LE

est-ce dans cette direction que j'ai orienté ensuite mes investigations.

A vrai dire, je n'ai fait dans ce sens que quelques recherches préliminaires destinées à orienter les expériences ultérieures. La composition du protéique employé dans les milieux artificiels peut, en effet, différer à bien des points de vue de celle des albuminoïdes de la Levure. Cette différence peut notamment porter sur Ja nature des acides amidés qui entrent dans leur constitution, Or, pas plus que pour la Levure, il n’a été établi une analyse

exacte des acides amidés entrant dans la constitution de la peptone Chapoteaut (1).

À moins d'employer au hasard tel ou tel acide amidé et de tomber fortuitement sur le corps indispensable, il eut été nécessaire d'étudier exactement les produits d'hydrolyse de la peptone et de la Levure pour établir la différence entre les deux produits à ce point de vue. Mais je ne disposais pas du matériel nécessaire pour effectuer une semblable recherche qui aurait d’ailleurs risqué de m'entraîner fort loin et peut-être sans grand résultat pour la question qui m’intéressait.

Aussi ai-je commencé par étudier l'influence de substances dont la peptone est dépourvue et qui, par contre, se trouvent en grande quantité dans la Levure, je veux dire des nucléoprotéides. Pour cela j'ai eu recours-à un produit qui se trouve dans le commerce et qui est précisément extrait de la Levure : la nucléine de levure. Malheureusement cette substance est insoluble dans l'eau. On peut bien en obtenir des solutions dans des alcalis dilués, mais celles-ci sont précipitées dès qu’on les met au contact des milieux artificiels qui doivent, nous l’avons vu, être de réaction acide. Le moyen que j'ai utilisé a consisté à broyer longuement la nucléine en poudre dans une portion de milieu nutritif, puis à l'incorporer à l’ensemble de ce milieu. La nucléine se trouve alors en fine suspension que lon stabilise au moyen de coton hydrophile. Je pense que, dans ces conditions, une partie au moins de cette substance a dû être ingérée par les larves, mais il subsiste quelques doutes sur la réalité de cette absorption.

Malgré de très nombreux essais, je n'ai Jamais constaté, en effet, que l'addition de nucléine augmentät en rien la valeur nutritive des milieux artificiels et ce résultat me parait au moins suprenant. Cependant en examinant au microscope des larves élevées sur ce milieu et immobilisées par le compresseur, J'ai nettement vu, dans leur contenu intestinal, des particules solides qui ne pouvaient être que des grains de nucléine.

Cette inefficacité de la nucléine est demeurée la même, que cette substance ait été ajoutée à des milieux ne renfermant que de la peptone ou de la peptone-glucose ou de la peptone-lécithine ou de la peptone-glucose-lécithine.

(1) J'ai beaucoup regretté depuis de ne pas avoir utilisé la peptone de Witte dont les produits d’hydrolyse ont été bien étudiés par P. À. Levenxe et D. D, VAN SLYKE:

208 | E. GUYÉNOT

En raison des conditions d'emploi de la nucléine, Je m'abstiens de formuler des conclusions fermes à son sujet.

8° Action des substances extractives. — Une autre cause d'insuffisance de la peptone, en tant qu’aliment protéique, pourrait tenir au manque de substances extractives ou de certaines de ces substances. On sait, en effet, que ces extractifs jouent un rôle incontestable dans la nutrition. Les essais de culture en milieu artificiel de certains Microbes, tels que le Bacille de la tuberculose, ont montré la nécessité d'introduire dans la constitution de ces milieux des éléments tels que la créatinine et la sarcosine. Dans leurs recherches sur la culture du Bacille de la tuberculose, A. Deuizze, A. Mayer, G. Scaærrer et E. TERROINE (16) ont montré que le développement du Bacille, très pauvre sur peptone de Witte, moyen sur peptone Chapoteaut, assez riche sur peptone de viande de bœuf, devenait excellent si, à ces trois peptones, on ajoutait du bouillon. C’est du reste la différence très remarquable que l’on observe, au point de vue de l'inteusité de développement et de lactivité biochimique de la plupart des microbes, entre les cultures en eau peptonée et les cultures en bouillon.

Pour rechercher l’action de ces substances extractives, j'ai préparé un bouillon de viande de bœuf suivant la technique classiquement utilisée en bactériologie :

500 grammes de viande choisie et bien dégraissée sont hachés, puis mis à macérer dans un litre d’eau pendant 24 heures. Le mélange, constamment agité, est ensuite chauffé et porté à l’ébullition pendant 10 minutes. Le produit est filtré à chaud, sur un linge, puis sur papier Chardin mouillé, de façon à retenir les graisses,

J'ai alors essayé les milieux suivants :

PEPIONE RNA PSE 1 P. 100 1 P. 100 Glicose ER I P. 100 1 P. 100 Bouillon PRES 100 Cc° »

Pause ee » 100 cc?

Sels minéraux & 197 ou cendres de levure : dose normale

Voici quels sont les résultats de cet essai : 19 Sur milieu sans bouillon, les larves s'accroissent pendant , = à ? , are 1 re a1c a & ‘hÇ a1o

les 7 à 5 premiers Jours, mails elles restent maigres el transpa-

rentes. Quelques-unes atteignent 2 millimètres, mais ne tardent pas à devenir immobiles et à mourir. Toutes sont mortes du quinzième au vingtième Jour.

29 Sur le même milieu à base de bouillon, les résultats sont nettement améliorés. Les larves mesurent 2 millimètres dès le huitième Jour, sont alors actives, mais transparentes. Elles atteignent 3 mm. 9 à 4 mm. 5 le quatorzième jour, du moins certainues d’entre elles. Sur 12 essais, on observe la formation de pupes dans trois tubes, à partir du douzième jour. On note, en effet, 19 pupes formées du dix-huitième au vingtième jour en D. A. 710; pupes les dix-neuvième et vingtième jours en D. A. 721 enfin 16 pupes du quinzième au vingtième jour en D. A. 726. Les larves qui ne se transforment pas en pupes meurent du quinzième au vingt-cinquième jour.

Les pupes formées n'évoluent pas; elles sont petites, à peine colorées, se dessèchent rapidement et meurent. Cependant une pupe de D. À. 726, formée le quinzième jour, donna naissance 5 jours plus tard à une Mouche mâle, petite, malformée, transparente, pouvant à peine remuer qui mourut peu après son éclosion.

