NAGER RENE REA EAN EURE

ENT NE ONE PEU RAP ERA REPEE ent" er cel CRE RDC

Il est facile de voir que cette constitution présente comme caractéristique une teneur très élevée en acide phosphorique et en potasse. Une partie de l'acide phosphorique ne se trouve certainement pas à l’état minéral, mais entre dans la constitution de la lécithine et de la nucléine.

100 grammes de levure fraîche, en pain, renferment d’après mes essais 1 gr. 77 de cendres. La dilution de Levure que J’employais comme milieu témoin étant formée d’une partie de Levure pour deux parties d’eau distillée, la quantité de cendres pour ce milieu était donc de o gr. 59 p. 100, soit 5 à 6 p. 1.000.

La reconstitution de sels minéraux en partant des bases et acides dosées séparément est une opération délicate. Après quelques essais, je m'en suis tenu à un petit nombre de sels minéraux,

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avec lesquels jai préparé des solutions mèr& qui ont servi pour un grand nombre d'expériences. Voici les trois solutions minérales qui furent le plus souvent utilisées. Elles ont d’ailleurs fourni, malgré leur différence, des résultats absolument comparables. Chaque sel est dissous à part, puis le mélange est fait dans un ordre donné pour éviter des précipitations. Tous ces milieux renferment de l’acide acétique servant à maintenir en solution certains constituants.

1 litre de milieu artificiel 4 193 renferme Phosphate tripotassique . . . 70 gr 3 QT. 0 — (PISOUIQUE RSR Su 0 » 25 — monocalcique. 50) 0 » 25 Chlorure de sodium So) 029 ChIonürEdemaon CSN LD oO » 7D ACIDE RATÉQUES ENT , 50 Eauredistillée 4/5" eue LORS pr ao d'A E

5 centimètres cubes de cette solution étaient ajoutés à 100 centimètres cubes de milieu artificiel. Des quantités inférieures (1 ou 2 centimètres cubes p. 100) ont donné des résultats comparables.

1 litre de milieu artificiel & 107 renferme Phosphate monopotassique . . Ar er. 60 4 gr. 16 — monocalcique. . . 3 » 20 OT 92 Chlorure de magnésium. 5 » 60 CE LEE Sulfate de soude..." 1 » 60 o » 16 AGIT RACE QUES EE 5 »

Pau redistulée rs PP RE O ES ET Dodo 5 gr. 20

10 centimètres cubes de cette solution étaient utilisés pour

100 centimètres cubes de milieu artificiel. , 1 litre de milieu artificiel

81 renferme

Phosphate monopotassique 25 g1 2 gr. 50

— monocalcique . 5 » o » 5o

Chlorure de magnésium. 700 0.70

Sulfate de soude > » 0 » 20 Acide acétique . 5 »

PAU TÉMISELIÉ RE Ne (DE D. 1.000 CC,

10 centimètres cubes de cette solution étaient utilisés pour 100 centimètres cubes de milieu.

Ces trois sulutions ont, ainsi que je lai indiqué, donné des résultats équivalents. Je me suis de plus assuré qu’elles ne renfermaient pas d'éléments nuisibles en ajoutant ces solutions, soit à de la Levure ordinaire, soit à certains milieux artificiels sur lesquels, comme nous le verrons, le développement des Drosophiles s’effectue dans d'excellentes conditions.

Je n'ai pas fait d'expériences systématiques pour déterminer quels étaient, parmi ces sels, ceux dont la présence était indispensable. Par contre, j'ai dans de très nombreuses expériences ajouté d’autres éléments minéraux, à l'absence ou à l'insuffisance desquels on aurait pu attribuer l'arrêt de croissance et de développement observé dans la plupart des milieux. C’est ainsi que dans toutes les séries d'expériences du début, un certain nombre de tubes recevaient, en plus de la solution minérale utilisée, du fer, soit sous forme de perchlorure, soit sous forme de peptonate de fer, d’hémoglobine, ou du manganèse, ou les deux sels à la fois. Ces additions n’ont jamais entrainé aucune modification dans le développement des Drosophiles.

L’acide acétique, servant à maintenir en solution les éléments minéraux, exerce en outre, ainsi que nous allons le voir, une action très favorable sur le développement des Mouches.

Parallèlement à ces solutions minérales, j'ai très fréquemment utilisé, à leur place, ou même ajoutées à elles des solutions de cendres de Levure. Dans aucun cas je n’ai vu cet emploi entrainer aucune amélioration des milieux artificiels. Les solutions minérales utilisées ne manquaient donc d'aucun élément indispensable. :

En résumé, ayant constaté que les solutions que j'ai indiquées n'étaient ni toxiques, ni notoirement insuffisantes, je n'ai pas cherché à préciser davantage, pour le moment du moins, le rôle des sels minéraux dans lalimentation des Drosophiles.

20 Influence de 13 réaction du milieu.— Les milieux naturels sur lesquels se développent les Drosophiles sont toujours plus ou moins acides. Certains même (cuves de vinaigreries) contiennent une dose d’acide acétique considérable. Au cours de mes

essais pour rendre aseptiques mes élevages, j'avais à plusieurs

190 E. GUYÉNOT

reprises utilisé, sans aucun dommage, des milieux acidifiés par le vinaigre ou lacide acétique, qui exerçaient alors une influence antiseptique très efficace. Je n’ai donc pas hésité, pour ces r'aisons, à acidifier mes milieux arüficiels par l'acide acétique.

