° ou 24°, à 1° près. Un thermomètre enregistreur placé dans létuve à enregistré régulièrement la température, pour le cas où des variations accidentelles seraient survenues. Pour certaines expériences, j'ai utilisé des étuves qui étaient réglées à 20° ou à 30°, En somme, l'obtention de températures constantes, grâce à des étuves bien conditionnées et munies de bons régulateurs, ne présente aucune difficulté spéciale.

Humidité. — W est par contre très difficile d'obtenir des conditions d'humidité absolument constantes. Pour rendre aussi petits que possible les écarts de degré hygrométrique, j'ai pris les précautions suivantes. Le plancher des étuves est constitué par une cuve en cuivre dans laquelle une couche d’eau est maintenue sous une épaisseur constante, grâce à un réservoir à niveau constant. Le couvercle de la cuve est percé de trous que lon peut ouvrir, ouvrir partiellement, ou fermer en déplaçant latéralement, au moyen d’une glissière, une deuxième plaque également percée de trous disposés de la même manière. Si les trous des deux plaques coïncident, les orifices sont complètement ouverts, si au contraire on déplace latéralement la plaque supérieure, les orifices sont de plus en plus réduits jusqu’à fermeture totale. Ce dispositif permet de régler la teneur en vapeur d’eau de Pétuve.

J’ai d'autre part pris les plus grandes précautions pour que les tubes d’élevages renfermassent toujours la même quantité relative d’eau et de matériaux solides. Chaque tube ou fiole recevait une quantité identique de coton, une même quantité de la dilution de levure faite à un taux constant. La stérilisation a toujours été effectuée dans des conditions aussi constantes que possible. D'ailleurs des pesées effectuées sur’ un grand nombre

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de tubes avant et après la stérilisation ont montré que la perte d’eau d’ailleurs très faible, consécutive à ce traitement, ne présentait d’un tube à l’autre que des écarts insignifiants.

Souvent la surface du milieu nutritif se trouve plus sèche que la partie plus profonde, surtout dans les cas où l’ébullition qui se produit pendant la période où on laisse fluer la vapeur de Pautoclave a un peu dissocié le coton servant de support à la dilution de Levure. Pour remédier à cet inconvénient, j'ai remplacé l’obturateur par des baguettes de verre de même calibre (fig. 1, €), mais plus longues, grâce auxquelles on peut presser sur la surface du coton, l’égaliser et lui donner le degré d'humidité convenable.

L'atmosphère des récipients, maintenus en étuve, se trouve à peu près saturée de vapeur d’eau pour la température considérée, mais il suffit de changements très légers pour produire immédiatement la condensation d’une partie de la vapeur d’eau sur les parois. Si par exemple on sort un bocal de l’étuve à 24°, et qu'on le transporte dans le laboratoire à 18° ou 20°, pour lexaminer, il se fait très rapidement un dépôt interne de buée et toujours sur le côté faisant face à la fenêtre (rayonnement calorifique plus intense ?) Dans létuve même, il arrive que toutes les fioles présentent un dépôt d'eau condensée sur les faces orientées dans le même sens. [est impossible de supprimer ces inégales répartitions, car le rayonnement calorifique sur les côtés faisant face aux tuyaux chauffants des parois n’est pas le même que sur ceux tournés vers le centre de l’étuve ou vers la porte.

Eclairement. — L'influence de ce facteur paraît tellement faible, eu égard à d’autres conditions, qu’au début de mes essais je n'ai pas cherché à le préciser. Les étuves se trouvaient placées dans des endroits sombres, peu éclairés. Il est d’ailleurs extrémement difficile de réaliser un éclairement uniforme des diverses parties d’un tube. Il faudrait utiliser pour cela une source artificielle de lumière (je ne disposais pas d'électricité au laboratoire où ces recherches ont été effectuées !) consistant en plusieurs lampes réparties sur une circonférence dont le tube d'élevage représenterait le centre. Il m'a paru beaucoup plus simple et sans inconvénient de faire mes élevages entièrement à Fabri de la lumière, en revêtant de papier noir les parois vitrées de l’étuve.

De cette façon du moins, j'avais, au point de vue considéré, des conditions constantes.

Composition de l'atmosphère. — [)ans les élevages non aseptiques, surtout s'ils sont faits dans des récipients de petite capacité, fermés par un disque de verre ('), les fermentations et putréfactions du substratum nutritif modifient profondément la composition de l'atmosphère des récipients. Il n’en est plus de même dans les élevages aseptiques. Le renouvellement de Pair peut se faire assez régulièrement à travers le bouchon de coton des fioles ou des tubes. Je ne me suis pas encore préoccupé de réaliser des conditions rigoureusement identiques d’aération. J’ai cependant fait établir des fioles à deux tubulures latérales situées à des niveaux différents de façon à pouvoir faire circuler dans toutes les fioles, par aspiration, de l’air ou un mélange gazeux de composition connue. Cette recherche est indiscutablement liée à la question de l'entretien d’une humidité constante.

C’est en utilisant ces conditions d'élevage et comme milieu nutritif la Levure stérilisée que j'ai obtenu avec les Drosophiles aseptiques un développement si rapide et si régulier que je Pai pris pour type, comme terme de comparaison pour toutes les expériences ultérieures. Dans de semblables conditions, en effet, maintenues en étuve à 24°, toutes les larves s’accroissent rapidement, accumulent d’abondantes réserves et se transforment en pupes à la fin du cinquième ou au cours du sixième Jour. Les pupes donnent toutes des Mouches qui éclosent le onzième ou douzième jour. Les Mouches aseptiques, transportées à chaque génération sur des milieux neufs, continuent à se reproduire régulièrement, pondant en moyenne 20 à 25 œufs par jour et vivent deux mois environ.

(* Procédé utilisé par la plupart des auteurs qui ont élevé des Drosophiles,

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