La comparaison des résultats montre que le bouillon, même en l’absence de graisses, exerce une action favorisante indéniable, qui est presque de même ordre que celle déterminée par l’addition de lécithine.

J'avais été naturellement amené à rechercher si l'utilisation combinée de lécithine et de bouillon ne donnerait pas des résultats supérieurs.

Malheureusement ces essais furent interrompus accidentellement et, ayant eu ensuite l'attention attirée dans une autre direction, je n'ai pu les recommencer que beaucoup plus tard et lon verra qu'ils m'ont donné des résultats absolument contradictoires.

D’autres expériences ont été effectuées avec une solution concentrée d'extrait de Liebig dégraissé, dont j'ajoutais à différents tubes contenant 10 centimètres cubes de milieu artificiel, 1, 2, 1268110, 19,20 90 1ethboïgduttes.

Cet extrait s’est montré nettement toxique pour les larves et l’action a été d'autant plus marquée que la dose était plus grande. L'addition de 1 à > gouttes d'extrait donne des résultats comparables à ceux des témoins, mais à partir de cinq gouttes

10 E. GUYÉNOT

on observe une mortalité rapide des larves et un retard net de la croissance. A la dose de 50 gouttes, toutes les larves sont tuées

en moins de dix Jours.

CONCLUSION DE GETTE PREMIÈRE SÉRIE D'Essais.— Malgré le très grand nombre des essais effectués pour la constitution d’un milieu artificiel par voie synthétique, j'ai en somme échoué dans cette tentative. Sans doute j'ai pu reconnaître que, dans Îles conditions de nutrition utilisées, certaines substances étaient nuisibles, d’autres indifférentes, quelques-unes utiles, mais dans aucun cas je n'ai pu obtenir un milieu capable d'assurer le développement régulier des larves, l'élaboration des réserves graisseuses en quantité suffisante, ni surtout l’accomplissement normal des processus de métamorphose aboutissant à des adultes bien constitués.

A vrai dire, je suis loin d’avoir épuisé toutes les combinaisons et tous les essais de substances possibles, mais je me suis rendu compte que je pourrais continuer pendant longtemps ces tentatives, sans être assuré d’arriver à un résultat positif. Il faut, en effet, remarquer que, pour donner des résultats valables, Pessai de chaque milieu doit être fait non sur un tube d'élevage, mais sur un grand nombre, en raison des écarts parfois considérables que l’on relève et sur lesquels je reviendrai. Or, par suite de la lenteur du développement, chaque essai nécessite une observation continue pendant un mois environ. Aussi ai-je mis plus de deux ans à réaliser ces expériences qui, si elles apparaissent pauvres en résultats, ont cependant nécessité un travail considérable.

Au cours de ces recherches, j'ai cependant pu faire sur le comportement des Drosophiles certaines observations dont quelques-unes ont une portée générale.

Croissance larvaire et métamorphose. — Un fait uniformément observé est la dissociation qui existe, dans ces conditions de nutrition artificielle, entre le développement larvaire et le phénomène de métamorphose. En effet, tandis que, sur Levure, les témoins arrivent à la pupe en six jours et donnent la Mouche en onze, sur beaucoup de milieux artificiels, les larves s’accroissent infiniment plus lentement, atteignent cependant la tulle adulte et peuvent même vivre un temps très considérable, pouvant égaler dix fois la période larvaire normale, mais

RECHERCHES SUR LA VIE ASEPTIQUE D'UN ORGANISME ga

sans se métamorphoser. La différence essentielle que l’on observe entre ces larves et les larves témoins réside uniquement dans la constitution de leur tissu adipeux. Les larves sur Levure ont un tissu bourré de réserves et se métamorphosent rapidement ; les larves élevées sur milieux artificiels ont un tissu adipeux squelettique, vide de réserves et ne se métamorphosent pas. Dans les cas exceptionnels où cette métamorphose commence, quitte à s’arrêter à un stade plus ou moins précoce, on constate nettement que cela se produit seulement pour les larves qui, pour une raison ou une autre, ont emmagasiné dans leur tissu adipeux quelques réserves d’ailleurs peu abondantes. L’élaboraüon de réserves qualitativement et quantitativement suffisantes est donc l’une des conditions fondamentales de la métamorphose et l'aboutissant d’une nutrition larvaire normale.

Pupaison el métamorphose proprement dite. — 11 faut aussi noter qu'il existe une différence très grande entre les conditions de formation de Îa pupe et celles de la métamorphose proprement dite. Celle-ci n’est réalisable que dans le cas de larves munies de réserves abondantes. Celle-là peut, au contraire, s’observer fréquemment sur des larves dépourvues de réserves, n'ayant même pas atteint la taille adulte. On voit notamment des larves se transformer en pupes alors qu’elles n’ont que les deux tiers ou les trois quarts de la taille définitive. Cette pupaison précoce, non suivie de métamorphose, s’est montrée conditionnée essentiellement par l’état hygrométrique du milieu. Telles larves qui resteraient 30 jours sans puper dans un milieu très humide, puperont beaucoup plus tôt si la surface du coton est sèche, ou si, par hasard, elles se sont élevées le long des parois du tube de culture et ont été ainsi entraïnées dans une zone plus sèche. Fréquemment d’ailleurs, on observe, dans ces conditions, à côté de pupes très petites mais bien conformées, des pseudo-pupes dont la surface se dessèche et brunit comme celle des vraies pupes, mais qui conservent la forme allongée et parfois recourbée des larves dont elles proviennent.

Parésie observée sur les larves élevées en milieu artificiel. — Un troisième fait intéressant à signaler est Pétat pathologique par lequel passent toutes les larves avant de mourir, quelle que

212 E. GUYÉNOT

soit la constitution des milieux artificiels dont elles se sont nourries. Après une période de grande activité, où on les voit BSphRer par d’incessants mouvements du pharynx le fluide nourricier, tôt ou tard on observe que leurs mouvements se ralentissent et se raréfient ; les larves ne se déplacent plus que mollement à la surface du milieu, opèrent de temps en temps quelques mouvements de succion, puis tombent dans un état d’immobilité qui devient de plus en plus fréquent et prolongé. Finalement, elles restent immobiles pendant des heures, figées dans n'importe quelle position. Le vaisseau dorsal présente des contractions très lentes séparées par des pauses parfois excessivement longues ; les mouvements de l’intestin sont également de plus en plus espacés. Cet état aboutit parfois très vite à la mort; parfois aussi il peut se prolonger pendant 20 jours et plus. J’ai vainement essayé de transporter, sur un bon milieu nutritif (Levure), ces larves, mème au début de leur période d’immobilité.: Toutes sont mortes, qu’elles aient ou non absorbé de la Levure. Au contraire, des larves placées sur un milieu nutritif insuffisant et transportées à temps sur de la Levure alors qu'elles n’ont que 1 mm. 5 ou 2 millimètres et sont très actives, s'y nourrissent, ne tardent pas à élaborer les réserves nécessaires et à se métamorphoser.