Des expériences m'ont d’ailleurs montré que cet acide paraissait réellement utile, du moins jusqu'à une certaine concentration.

Expérience. — J'ai préparé, en effet, des dilutions de Levure de boulangerie auxquelles j'ajoutai 1, 2, 5 et 10 p. 100 d'acide acétique. D’autres portions furent neutralisées, puis alcalinisées très faiblement ou assez nettement par la soude, la dilution de levure témoin étant normalement légèrement acide.

Sur Levure normale, comme sur Levure acidifiée à r ou 2 p.100, le développement se fait d’une façon parfaite. Toutes les larves s'accroissent régulièrement, se transforment en pupes dès le sixième jour et l’éclosion des premières Mouches survient le onzième Jour. Les Mouches parentes vivent très longtemps sur ces milieux.

La teneur de 5 p. 100 en acide acétique exerce déjà une action retardatrice. Les pupes n'apparaissent qu'au bout de huit à dix jours, les Mouches seulement à partir du treizième, quatorzième ou quinzième jour. Les Mouches parentes meurent au bout de quatre à huit jours, si on les maintient sur ce milieu.

L’addition de 10 p. 100 d'acide acétique exerce une action encore plus défavorable et paraît constituer le taux maximum à partir duquelle développement n’est plus possible. Les Mouches parentes meurent rapidement du deuxième au quatrième jour. La croissance des larves est ralentie, beaucoup meurent dès le huitième jour, sans pouvoir atteindre leur développement complet. Celles qui survivent se transforment en pupes de petite taille à partir du dixième au treizième jour, suivant les tubes. La majorité de ces pupes meurent sans éclore. Dans un cas cependant, quelques-unes donnèrent naissance à des Mouches, du dixhuitième au vingtième jour. Ces Mouches transportées sur un milieu semblable, y moururent sans donner de descendants. Au contraire, les Mouches nées sur les milieux moins acidifiés, donnèrent une deuxième génération abondante.

Si l'addition d'une dose élevée d'acide est néfaste, la neutralisation du milieu, suivie d'une alcalinisation, même très légère, par

la soude, supprime tout développement. Sur de tels milieux, en effet, les Mouches parentes étaient toutes mortes le troisième jour. Les quelques œufs pondus donnèrent naissance à des larves qui moururent du sixième au huitième jour, après navoir présenté qu’une croissance insignifiante. Sur milieu franchement alcalin, les larves moururent toutes dès le quatrième jour.

Ces expériences montrent que l'addition de 0,5 p. 100 d’acide acétique dans mes milieux ne pouvait qu'exercer une heureuse influence.

3° Détermination du taux optimum de peptone. — |ès le début de ces essais j'ai utilisé la peptone Chapoteaut à la dose de 1 Où 2 p. 100. Il s’est trouvé que cette quantité était légèrement inférieure au taux optimum. Celui-ci a été déterminé par deux catégories d'expériences.

Expériences. — Dans une première série, je fabriquai des milieux artificiels uniquement composés de sels minéraux (4 797) et de peptone à des taux de r et 2 p. 100. Le développement sur ces milieux, entièrement dépourvus d’hydrate de carbone et de graisse, est très intéressant à étudier.

Sur ces milieux, les Mouches parentes meurent rapidement au bout de trois à quatre jours, un peu moins vite que lorsqu'on les maintient simplement sur de Peau distillée où elles meurent en 48 heures en moyenne. Le besoin d'aliments énergétiques est pour elles impérieux. De plus, la ponte se ressent immédiatement de la pauvreté du milieu. C’est ainsi que dans quatre tubes pris au hasard, 10 à 15 mouches placées dans chacun de ces tubes pondirent 3, 10, 7, 6 œufs, ce qui représente une ponte infime par rapport à la normale (20 à 24 œufs par Jour et par femelle).

Les larves nées sur ces milieux aspirent avec avidité le milieu nutritif et présentent pendant les premiers jours une croissance lente, mais incontestable. Sur peplone 1 p. 100 elles ne dépassent pas la taille‘de 1 millimètre qu'elles atteignent le sixième jour, puis leurs mouvements se ralentissent, elles deviennent de plus en plus inertes et meurent. Toutes sont mortes le neuvième jour.

Sur peplone 2 p.100, la croissance est plus intense et la durée de vie très augmentée. Les larves atteignent en effet 1 mm. 5 le huitième jour, 2 millimètres du douzième au quatorzième puis cessent de croître et meurent. Toutes sont mortes le vingtième jour.

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Dans les deux cas, ces larves sont extrèmement transparentes et leur corps adipeux est absolument vide de réserves. Il est remarquable que sur de semblables milieux, il y ait des phénomènes de croissance incontestables pendant les premiers jours et que certaines larves puissent dans ces conditions subsister, pendant quinze jours et plus, malgré l’absence totale d’aliments gras ou hydrocarbonés. Il est vrai que ces larves vivent sur les réserves grasses contenues dans l'œuf, ce qui explique leur assez grande activité pendant les premiers jours. Au point de vue qui nous

Zenoïns ( levare)

Flore 47

% / AL EEE SECTE 940. Ho 12 BA 1 HT RO, Fig. 6. — Courbes montrant l'influence de la concentration en peptone

des milieux nutritifs sur le développement des Drosophiles. Horizontalement, les temps exprimés en Jours. Verticalement, les divers degrés de croissance des larves; P, formation des pupes ; M, éclosion des mouches.

occupe, la dose de peptone de 2 p. 100 à donné des résultats nettement plus favorables que la dose inférieure de moitié.

Dans une autre série d'expériences (fig: 6), j'ai utilisé des doses de peptone de 0,5, 2,4 et 10 p. 100 avec solution minérale et lécithine (0,5 p. 100): La lécithine est, comme nous le verrons, de tous les corps gras celui qui s'est montré le mieux utilisable par les larves de Drosophiles aseptiques.

Le taux de 0,5 p. 100 de peptone est nettement le moins favorable. La croissance est presque nulle et les larves meurent dès le

sixième ou septième jour. Pour des doses de 2 p- 100 et { p. 100, les résultats sont nettement supérieurs. La croissance des larves se fait bien et assez rapidement; elles atteignent une taille égale à la moitié où aux trois quarts de la taille adulte, ce qui correspond à environ 3 millimètres à 4 mm. 5. Les larves n’évoluent cependant pas au delà, n’accumulent pas de réserves, restent transparentes et meurent. Toutes sont mortes le quinzième jour.

Le taux de 10 p. 100 se trouve nettement au delà de loptimum, les larves s’accroissent peu, ne dépassent pas le tiers de la taille adulte et meurent précocement. Toutes sont mortes le douzième Jour.

Beaucoup d’autres expériences ont été effectuées avec des milieux plus complexes et renfermant 1, 2 où 4 p. 100 de peptone. La comparaison des résultats de toutes ces expériences montre que c’est une teneur de 2 à 4 p. 100 en peptone qui représente la dose optima. Au dessous et au dessus les résultats sont manifestement inférieurs.

Sur les milieux simplement albuminoïdes (peptone et sels minéraux), les larves n’'emmagasinent dans leur corps adipeux, ainsi que j'en donnerai ultérieurement la démonstration, aucune trace de graisse. J'ai donc été tout naturellement conduit à rechercher si elles seraient susceptibles d'élaborer ces réserves, indispensables pour la suite de leur développement, aux dépens d’hydrates de carbone ou de corps gras introduits dans la composition des milieux artificiels. Ce sont en effet, comme nous lPavons vu, ces deux catégories de substances que les organismes animaux peuvent sûrement utiliser pour l’élaboration de leurs réserves adipeuses. En est-il de même pour les Drosophiles?

4° influence des hydrates de carbone. — Au cours de mes premiers essais j'ajoutais systématiquement aux milieux du dextrose. Comme je n'obtins de cette addition aucun bon résultat, j'essayai successivement toute une série d'hydrates de carbone : amidon, dextrine, glycogène, dextrose, lévulose, saccharose, lactose. Voici dans leur ensemble les résultats obtenus :

1e série : Amidon. Dextrine. Glycogène. — L’amidon utilisé est de l’amidon de pomme de terre mis en suspension dans Peau, puis ajouté à la quantité voulue de milieu artificiel. A ce milieu on ajoute immédiatement du coton, puis on stérilise à 120°, Le

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coton retenant lPamidon Fempêche de tomber au fond du tube et de s’agglomérer en pâte compacte. Le glycogène employé est soit le glycogène de commerce, soit du glycogène préparé au laboratoire. La dextrine est la dextrine pure du commerce. Je rapporterai succinctement les résultats de trois expériences : re expérience (milieux 4 183, 185, 18q). — Les milieux essayés sont constitués de la façon suivante :

Pépione 2/4 M ARE TS PRE TT OEIL Ne Amidon ou LéRIPLDE ER 2 p. 100 et 4 p. 100 Sels MINÉrAUR A 197 ON Dose normale

Les milieux témoins sont, outre la Levure habituelle, des milieux à > et {4 p. 100 de peptone sans hydrate de carbone ou avec 1 p. 100 de glucose.

Sur milieu peptone 4 p. 100 et amidon p.100, les larves s’accroissent un peu jusque vers le cinquième jour où elles atteignent la taille 1/3. Encore actives le septième jour, ces larves deviennent de plus en plus inertes et meurent. Toutes sont mortes le treizième Jour. Elles sont transparentes et dépourvues de réserves.

Sur milieu peplone 4 p. 100 et dextrine Z p. 100 les résultats sont superposables. Les larves s’accroissent jusqu’au cinquième ou sixième Jour, atteignent la taille 1/4 ou 1/3. Leurs mouvements se ralentissent, et après une période d’immobilité plus ou moins prolongée, elles meurent. Toutes sont mortes le treizième jour. Elles sont également transparentes et sans réserves.

Sur les milieux ne contenant que 2 p.100 de peptone et » p. 100 d'hydrate de carbone, les résultats sont sensiblement les mêmes. Toutes les larves meurent du septième au treizième jour. Dans un cas il y eut formation de trois pupes qui n’aboutirent d’ailleurs pas. Ce fait était dû à ce que deux cadavres de Mouches parentes ayant été laissés dans le tube, quelques larves avaient dévoré ces cadavres et s’en étaient nourries. Ces larves sont d’ailleurs faciles à reconnaître et à suivre, car elles absorbent le pigment rouge des yeux des mouches et leur intestin reste pendant plusieurs Jours coloré en rouge.