Ces phénomènes incurables de parésie sont à rapprocher dans une certaine mesure de ceux qui ont été observés chez les animaux supérieurs, nourris avec une alimentation artificielle ou dépourvue de certains principes encore mal connus. Je reviendrai sur cette question qui touche de près à la pathologie du béribéri dans un chapitre ultérieur.

Différences individuelles et sélection. — Une autre observation très importante qui résulte de ces expériences à trait à la diversité du comportement d'individus aussi semblables que possible comme origine et placés dans des conditions en apparence, au moins, identiques. Sur les bons milieux nutritifs ces différences s'observent aussi ; certaines larves s’accroissent un peu plus vite que d’autres, aboutissent à des pupes et à des Mouches un peu plus grosses où un peu plus petites, mais ces différences sont peu marquées. Sur les milieux artificiels qui sont. des milieux pauvres, défavorables, ces différences individuelles apparaissent amplifiées et souvent considérables.

Déjà des divergences de cet ordre m’étaient apparues lors de mes recherches sur les Mouches de la viande; on en observe de semblables dans les comptes rendus des expériences de Bogpanow et plus récemment de Worzman. Ainsi que je l’ai montré, les larves de la viande dans les conditions normales se nourrissent des produits de la digestion opérée par les Microbes et ne produisent pas de fermenñts digestifs. Que certaines d’entre elles en secrètent quelque peu, c’est ce qui est assez vraisemblable, mais cette propriété n’est, dans les conditions normales de leur développement, d'aucune utilité et n’est décelée par rien. Bocpaxow et WoLzman ont confirmé ces vues, en montrant que, débarrassées de tout Microbe et placées sur de la viande stérilisée, ces larves sont très généralement incapables de se nourrir. Cependant on observe que quelques rares larves s’accroissent quand même, quoique très lentement, qu’elles liquéfient la gélatine, ce qui est la preuve de leur activité digestive secrétoire. Tandis que les autres meurent d’inanition, ces larves à ferment deviennent de plus en plus fortes, se nourrissent de mieux en mieux et, après avoir traversé la crise du début, finissent tant bien que mal par réaliser leur métamorphose.

De même, dans tous mes élevages sur milieux artificiels, j'ai observé des différences considérables. Toutes les larves cependant proviennent toujours d'œufs pondus par des Mouches sœurs, de même âge; ces œufs ne présentent entre leurs dates de ponte que des différences de 48 heures au plus. Néanmoins on observe que, dans le même tube, certaines larves se développent à peine et meurent au bout de 6 jours par exemple, tandis que d'autres atteignent une taille double ou triple et vivent 10, 15, 20, 30 jours et parfois beaucoup plus. Les unes ont leur tissu adipeux absolument vide, d’autres y emmagasinent quelques rares réserves. La majorité meurent à l’état de larves, quelques individus arrivent cependant à puper ou plus exceptionnellement encore aboutissent à l’imago.

Ces différences sont d'autant plus intéressantes à étudier qu'elles sont comme l’image particulièrement nette de ce qui se passe lorsque les individus d’une espèce, à la suite d’un changement de milieu, se trouvent dans des conditions défavorables et risquent d'être anéantis. C’est alors qu'intervient cette sélection qui est la résultante du fait que tandis qu’un grand nombre d’indi-

21% EH. GUYÉNOT

vidus meurent, quelques-uns subsistent et seront peut-être capables de maintenir la continuité de la lignée, fut-ce au prix d’un changement morphologique ou physiologique des individus de cette lignée.

Dans le cas présent, les causes pour lesquelles tel individu subsiste, là où les autres meurent, apparaissent comme extrêmement complexes. Quelques-unes peuvent cependant être notées. J'ai déjà signalé que quand, par oubli, des cadavres de Mouches ont été laissés dans le milieu, les larves qui s’en nourrissent deviennent plus grosses que les autres et parfois se métamorphosent entièrement, Il y a là une cause d’erreur facile à éviter. Une autre condition importante est le nombre des larves. Alors que dans les tubes où la ponte a été peu abondante, les quelques larves écloses se développent fort mal, dans les tubes de même milieu où la ponte a été, par hasard, où en raison du plus grand nombre de femelles, plus abondante, les larves très nombreuses évoluent mieux et plus rapidement. Cette influence du nombre des larves m'a paru, après maintes observations, se ramener à une question d'humidité et de facilité dans l'acquisition de la nourriture. Celle-ci se trouve, on le sait, supportée par du coton hydrophile, dont la surface est parfois assez sèche. Les larves, quand elles sont peu nombreuses, errent à la surface de ce coton mal imbibé et ne peuvent que difficilement absorber la nourriture. Si, dès le début du développement, avec une baguette de verre, on presse sur la surface du coton pour lhumidifier, le développement se fait bien. Si on n'intervient qu'au bout de quelques jours, les larves, qui n'ont pu s’accroître qu'à peine, sont en quelque sorte handicapées par leurs premiers jours de nutrition insuffisante et restent arriérées. Or, quand elles sont nombreuses, les larves pénètrent plus facilement entre le coton el la paroi du tube jusqu’au niveau du milieu nutritif. Une première vient qui s'insinue, par hasard, ou par suite de son chimiotropisme positif, entre le coton et la paroi, une deuxième, puis une troisième s'engagent de même dans le même chemin et l'approfondissent, on voit alors les larves pénétrer de plus en plus profondément, creuser de véritables galeries entre le coton et la paroi. Lorsqu'une larve est ainsi arrivée à un endroit où le milieu nutritif est facilement accessible, on ne tarde pas à voir en ce point 20, 30 larves rangées parallèlement, serrées les

unes contre les autres, retenues là parce que la nourriture y est abondante.