Les milieux artificiels témoins, avec ou sans glucose, ont fourni des résultats superposables, |

2 expérience (milieux 4 148,4 »01). — Les milieux essayés ont la constitution suivante :

REDON MT AE MA AN ARE due I p. 100 1 P. 100 GIVCONÉNER RAR RU TT 1 P. 100 »

LU COS CRD CENT Lt ct » 1 P. 100 SONDE ZI) 7. Mt Dose normale

Sur milieu renfermant 7 p. 100 de glycogene, la croissance larvaire s'effectue un peu mieux que sur le milieu témoin glucosé. Certaines larves atteignent la taille 1/2 vers le huitième jour ; d’autres restent plus petites. Elles sont, au début, bien actives, turgescentes et on a limpression que le développement s’effectuera mieux que sur les milieux précédents. Il ne s’agit cependant que d’une action passagère ; à partir du treizième jour, les mouvements des larves deviennent de plus en plus lents et elles meurent du quinzième au vingt et unième jour. Toutes sont transparentes et dépourvues de réserves dans leur corps adipeux.

3° expérience (milieu $ 2, 3 4). — Les milieux essayés sont constitués ainsi :

PONT AE ES ES AE CET SAT TRE 2 P. 100 Glycogène ou amidon ou dextrose . . . 1 P. 100 Sel ner EE CN UE - eDosenormale

Aussi bien sur milieu à amidon, que sur milieu à glycogène, la croissance est lente, les larves atteignent au plus le tiers ou la moitié de la taille adulte. Actives au début, elles deviennent de plus en plus lentes et meurent à partir du dixième au douzième jour. Toutes sont mortes le seizième Jour.

Sur milieu glucosé, les résultats sont sensiblement comparables.

Dans tous les cas, les larves restent transparentes et dépourvues de réserves.

Conclasion : Qu'il s'agisse d'amidon, de dextrine ou de glycogène, ajoutés à des milieux contenant 1, > où 4 p. 100 de peptone, dans aucun cas ces éléments hydrocarbonés n'ont été, dans ces conditions, utilisés par les larves pour la fabrication de leurs réserves adipeuses. La croissance et la durée de la vie ne diffèrent pas sensiblement de ce qu’elles sont sur les milieux dépourvus d’hydrates de carbone.

En ce qui concerne les Mouches parentes, leur durée de vie et leur ponte, sur les milieux à amidon, ne sont pas augmentées par rapport à ce qui se passe sur les milieux à peptone seule. Ceci tient d’ailleurs en partie à ce qu’elles se collent facilement par

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leurs ailes aux parois ou au coton imbibés d'empois d’amidon et, dans ces conditions, meurent rapidement. Par contre, sur les milieux contenant du glycogène, les Mouches sont encore toutes vivantes au bout de quatre à cinq jours de présence sur ces milieux et leur ponte est beaucoup plus abondante que sur les milieux sans hydrate de carbone ou avec amidon. Cette différence tient vraisemblablement à ce que lamidon transformé en empois par la stérilisation se trouve, malgré qu'il soit uniformément réparti dans le coton, dans un état physique qui le rend difficilement absorbable.

J’ajouterai que je me suis, chaque fois, assuré à la fin de Pexpérience que l’amidon ou le glycogène n’avaient pas été transformés en sucre soit du fait de la stérilisation, soit par suite de la présence de larves vivantes sur les milieux. Dans aucun cas, en effet, le milieu n’a réduit la liqueur de FeuiNG et les réactions colorantes avec la solution 10do-iodurée ont toujours été extrèmement nettes.

2° série : Glucose, lévulose. Autres sucres.— J'ai surtout étudié Paction du glucose (dextrose) chimiquement pur ; accessoirement j'ai utilisé d’autres sucres, lévulose, saccharose, lactose qui n’ont pas donné d’ailleurs de résultats sensiblement différents.

Expériences. — Les essais faits avec le glucose sont extrèmement nombreux. J’ai, par exemple, utilisé les milieux suivants :

Peptones net D TOO SET D TOO ID TOO AD TO Glucose * ,°:,:,: . "41 p.100" + p. 100 22 p/Wro00, © 4 200 Sels minéraux , . Dose normale

Sur les milieux renfermant peplone 1 p.100 et glucose 1 p. 100 (4 201,4 209, à 218, 4 230) les larves très actives pendant les premiers Jours s’accroissent et atteignent en six à huit jours une taille de 1 millimètre, 1 mm. 5 et parfois > millimètres. Certaines ne s’accroissent pas davantage où même ne dépassent pas un millimètre. D’autres, moins nombreuses, atteignent > mm. ». Dès le dixième au douzième jour, on note la présence de cadavres de larves. Celles qui survivent, très transparentes et dépourvues de réserves, deviennent de plus en plus inertes et meurent toutes du douzième au vingtième jour.

Sur milieux renfermant peptone > p. 100 et glucose 1 P+ 100 (œ 232,5 6) le rendement est un peu meilleur, ce qui est évidemment dù à l'augmentation du taux de peptone. Les larves attei-

gnent — certaines d’entre elles du moins — une taille de > mm, 5 à 3 millimètres et même 3 mm. 5, vers le douzième où quinzième Jour. Mais l'accumulation de réserves dans le corps adipeux ne se fait toujours pas et toutes ces larves meurent du dix-septième au vingtième Jour.