L'examen répété de milliers de tubes d’élevages m'a ainsi permis de constater que les larves qui pénètrent profondément entre le coton et la paroï du tube de verre, jusqu’à être parfois emprisonnées dans une logette renfermant la bulle d'air qu’elles ont entraînée avec elles, se développent plus vite que celles qui sont restées au voisinage de la surface. Leur devenir dépend alors de la facilité plus ou moins grande qu’elles auront au bout de quelques Jours à regagner la surface, sans quoi elles meurent finalement asphyxiées. Cette observation est à rapprocher des constatations faites par WEINLaAND sur des larves non aseptiques. Cet auteur a en effet constaté que la production des graisses se faisait mieux en milieu anaérobie qu’en présence de loxygène, mais l'interprétation de ce fait reste discutable en raison de la part que les bactéries peuvent prendre dans sa réalisation.

Le sort d’un individu se trouve ainsi dépendre de multiples conditions fortuites : sécheresse, humidité, proximité de la nourriture — surtout pendant ses premiers jours d’existence — nombre des larves, vie en surface ou en profondeur. Autant de conditions, réalisées par hasard, d’où dépendent la mort plus ou moins précoce ou la vie de la larve envisagée.

A côté de ces différences liées à des conditions extérieures diverses, il arrive que lon note des différences individuelles qui ne paraissent pouvoir être rapportées à aucune cause extérieure et qui s’observent même si les larves proviennent toutes de la même femelle. Il est certain qu'il y a des différences constitutionnelles souvent minimes, pouvant influer sur tout l’avenir de l'organisme. Une des plus faciles à imaginer est la plus ou moins grande quantité de réserves contenues dans l'œuf. Nous avons vu que, sur les milieux pauvres, les Mouches pondent des œufs moins riches en inclusions, ainsi que le montre l'examen direct, et qui finissent par avorter. On conçoit qu'entre cet état et Pétat normal peuvent se rencontrer toutes sortes d’intermédiaires.

Je tiens à noter spécialement l'influence très grande des conditions externes, pendant les premiers stades de vie larvaire, qui retentit d’une façon définitive sur la résistance, la vitalité de lindividu, même lorsque celui-ci se trouve ensuite placé dans des conditions plus favorables,

216 E. GUYÉNOT

En résumé, il ressort de ces constatations que les chances de salut, même limité à quelques individus de la lignée placée dans des conditions nouvelles défavorables, résident tant dans leurs différences constitutionnelles congénitales que dans des variations souvent minimes, et réalisées par hasard, des conditions extérieures. Conditions extérieures et constitutions réagissent d’ailleurs réciproquement les unes sur les autres. Ces expériences permettent ainsi de saisir un des aspects les plus intéressants de la sélection. À côté de la sélection darwinienne, basée sur les particularités utiles, il est une autre sélection, peut-être plus importante encore, mais désordonnée, qui résulte uniquement des conditions de vie réalisées au hasard, c’est-à-dire dépendant d’une série de causes dont chacune ne présente aucun rapport nécessaire avec l'effet produit.

ESSAIS DE CONSTITUTION D'UN MILIEU NUTRITIF ARTIFICIEL PAR VOIE ANALYTIQUE

Toutes les expériences précédentes, outre les résultats particuliers qu'elles comportent, ont montré combien les divers milleux arüliciels utilisés diffèrent profondément, au point de vue de leur valeur alimentaire pour les Drosophiles, de la Levure de boulangerie employée comme aliment témoin.

L'insuccès de mes premières tentatives me conduisit à rechercher quelles pouvaient être la ou les substances contenues dans la Levure et qui se trouvaient être indispensables à la nutrition des Mouches. Après étude, j'écartai tout d’abord l'hypothèse qu'il put s'agir de quelque élément minéral propre à la Levure et y existant même en très petite quantité. J'avais en effet mis dans mes milieux tous les éléments minéraux, acides ou bases, décelés par les analyses des cendres de Levure, etexistant en quantité notable. D'autre part, j'avais préparé avec grand soin des cendres de levure que J'avais utilisées, après traitement nécessaire pour Îles dissoudre, pour la constitution de certains milieux artificiels au

lieu des solutions minérales fabriquées de toutes pièces que j'employais habituellement. Cette modification ne détermina aucun changement appréciable dans le comportement des Mouches ni des larves.

Il ne me parut pas non plus vraisemblable que la substance indispensable fut un hydrate de carbone. On sait que la Levure contient du glycogène mais, outre que l'addition de ce composé, de même que celle de glucose, n'avait pas modifié sensiblement la valeur des milieux artificiels, la Levure que j’utilisais avait souvent subi, intentionnellement, un début d’autolyse, avec destruction intracellulaire très rapide du glycogène accumulé. Or cette Levure, très appauvrie en hydrates de carbone, se montra un milieu excellent, aussi bon que de la Levure absolument fraiche et n'ayant pas subi d’autophagie.

Les recherches paraissaient donc devoir être limitées aux composés albuminoïdes, albumines, acides amidés, corps puriques, extractifs, etc., où aux corps gras.

Je commençai par étudier l’action des graisses de la Levure pour la raison suivante : les larves, placées sur Levure, produisent et accumulent des quantités de graisse considérables. La Levure en contient, cela est certain, mais 1l y a, semble-t-il, une disproportion entre la quantité totale de graisse ingérée par une larve, sous forme de graisse de Levure, et la quantité énorme de graisse, mise en réserve dans son tissu adipeux. J'avais d'autre part constaté que même si des larves sont placées sur des milieux artificiels contenant une graisse et absorbent cette graisse, ainsi que cela a pu être constaté directement dans certains cas, ces larves ne réussissent à en mettre en réserve qu’une quantité insignifiante et, en tout cas, natteignent pas le terme de leur développement. Ces remarques, ainsi que beaucoup d’autres, m’avaient conduit à penser que les larves devaient réaliser facilement la synthèse des graisses aux dépens de substances contenues dans la Levure, et qui n'étaient ni des graisses, ni des hydrates de carbone. Je fus ainsi amené, pour essayer d’éclaireir cette question, à élever des larves sur de la Levure ayant subi un dégraissage prolongé et à rechercher si ce milieu serait encore apte à la nutrition des Drosophiles.

Levure dégraissée et graisses de levure.— La Levure contient une quantité assez élevée de graisse. Quelques dosages effectués

218 E. GUYÉNOT

après saponification totale par la soude, libération des acides gras par l’acide chlorhydrique, traitement par l’éther absolu, puis par l’éther de pétrole m'ont fourni une teneur de 1 gr. 765 d'acides gras pour 100 grammes de Levure sèche, correspondant à environ 400 grammes de Levure fraîche (75 p. 100 d’eau). Ces acides gras ont un point de fusion assez élevé, sont solides à la température ordinaire, mais fusibles à 55°.