Sur milieu renfermant peptone 2 p. 100 et glucose 2 p. 100 (2 190), c’est-à-dire ne différant du précédent que par une teneur double en glucose, les résultats sont à peu près comparables en ce qui concerne la croissance larvaire. La taille maxima est en effet de 2 mm. 5 à 3 mm. mais la mort des larves est plus précoce. Beaucoup sont déjà mortes le neuvième jour et la plupart le quizième jour.

Enfin, sur milieux renfermant peplone 4 p. 100 et glucose 4 p. 100, les larves, malgré une teneur optima en peptone, présentent un accroissement très diminué et une mortalité beaucoup plus précoce. La taille maxima est de 1 mm. 5 à 2 millimètres, Dès le sixième jour, on observe un ralentissement très net des mouvements des larves. Le huitième jour, on note déjà de nombreux cadavres et toutes les larves sont mortes dès le douzième jour.

Si on compare ces résultats avec ceux fournis par les milieux témoins ne renfermant que peptone et sels minéraux, on constate qu’une dose de glucose de 1 p. 100 n’entraine aucune amélioration du développement larvaire. Par contre une dose plus élevée, > p. 100 et surtout /{ p. 100 détermine nettement une diminution de la croissance et une augmentation de la mortalité.

Les larves élevées sur ces milieux glucosés, après avoir mené une vie assez active les deux ou trois premiers jours, présentent ensuite un aspect caractéristique. Elles s’accroissent encore en longueur, mais sont comme flétries, ratatinées au lieu d’avoir l’aspect turgescent qu'ont les larves bien nourries ou élevées sur d’autres milieux. La chitine présente des plissements et la larve se fait remarquer par la petitesse de son diamètre transversal. Tout se passe comme s’il s'agissait de larves déshydratées. Les autres sucres déterminant un aspect analogue, il est possible qu'il s'agisse d’une déshydratation réelle de organisme par suite de l’absorption d’un liquide nourricier de concentration moléculaire assez élevé. Ceci expliquerait que les résultats soient d'autant plus mauvais que la teneur en sucre est plus grande.

Sur des milieux semblables aux précédents, mais dans lesquels le glucose était remplacé par un poids équivalent de lévutose (2 200, 8 8) les résultats furent absolument superposables. Il en fut de même des essais faits avec le saccharose et le lactose.

Conclusion : Pas plus que les hydrates de carbone colloidaux, les sucres proprement dits ne se montrent susceptibles d'être — dans Les conditions de l'expérience — utilisés par les larves pour l'édification de leurs réserves. Ces larves restent en effet constamment transparentes et leur corps adipeux est réduit à l’état de squelette. Le développement complet est impossible.

Par contre, les Mouches adultes, dont les mouvements, et par suite la dépense énergétique, sont beaucoup plus intenses que chez les larves, vivent sur les milieux sucrés bien plus longtemps que sur les milieux témoins, dépourvus de sucre. Ainsi, tandis que les Mouches meurent sur ces derniers milieux au bout de 3 à 4 jours, elles peuvent rester en vie pendant 10, 19, 20 Jours et quelquefois plus sur les milieux artificiels sucrés. Les mâles persistent plus longtemps que les femelles.

La ponte est également plus abondante que sur les milieux dépourvus de sucre, mais seulement pendant les premiers Jours. Bientôt en effet la ponte se ralentit, puis on voit apparaître un nombre croissant d'œufs fécondés, mais qui avortent au cours du développement embryonnaire, Sur de tels œufs on distingue, à travers la coque ovulaire, les principaux organes larvaires à différents stades de développement, mais ce développement s’arrête et le contenu de lœuf avorté brunit progressivement, En même temps que se produit cet avortement des œufs, les femelles présentent très généralement un abdomen énorme, transparent, distendu par un liquide elair, en même temps que les ovaires régressent (fig. 4; pl. HT). Finalement la ponte cesse entièrement. Je reviendrai sur ces phénomènes, dans le chapitre consacré à l'étude de la fécondité des Drosophiles.

4° Influence des graisses ou de leurs constituants. — Ayant ainsi constaté que, dans les conditions où Jopérais, les larves étaient incapables d'utiliser les divers hydrates, de carbone pour l'édification de leurs réserves — et cependant ce mécanisme me paraissait devoir être le plus vraisemblable en raison de la teneur, relativement élevée en hydrates de carbone, de la Levure ou des

milieux sur lesquels celle-ci se développe — je fus naturellement conduit à rechercher si les graisses seraient d’une plus grande efficacité.

Les expériences ont été faites en utilisant soit des graisses neutres (tributyrine, trioléine, tripalmitine, tristéarine) seules ou associées, ou les acides gras correspondants, seuls ou associés à la glycérine, ou des savons, ou des mélanges de ces divers constituants des graisses, L'emploi de ces substances est assez délicat en raison de la difficulté que l’on éprouve à les maintenir en état d’émulsion. L’addition de savons rend évidemment celle-ci plus stable, mais ces substances, généralement toxiques, ne peuvent être ajoutées qu en très faible dose. J'ai évité d'employer la saponine pour la même raison. Je me suis contenté, après secouage du milieu dans le tube de culture lui-même, de stabiliser émulsion par l’addition immédiate du coton hydrophile servant à donner au liquide la consistance nécessaire. En fait, je me suis assuré qu'après stérilisation la graisse ne formait pas une couche imperméable à la surface du milieu et que les larves absorbaient réellement avec le liquide nourricier des globules de graisse, ainsi que le montra l’examen direct du contenu intestinal.