L’extraction totale de la graisse de Levure est une opération à peu près impossible, si l’on ne détruit pas au préalable par la soude la substance protoplasmique elle-même. Un semblable procédé ne pouvait convenir pour lexpérience projetée. D'autre part, il est certain qu’une simple macération dans l’éther, même prolongée pendant des mois, serait incapable d'opérer une extraction suffisante des graisses. Pour faciliter celle-ci, j’essayai de broyer, au préalable, les cellules de Levure, au moyen du broyeur à billes de verre de Borrez (‘). Au bout de 36 heures, la Levure en suspension dans l'alcool absolu était parfaitement broyéeet ne montrait plus, à l'examen microscopique, de cellules intactes.

Avant de rechercher si la Levure ainsi broyée, puis dégraissée, avait encore la même valeur nutritive, j'essayai tout d’abord la Levure simplement broyée, non dégraissée. Pour cela l'alcool dans lequel elle se trouvait en suspension fut évaporé. La masse résiduelle fut additionnée de 2/3 d’eau, comme je faisais d’habitude, répartie sur coton, stérilisée à 120° et essayée. Or sur ce milieu, de consistance pâteuse, les larves, au sortir de l'œuf, errèrent à la surface sans en pouvoir absorber une parcelle et toutes moururent d'inanition au bout de deux ou trois jours. Seul l’état physique du milieu pouvait être incriminé. Il était évident que la Levure broyée, puis dégraissée, ne donnerait pas de renseignements plus intéressants.

J’eus alors recours au dégraissage de la Levure non broyée au moyen d’un appareil à extraction par l’alcool bouillant.

De la Levure ayant déjà séjourné quatre semaines dans l'alcool fut épuisée dans l’appareil à extraction par l'alcool à ro0° bouillant pendant 10 heures. La masse résiduelle fortement décolorée fut ensuite séchée, pilée, humectée d’eau, puis soumise après séchage à une nouvelle extraction pendant Q heures. La Levure extraite

() M. Borne à bien voulu mettre à ma disposition le broyeur de son Laboratoire de l'institut Pasteur; je lui adresse tous mes remerciements.

fut séchée, puis mise en suspension dans l’éther anhydre pendant 20 heures. Elle fut enfin lavée à l’alcool absolu, à l'acétone et desséchée à 50°,

Le liquide alcoolique ayant servi à l'extraction était, à chaud, transparent, d’une belle couleur jaune d’or. Par refroidissement, il se précipitait un produit blanchâtre, soluble à nouveau par chauffage et qui se déposait au fond du ballon.

La Levure dégraissée et séchée fut diluée dans de l’eau, dans la proportion usuelle de 2 parties pour 3 d’eau, puis additionnée de coton et stérilisée en tubes. Malgré le traitement subi, cette Levure restait en suspension dans l’eau et formait une émulsion tout à fait comparable à celle que l’on obtient avec de la Levure ordinaire.

Les résultats observés sur ce milieu sont les suivants : Les larves, très actives pendant les premiers jours, s’accroissent beaucoup plus lentement que sur les milieux témoins à Levure ordinaire. La taille des larves n'est en effet que de 1 mm. 5 le troisième jour, de 2 mm. 5 à 3 millimètres le cinquième jour. Vers le dixième jour, elles mesurent 2 mm. 5, 4 mm. 5 et même 4 millimètres. Elles sont encore actives, mais transparentes et leur tissu adipeux reste dépourvu de réserves. Quelques larves atteignent 4 mm. 5; dans 1 tube sur 8 apparurent même quelques pupes, petites, à le quatorzième jour, puis 9 autres un peu plus tard. Ces pupes moururent sauf une qui donna naissance à une Mouche très petite, éclose le dix-neuvième jour. Une autre pupe laissait voir la Mouche bien formée à son intérieur, mais celle-ci mourut avant d’éclore. Cette formation de pupes resta exceptionnelle. Dans les autres élevages, toutes les larves moururent du quinzième au dix-neuvième jour, après avoir présenté les phénomènes, que nous connaissons, de diminution progressive de l’activité et d'inertie prolongée précédant la mort.

La valeur nutritive de cette Levure dégraissée peut être, d’après les résultats, comparée à celle des milieux artificiels à peptone et lécithine que j'avais déjà employés. Il est donc évident que là où les substances indispensables avaient passé dans l'extrait alcoolique, la levure extraite s’en trouvant dépourvue ou à peu près.

Quelles étaient ces substances ?

Extrait alcoolique dé levure. — W eut été très intéressant

E. GUYÉNOT

ro Le] S

d'étudier précisément le liquide d'extraction de cette Levure devenue insuffisante. Malheureusement il fut perdu par accident.

Un nouvel extrait fut préparé de la manière suivante : 100 grammes de Levure furent épuisés par l'alcool absolu bouillant, dans l’appareil à extraction pendant 16 heures. L’extrait, de couleur jaune d’or, présentait par refroidissement un dépôt blanc jaunâtre, constitué en majeure partie par un corps gras. On évapora l'extrait total et on reprit le résidu par l'alcool à 70° froid. Celui-ci put dissoudre une bonne partie de l'extrait et se colora en jaune d'or. Il resta une partie blanc-jaunâtre insoluble, que l’on sépara par filtration et qui se montra constituée en presque totalité par des corps gras.

La liqueur alcoolique fut évaporée et le résidu fut repris par l’eau chaude, puis filtré sur papier Chardin mouillé. Ce résidu étant à peu près intégralement soluble dans l’eau, il ne resta que très peu de choses sur le filtre. Il est bien évident qu'un semblable extrait ne contenait plus que des traces de graisses.

Un milieu fut alors préparé, contenant 2 p. 100 de peptone, les sels minéraux usuels et 25 centimètres cubes de cet extrait de levure.

Sur ce milieu (milieu sans corps gras, mais avec extrait de levure) les résultats sont restés très médiocres : les larves atteignirent la taille 1/4, le quatrième jour, puis s’accrurent plus lentement atteignant 1/2 vers le huitième jour et 3/4 vers le quinzième ou seizième jour. Dès le dix-huitième jour, on nota des cadavres, presque toutes les larves étaient mortes le vingtcinquième jour. Les larves restèrent maigres et transparentes, leur tissu adipeux étant dépourvu de réserves. Dans aucun cas, il n’y eut formation de pupes.

Si lon rapproche ce résultat de celui de l'expérience avec levure dégraissée, il semble qu'il faille uniquement mettre en cause les graisses de Levure.