Action d'un aliment gras complexe : le beurre. — Avant d'employer les graisses pures, j'ai utilisé, à titre de premier essai, des milieux renfermant 2 à 4 p. 100 de peptone, 2 ou 4 p. 100 de glucose, dextrine ou amidon, avec ou sans addition de 0, p. 100 de beurre émulsionné.

Dans les milieux renfermant du glucose (2 ou 4 p. 100), l'addition de beurre n’entraina aucune amélioration sensible du développement larvaire.

Par contre, dans les milieux renfermant 4 p. 100 d’amidon, l'addition de beurre parut déterminer une légère augmentation de la valeur nutritive, Vers le neuvième jour, en effet, les larves atteignirent la taille 3/4, étant encore bien actives, Du treizième au quinzième jour, quelques-unes se transformèrent en pupes, très petites, souvent malformées qui se desséchèrent d’ailleurs, sans évoluer. Les autres larves devinrent inertes et moururent peu après. Quelques-unes restèrent cependant vivantes jusqu'au vingt-cinquième jour.

Sur les milieux renfermant 2 p. 100 de dextrine et du beurre, les phénomènes furent à peu près identiques, mais, bien que

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l'essai ait porté sur plusieurs tubes d’élevages, une seule pupe fut formée, qui se dessécha aussitôt.

En somme l'addition de beurre, sauf dans le cas où les milieux contenaient en outre du glucose, a déterminé une très légère augmentation de la croissance larvaire et même a permis, dans quelques cas, la formation de pupes très petites qui, faute de réserves, furent incapables de se métamorphoser. Le corps adipeux des larves resta, comme dans tous les essais antérieurs, réduit à un état squelettique et absolument transparent. L’examen des cellules adipeuses ne montra que de très rares inclusions graisseuses à leur intérieur.

Cette action légèrement favorisante du beurre fut également constatée avec des milieux dépourvus d’hydrates de carbone, mais constitués seulement de peptone 1 p. 100, sels minéraux, avec ou sans beurre.

Tandis que sur les milieux témoins, les larves ne dépassèrent pas 1 millimètre et moururent du sixième au douzième jour, sur les mêmes milieux additionnés de beurre, la taille maxima fut de 1 mm. 5 à » millimètres, les premiers cadavres n’apparurent que le dixième jour et quelques larves vivantes furent notées le vingtième jour. Dans aucun cas, il n’y eut formation de pupes. L’action du beurre a consisté seulement en une augmentation légère de la croissance et de la durée moyenne de vie, sans que la graisse alimentaire ait été utilisée pour lélaboration des réserves.

Action de graisses définies. — À des milieux témoins, formés de peptone 2 p. 100 et sels minéraux, j'ai ajouté soit des graisses neutres, soit des mélanges gras divers.

L’addition de fributyrine (0,50 p. 100), de trioléine (0,50 p. 100) n'ont déterminé aucune amélioration du développement larvaire. Les larves ne dépassèrent pas la taille 1/3 et moururent à partür du douzième jour.

L'emploi de {ristéarine (0,02) et de tripalmitine (0,02) dissoutes dans la {rioléine (0,4) a entrainé une légère amélioration de la croissance des larves. Celles-ci atteignirent la taille 1/2 ou même 3/4 vers le onzième jour. Elles ne moururent que du quinzième au vingtième jour.

L'emploi de milieux renfermant de l'acide stéarique ayant donné des résultats aussi bons, il est vraisemblable que c’est

cet acide gras qui est le mieux utilisé par les larves. La croissance eut sans doute été meilleure encore si j'avais employé des proportions plus élevées d'acide stéarique ou de tristéarine.

L’addition d'acide oléique seul ou des mélanges : acide oléique, glycérine — acide oléique, oléate de soude, glycérine — trioléine, acide oléique, oléate de soude, glycérine, n’entraïna que de très légères améliorations de la croissance larvaire, moins marquées que celle due à l'emploi des composés stéariques.

Le meilleur résultat fat fourni par un complexe gras, formé de trioléine, acide oléique, oléate de soude, acide stéarique, stéarate de soude et glycérine. Les larves atteignirent une taille de 3 millimètres, 3 mm. 5 et { millimètres vers le onzième jour ; elles ne commencèrent à mourir que vers le quinzième jour et quelques-unes vécurent jusqu'au vingt-huitième jour.

Sur ces milieux additionnés de substances grasses, les Mouches adultes vécurent plus longtemps que sur les milieux artificiels témoins : leur ponte fut un peu plus abondante, surtout sur les milieux à stéarine ou acide stéarique.

D’autres séries d'expériences faites avec ces mêmes mélanges gras, associés à des hydrates de carbone, ont donné des résultats comparables.

Conclusion : Pas plus que les hydrates de carbone, les graisses ne permellent un développement normal des larves, bien qu'une certaine quantité de ces graisses alimentaires ait été absorbée par les organismes el même mise en réserve dans leur tissu adipeux. J'ai pu voir en effet se produire sous mes yeux le passage de globules graisseux à travers la paroï intestinale, principalement au niveau du ventricule chylifique. Ce phénomène très net sur les coupes (fig. 6, pl. IF) peut être facilement suivi au microscope sur les larves vivantes, aplaties par le compresseur, et toujours suffisamment transparentes. Il devient tout à fait net lorsqu'on emploie des graisses colorées par le Sudan TI. On voit les globules rouges de graisse pénétrer dans les cellules épithéliales où ils progressent très lentement. Cette graisse est sans doute consommée directement par la larve au fur et à mesure de son absorption, toujours faible d’ailleurs, servant à couvrir les dépenses énergétiques de l’organisme. Ceci explique que les larves soient alors capables d’un développement plus complet et

plus prolongé.

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Certaines larves peuvent même emmagasiner dans leur tissu adipeux des gouttelettes de graisse, parfois en assez grande quanüté (fig. 3, pl. ID). Lorsqu’elles sont constituées par des graisses à point de fusion peu élevé (trioléine, acide oléique), provenant des graisses alimentaires, ces gouttelettes se fusionnent fréquemment, donnant ainsi à la cellule adipeuse un aspect très spécial.

Le fait que des larves, non seulement absorbent les graisses du milieu nutritif, mais peuvent en mettre une partie en réserve, sans cependant réussir à atteindre le terme de leur développement, est très important à considérer. Ce résultat négatif tient vraisemblablement à ce que les larves ont besoin de corps gras d’une certaine constitution déterminée et qui ne sauraient être utilement remplacés par une graisse quelconque. La comparaison de ces résultats avec ceux que je relaterai prochainement nous permettra, en outre, de penser que les réserves vraiment utilisables ne sont pas constituées purement et simplement par des graisses, mais que leur nature est beaucoup plus complexe. Nous verrons qu'il manque aux milieux artificiels dont il vient d'être question, quelque chose qui, sans être un corps gras, n’en est pas moins indispensable à la larve pour lui permettre d’édifier des réserves adipeuses normales.

6° Action des lipoides. — J'ai utilisé à peu près exclusivement la lécithine du jaune de l'œuf. Quelques essais ont cependant été effectués avec de la cholestérine seule ou associée à la lécithine.

La lécithine utilisée était employée en solution alcoolique à 20 p. 100, dont j'ajoutais 2 cent. 5 à 100 centimètres cubes de milieu. La lécithine est immédiatement précipitée de sa solution alcoolique et reste en fine suspension dans le milieu : celui-ci est ensuite chauffé au bain-marie afin d'éliminer l'alcool par évaporation.

Expérience. — On utilise les deux milieux artificiels suivants :

Témoins (æ210, 9231) Milieux à lécithine (a 20, 238)

BépPtone MAUR 1 p.100 > p. 100 L p.100 2 P. 100 Léçithine . :. » » 0,9 p.100

0,9 p.100 Sels minéraux. Dose normale

Tandis que sur milieu témoin renfermant 1 p- 100 de peptone, les larves, après avoir atteint une taille maxima de 1 millimètre vers le sixième jour, meurent toutes en moins de douze jours, sur le même milieu additionné de lécithine, les larves s'accroissent bien davantage et vivent plus longtemps. Elles atteignent en effet 1 mm. 5 à 2 millimètres le douzième jour, 2 mm, 5 le quinzième jour, 3 millimètres à 3 mm. 5 vers le vingtième au vingtdeuxième jour. À partir de ce moment leur activité diminue rapidement et des cadavres commencent à être notés. L'observa-

Ftone-/ecilhine Sr

ie ST # % 4 Pnlone serle % 1 2 3 + 5 6 4 8 9 10 11 12 13 4 15 16 # 18 19 20 21 22 25 2 25 X N 2 Fig. 7. — Courbes montrant l’action favorable de la lécithine, par rapport

au milieu témoin, formé seulement de peptone et sels minéraux

tion fut interrompue le vingt-sixième jour, alors qu'il y avait encore quelques larves vivantes, mais inertes.

L'action favorisante de Ha lécithine (fig. 7) estencore plus nette dans les essais faits avec les milieux renfermant 2 p. 100 de peptone. Sur milieu témoin, en effet, les larves s’accroissent jusqu’au douzième jour, mais sans dépasser la taille de > millimètres à 2 mm. b. Beaucoup meurent dès ce moment et toutes sont mortes le vingt-deuxième jour. Au contraire, sur le même milieu additionné de lécithine, les larves atteignent 3 mm., 3 mm. 5 et même 4 à 5 millimètres, c’est-à-dire presque la taille adulte, le

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douzième jour, À partir du quinzième jour, leurs mouvements se ralentissent, les premiers cadavres ne sont notés qu'à partir du vingt-deuxième jour et le vingt-sixième jour, lorsque l’observation est interrompue, la plupart des larves sont encore vivantes.

L'observation n'ayant pas pu, à ce moment, être continuée audelà du vingt-sixième jour, je refis de nouveaux essais qui furent suivis jusqu'au bout. Le milieu (4 275) avait la constitution sui-

vante :

BéPIONCr EMI IN PARNETRR ERMPEAE 2 P. 100 LÉ CLL MID ESRI OE D O0 Séls minéraux e197 14. M er cn Doseraurniale

Sur ce milieu, j'ai obtenu très régulièrement des larves 1/2 en dix jours, 3/4 en treize jours et 1/1 en dix-huit jours. Presque toutes les larves atteignirent ainsi la taille adulte, mais la plupart ne se métamorphosèrent pas, leurs mouvements devinrent de plus en plus lents etfinalementelles moururent. Certaines purent d’ailleurs rester en vie très longtemps: j'ai trouvé fréquemment des larves vivantes au bout de trente-cinq, quarante, cinquante-cinq et même soixante jours ! D'autre part quelques-unes, vers le vingtième jour, se transformèrent en pupes; celles-ci présentèrent même un début de métamorphose, mais finalement se desséchèrent et moururent d’une façon plus ou moins précoce. Enfin, dans des cas exceptionnels, quelques pupes donnèrent naissance à des Mouches vivantes qui moururent au moment de l’éclosion — survenue le quarantième jour — ou immédiatement après. Ces Mouches étaient absolument naïnes (ayant la moitié de la taille ordinaire), transparentes et souvent malformées ; leur abdomen paraissait absolument vide.