En effet :

1° La levure dégraissée est insuffisante.

2° La substance utile passe dans l'extrait alcoolique total.

3° Cet extrait, privé de graisse, est insuffisant, d’où l’on pourrait, semble-t1l, conclure que la substance indispensable n’est autre que la graisse de Levure.

Cependant une telle conclusion serait certainement erronée :

J'avais en effet effectué, entre temps, des expériences avec un milieu artificiel constitué par de la peptone et des sels minéraux, avec addition de ces graisses de Levure seules et je l'avais étudié comparativement avec le milieu peptone-lécithine. L'addition de graisses de Levure ne se montra pas supérieure à l’addition de lécithine.

Je fus ainsi conduit à cette nouvelle conclusion : il faut ajouter au milieu peptone-sels non seulement un corps gras (graisse de levure ou lécithine) mais aussi l'extrait alcoolique dégraissé qui, lui, contient la substance indispensable.

Je constituai alors un nouveau milieu (8 66) ainsi constitué :

PODLONE NET EN PRE 2 p. 100 BéCATOIDÉ REA RCRNC Er 0,90 p. 100 Extrattdedenure nee 50 cm?

Se RDINETAUS RS NUE Q.5.

AUSSI EEE p. 100 parties

Sur ce milieu (fig. 8)la ponte fut abondante, comme sur tous les milieux à lécithine ; les larves s’accrurent rapidement atteignant la taille 1/3 à 1/2 vers le quatrième jour, 3/4 le sixième et 1/1 le septüème jour. Dans tous les tubes apparurent des pupes dès le septième, neuvième, dixième ou onzième jour. Il s’en forma de 12 à 50 (exactement 12, 30, 25, 46,50). Un certain nombre de ces pupes moururent sans évoluer, mais dans tous les tubes quelques-unes donnèrent des Mouches dont l’éclosion survint du douzième au dix-septième jour. On obtint exactement pour 5 tubes : 7 Mouches, 30 Mouches, 6 Mouches, 15 Mouches, {4 Mouches au bout de 18 jours, date où lPobservation fut interrompue et où de nombreuses pupes encore vivantes paraissaient prêtes à éclore.

Cette expérience fut faite en prenant pour témoin un milieu artificiel composé de peptone, lécithine et sels minéraux, mais sans extrait alcoolique dégraissé de Levure. Ce milieu témoin donna les résultats connus (mort de la plupart des larves, formation de quelques pupes très rares et tardives, pas de Mouches).

Bien que sur les deux milieux, les larves aient disposé de lécithine, celles vivant sur le témoin n’emmagasinèrent donc que des quantités infimes de graisse dans leur tissu adipeux et restèrent transparentes. Au contraire, celles élevées sur milieu à extrait de Levure dégraissé et lécithine présentèrent un corps

222 E. GUYÉNOT

adipeux de plus en plus gros, devenant opaque et dont les cellules étaient bourrées d’inclusions graisseuses.

En somme, pour la première fois, j’obtenais un milieu nutritif, permettant le développement complet de la majorité des individus avec cependant une mortalité et une durée de développement évidemment plus grandes que sur Levure témoin (pupes en 7 à 12 jours au lieu de 6 et Mouches en 12 à 16 jours au lieu de 11).

Ces expériences montrent nettement qu'un milieu contenant de la peptone, de la lécithine, et des sels minéraux (ce qui est

Témoins (Levure)

Rnlone- lécilhine exbailz feure

." Rrtone Lécithine

1 2134 1516 ? 4 9 10 1 11 13 LA 18 de 14-18 49 20 21 22 23 2 2 K 2 18 20

Fig. 8. — Courbes montrant le développement comparé des Drosophiles sur Levure, milieu peptone-lécithine et milieu peptone-lécithine, additionné d'extrait alcoolique dégraissé de Levure.

insuffisant), devient un milieu déjà très convenable si on lui ajoute extrait alcoolique de Levure, privé de ses graisses. Sous l'influence des substances contenues dans ce produit, ou bien les larves réalisent une synthèse des graisses aux dépens de ces substances ou de la peptone, ou bien deviennent capables de tirer de la lécithine un parti qu’elles ne pouvaient en tirer en leur absence. Il y à vraisemblablement les deux choses, puisque Putilisation de la lécithine ressort du fait que l'addition de l'extrait de Levure à un milieu sans lécithine reste inefficace.

Pour terminer, je conclurai que la ou les substances indispensables, telles qu'on peut les extraire du corps de la Levure fraîche sont caractérisés par leur solubilité :

1° dans l’alcool à 100° bouillant,

2° dans l’alcoo! à 70° froid,

3° dans l’eau bouillante,

4° dans l’eau froide.

Ce ne sont pas des graisses ; ce ne sont ni des albumines, ni des peptones (la réaction du biuret est négative); ce ne sont pas des corps réduisant là liqueur de Fehling. Je m’en tiendrai pour le moment à ces premières constatations.

Essai des autolysats de Levure. — Le procédé d’extraction que J'avais employé est long et ne peut être réalisé que sur de petites quantités de Levure à la fois. Comme j'avais besoin d’extrait de Levure en grande quantité, je m'adressai à un autre procédé de solubilisation des constituants de la Levure qui m'a donné des résultats excellents.

On sait que la Levure, sortie de la cuve à fermentation et lavée, ne tarde pas, se trouvant privée d’aliments, à présenter une véritable autodigestion. C'est le phénomène d’autophagie de la Levure consistant en une fermentation suivie de liquéfaction, qui a été étudié par THÉNARD, PASTEUR, SCHUTZENBERGER et DESTREIN, etc., et que l’on rattache actuellement à la catégorie générale des phénomènes d’autolyse.

L'assimilation des cellules de Levure se trouvant brusquement supprimée par la cessation de l’apport alimentaire, les phénomènes de désassimilation, c’est-à-dire de destruction cellulaire Pemportent. [y a d'abord fermentation intense, en même temps que disparaît le glycogène renfermé dans la cellule de Levure. La substance vivante est ensuite progressivement dissoute et détruite. Dans ces transformations interviennent les mêmes agents que dans la vie normale, c’est-à-dire les diastases intra-cellulaires. La Levure se digère elle-même.

Nozrr a indiqué un procédé industriel qui permet d'extraire par autolyse, de la Levure pressée du commerce, un produit qui possède la saveur du bouillon et qui peut remplacer, dans les usages culinaires, les extraits de viande. Pour obtenir cette autolyse, il suffit de délayer dans l’eau la Levure et de la maintenir

bo

24 E. GUYÉNOT

à une température comprise entre 90° et 60°. Dans ces conditions la chaleur s'oppose à la pullulation des germes sans nuire aux fermentations qui produisent lPautolyse. Les matières albuminoïdes de la Levure passent dans l’eau et, si Pon attend un temps suffisant, on constate que le liquide finit par ne plus donner les réactions des peptones. Les albuminoïdes se trouvent alors en majeure partie sous la forme d’acides amidés, d’amides et de bases puriques.

Les travaux déjà anciens de SCHÜTZENBERGER (1874), de Saz- KkoWwSkY (1899-90), de Kossez, de Bücuxer, de GErer et Hazin ont montré que, pendant l’autophagie de la Levure, on voyait prendre naissance de l'alcool, de lacide carbonique, des éthers, puis des bases nucléiques (guanine), des bases hexoniques, des acides amidés : tyrosine, leucine. KurcHer a mis en évidence la présence d’adénine, de lysine, d’arginine, d’acide aspartique. A. Harpex et S. Paixe (1912) ont montré que la glycogénase transformait le glycogène en sucre et que secondairement la zymase dédoublait celui-ci en gaz carbonique et alcool. KuTGHErR et LEHMANx (1903) ont signalé la présence, dans l’autolysat de levure, de choline provenant de la décomposition de la lécithine ; 10 litres de Levure ont fourni 2 gr. 35 de chloraurate de choline, ce qui indique une teneur assez élevée en lécithine. Une étude d'ensemble des constituants de l’autolysat de Levure reste à faire.

Je vais maintenant relater les résultats de trois séries d’expériences faites avec ces autolysats de Levure, employés tels quels ou après certains traitements.

1'e série d'expériences

On dilue, dans un vase flambé, 150 grammes de Levure dans 200 centimètres cubes d’eau distillée bouillie et on maintient le tout pendant quatre jours à 550, Le liquide subit une fermentation intense pendant les premières vingt-quatre heures, puis se colore progressivement en brun en même temps que sa réaction devient nettement acide. Dans le fond du bocal se trouve la Levure incomplètement détruite, dont la membrane est intacte et qui renferme encore, ainsi qu’en témoignent des colorations électives, la majeure partie de ses substances nucléiniques.

On filtre sur papier Chardin pour séparer la partie soluble de la Levure non autolysée. On obtient un liquide brun, trouble, contenant des particules en suspension colloïdale, dont on conserve une partie telle quelle (x 2/0). Une autre partie de cet autolysat est filtrée sur bougie à l’aide du vide. On obtient ainsi un liquide brun, parfaitement clair, et transparent (4 2/1).

Enfin on mélange une troisième portion de l’autolysat opalescent avec une partie équivalente de la Levure non digérée restée sur le premier filtre. Ce mélange constitue le milieu & »/».

On étudie ensuite le développement des Drosophiles sur ces trois milieux, ainsi que sur Levure ordinaire servant de témoin (fig. 9).

Voici les résultats de ces essais :

1° Sur Levure témoin, formation régulière de pupes en cinq à sept Jours et éclosion de Mouches au bout de onze à treize jours.

29 Sur autolysat brut(s 240) le développement se fait très bien, mais avec un léger retard sur les témoins ; il y a formation de pupes en neuf à quatorze jours et naissance de Mouches en seize à dix-huit jours. Un certain nombre de larves meurent sans puper, mais toutes ont des réserves dans leur tissu adipeux. Il y a des pupes dans tous les tubes, mais elles sont plus où moins nombreuses : on en compte suivant les élevages 15 à 20, 4o à 50 ou une centaine. Le nombre des Mouclies varie parallèlement (5, 15, 30 à 4o, 50). Les Mouches nées dans ces conditions sont vigoureuses. Transportées sur Levure, elles y ont donné une deuxième génération abondante. Le retard constaté n’a rien d'étonnant si l’on songe que cet autolysat, obtenu au bout de quatre Jours seulement, correspond à un poids sec très faible par rapport à celui de la Levure normale.

3° Sur autolysat brut + Levure partiellement digérée (4 242), le développement se poursuit très régulièrement. Toutes les larves se transforment en pupes. Celles-ci apparaissent au bout de neuf à onze jours. Les Mouches commencent à naître au bout de quinze à dix-sept jours. Les pupes sont nombreuses (40 à 100) et on obtient un nombre presque identique de Mouches.

Toutes ces Mouches ont donné, sur place, une deuxième génération.

Il est intéressant de noter que sur ce milieu qui contient en somme tous les principes de la Levure, le développement subit un retard de même ordre de grandeur que celui observé sur autolysat brut seul. Ceci paraît être en rapport avec le changement d'état physique et avec les transformations chimiques consécutives à l’autolyse. Cependant ce milieu est d'action plus régulière que l’autolysat seul, en ce sens que la quasi totalité des larves se transforment en pupes et que presque toutes celles-ci évoluent complètement jusqu’à lPimago.

2926 E. GUYÉNOT

4° Sur autolysat filtré (x 247) les choses en vont tout autrement. Sur plusieurs dizaines de larves constatées dans chaque tube, quelques-unes seulement se transforment en pupes (4, 5, 2, 7; 1, à pupes). Ces quelques pupes n'apparaissent qu’au bout de quatorze à seize jours. Dans trois tubes seulement quelques pupes donnent naissance à des Mouches (3, 3, 1) qui naissent du vingt et unième au vingt-cinquième jour. La majorité des larves ne dépassent pas la taille 3/4, mais restent en vie pendant plus de 25 jours.

L’autolysat brut 4 2/0 présentait les quelques caractères sui-

Jemnoins Aulolysat brut < 240

% A lolysr / Lex 241 #

VAL ITA Se COS DAS MANS TUE NCA EDEN CARNET RS

Fig. 9. —Courbes montrant le développement comparé des Drosophiles sur Levure témoin, sur autolysat brut à 240 et sur autolysat filtré à 241.

vants : par addition d’un volume d’alcool absolu, formation d’un précipité blanc, qui, séparé par filtration, s’est montré insoluble dans Peau, mais pouvait y être mis en suspension, constituant alors un liquide opalescent, blanchâtre, ne donnant pas la réaction du biuret, ni celles du glycogène.