D'autres expériences, effectuées en ajoutant de la lécithine à des milieux renfermant peptone 1 et 2 p. 100, avec glucose 1 p. 100, ont donné des résultats très comparables.

Conclusion : De toutes les substances utilisées, hydrates de carbone ou corps gras, la lécithine s’est révélée la plus utile pour la nutrition larvaire. C'est sur les milieux à lécithine que l'on observe, en effet, la croissance la plus régulière des larves, cellesciatteignant, pour la plupart, la taille adulte. Leur tissu adipeux, bien qu'encore assez transparent, renferme manifestement des réserves, mais peu abondantes. Grâce à ces réserves, particulièrement marquées chez certains individus, quelques pupes peu-

vent être formées, mais après une durée de vie larvaire très augmentée (vingt à vingt-cinq jours au lieu de six). Une ou deux fois la métamorphose put être réalisée jusqu’au bout et aboutir à l’éclosion d’imagos. Cette transformation fut elle-même beaucoup plus lente que sur les milieux à Levure servant de témoins, la métamorphose durant quinze à vingt jours au lieu de cinq à six Jours. Le processus de la métamorphose est d’ailleurs généralement interrompu beaucoup plus tôt, alors que la nymphe est encore toute blanche où même avant que celle-ci puisse être distinguée. Enfin si, parmi les larves qui n’aboutissent pas à la pupe, la plupart meurent au bout de vingt à vingt-cinq jours, certaines sont susceptibles de rester en vie pendant un temps parfois très long, pouvant être égal à dix fois la durée de vie larvaire observée dans les conditions normales de nutrition, c’est-àdire sur Levure et à la même température de 24°, Bien que le développement demeure en somme précaire et inconstant sur les milieux artificiels additionnés de lécithine, ceux-ci se classent néanmoins nettement en tête de tous ceux qui ont été expérimentés.

Il serait intéressant de savoir si cette action si favorable de la lécithine tient à l’état physique particulier dans lequel se trouve cette substance où à sa constitution chimique. Je crois que les deux points de vue sont également à retenir. D'une part, en effet, la lécithine du jaune d’œuf contient une proportion élevée d’acide stéarique et nous avons vu comment cet acide paraissait, de tous les corps gras essayés, être celui que les larves assimilent et utilisent le mieux. D'autre part la lécithine se présente, dans les milieux artificiels, sous forme de fins granules en suspension, que les cellules intestinales happent et retiennent au passage. L'intestin des larves élevées sur ces milieux, qui par eux-mêmes sont à peine colorés, devient d’une belle teinte jaune, par suite de l’arrêt et de l'accumulation des grains de lécithine sur la face externe des cellules.

Il semble donc bien que les milieux à lécithine se présentent sous un état physique meilleur que les milieux ne renfermant que des substances solubles. Une nourriture exclusivement liquide peut vraisemblablement entraîner à la longue des phénomènes d’irritation ou même de paralysie intestinale. La question reste à étudier. Je peux seulement dire que lPaddition à mes milieux

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de poudres inertes n’a pas paru en améliorer le rendement d’une façon quelconque. C’est pourquoi je pense que la lécithine intervient aussi en grande partie par sa composition chimique.

L'influence bienfaisante de la lécithine ne s'exerce pas que sur les larves en voie de développement. Les Mouches adultes vivent, en effet, beaucoup plus longtemps sur les milieux à lécithine que sur tous les autres milieux artificiels et leur ponte est aussi infiniment plus abondante et plus prolongée. Sur tous les autres milieux artificiels, la ponte s’arrête plus où moins rapidement, en général au bout de deux à six jours, avec production d’œufs avortés, arrêtés en cours du développement embryonnaire. On peut, au contraire, transporter des Mouches pendant plus d’un mois, sur les milieux lécithinés sans que la ponte cesse. Les œufs avortés y squt exceptionnels.

7 Action des nucléoprotéides.

un coup d’œil d'ensemble sur les résultats des expériences qui précèdent, nous constatons non seulement que de tous les aliments énergétiques fournis, seuls la lécithine et, dans une moindre mesure, l'acide stéarique ou la tristéarine, exercent sur le développement larvaire une influence appréciable, mais que, même dans ces conditions, ce développement reste très lent, n’aboutit qu'à une accumulation très insuffisante de réserves, n’est suivi de métamorphose que dans des cas exceptionnels et ne permet jamais l’obtention de Mouches capables de vivre et de se reproduire. La variété mème des hydrates de carbone ou graisses utilisés et la similitude des résultats imposent la conviction que ce n’est pas tant sur ces éléments que porte l'insuffisance alimentaire que sur la nature des protéiques fournis. Aussi

Si maintenant nous Jetons