La liqueur alcoolique donne, après évaporation, un produit ayant la consistance, l'aspect et l'odeur de Fextrait de Liebig, à peu près entièrement soluble dans l'eau. La liqueur aqueuse obtenue est acide au tournesol, donne un biuret rougeâtre (peptones), n'est pas précipite par ébullition, ni par neutralisation (pas d’acidalbumines), ne réduit pas la liqueur de FenrinG.

2° série d'expériences

On met en autolyse, à 550, 500 grammes de Levure de boulangerie dans 600 grammes d’eau bouillie, pendant cinq jours. On filtre comme précédemment sur papier Chardin et on obtient un autolysat brut, opalescent (æ 251).Cet or est fortement acide ; cette acidité après dosage correspond à 4 gr. 5 de SO‘H2 par litre. Il dodue un biuret rouge sombre. Par nn on obtient un très léger précipité d’acidalbumines.

L’addition de sulfate d’ammoniaque à saturation donne un très léger précipité d’albumoses. Ce liquide ne réduit pas la liqueur de Femrine,

Sur autolysat brut à 251, expérimenté à 230, la ponte est abondante, les larves atteignent les tailles 3/4 et 1/1 du huitième au neuvième Jour. Dès le douzième jour apparaissent des pupes, dont on observe parfois un nombre élevé (4, 20, 18, 157, 8, 10, 39, 28, 40, 10, 12, 10, 14, 15, 1). Pratiquement la presque totalité des larves se transforme en pupes. Les seize, dix-sept et dixhuitième jours éclosent les premières Mouches. Cette éclosion se poursuit jusqu'au vingt-cinquième Jour. Beaucoup de pupes ne donnent pas de Mouches, cependant celles-ci s’observent en nombre déjà important (4, 17, 15, 50, 4, 7, 25, 23, 4o, 8, 8, 5, 10, 9,.1). Laissées sur place ces Mouches vivent encore une vingtaine de jours, parfois davantage et, dans trois tubes, donnent une deuxième génération. La température de l’étuve s'étant trouvée abaissée accidentellement, du seizième jour au vingt-deuxième, à environ 20°, il faut tenir compte de ce fait qui a naturellement déterminé un léger retard dans l’éclosion des Mouches.

Cet autolysat représente en somme un aliment complet pour la Mouche, mais le développement s’y fait plus lentement et moins régulièrement que sur la Levure, ce qui est vraisemblablement dû en grande partie à sa moindre concentration en principes nutritifs.

J'ai fait plusieurs expériences pour voir si, en ajoutant à cet autolysat diverses substances, il serait possible de combler ce déficit alimentaire; j'ai pour cela préparé des milieux constitués par lautolysat brut & 257, additionné de peptone 2 p. 100, ou glucose 1 p. 100, ou lécithine 1 p. 100 où peptone-glucose, où peptone-lécithine.

a) L’addilion de peptone seule à permis une croissance plus rapide des larves et une formation plus précoce des pupes, cel-

228 E. GUYÉNOT

les-ci apparaissant les onzième, douzième, treizième jour. Sur ho larves, il se forma environ 30 pupes, sur 15 larves 12 pupes, etc. Dès le seizième jour naquirent les premières Mouches.

L'action de la peptone est sans doute peu marquée; mais sa présence n’est en tout cas pas nuisible et l'élévation de la teneur du milieu en protéique paraît plutôt favorable.

b) Par contre l'addition de glucose non seulement ne détermina aucune amélioration de la valeur nutritive du milieu, mais provoqua plutôt un léger retard dans la croissance larvaire et une augmentation de la mortalité. Les premières pupes apparurent les onzième, quatorzième et dix-septième jour. Leur nombre resta peu élevé (17, 12, 10). L’éclosion des Mouches, d’ailleurs peu nombreuses (10, 5, 1), ne se fit pas avant les dix-septième, vingtième et vingt-sixième Jours.

c) L’addition simultanée de peplone 2 p. r00 et glucose 1 p.100 exerça une légère amélioration comparable à celle provoquée par la peptone seule. Les pupes apparurent dès le onzième jour, on en compta 12, 7, 4o. Les premières Mouches naquirent vers le dix-septième ou dix-huitième jour. On en nota 6, 6, 24.

d) La lécithine exerça une action notable, non sur la durée du développement, mais sur le nombre des individus qui arrivèrent à limago. Les pupes apparurent en onze jours et les Mouches en dix-sept. On compta 45 pupes et 4o Mouches dans un tube, 06 pupes et 35 Mouches dans un autre.

e) En ajoutant simultanément de la peptone et de la lécithine, on obünt les meilleurs résultats. La durée du développement se trouva très légèrement diminuée. Dans un cas, par exemple, la première éclosion eut lieu dès le quinzième jour. Le nombre des larves qui réussirent à puper et celui des pupes qui donnèrent des Mouches fut très élevé (dans un cas 200 pupes et plus de 20 mouches écloses le vingtième jour).

Ces expériences montrent done que lautolysat brut, déjà complet en tant qu’aliment, peut être amélioré par addition de peptone et surtout de lécithine, mais la rapidité de croissance des larves demeure encore inférieure à ce qu’elle est sur levure témoin. Ce résultat peut être dû à la présence de substances toxiques ou retardantes ayant pris naissance par suite des transformations autolytiques. Nous verrons plus loin ce qu'il faut penser de cette hypothèse.

L’autolysat brut 4 97 fut, comme le précédent, filtré sur bougie. On obtint un autolysat filtré de couleur brune, parfaitement transparent, # 26/4. Les parties insolubles dans l’eau, restées à l’intérieur du filtre, furent recueillies et mises en suspension dans l’eau. On vérifia que ce résidu ne contenait pas de Levure intacte.

Sur autolysat filtré à 20%, le développement se montra comme dans la première série d’expériences, très différent de ce qu'il était sur le même autolysat non filtré. Les larves s’accrurent lentement. Elles atteignirent la taille 1/3 à 1/2 vers le huitième jour. Elles restèrent transparentes et dépourvues de réserves. Vers le quinzième jour, la plupart atteignirent la taille 3/4. Vers le vingttième jour, on compta déjà de nombreux cadavres. On trouva encore quelques larves vivantes, mais inertes, les vingt-sixième et vingt-septième jours. Toutes étaient mortes le trentième jour sans qu'aucune ait réussi à puper.

Il est donc nettement établi que l’autolysat filtré est incapable d'assurer la nutrition des larves, par le fait que l'on a retiré de Pautolysat brut les particules insolubles qui s'y trouvaient en suspension et qui ont été retenues dans le filtre.

A cet autolysat filtré, j'ai ajouté de la peptone à 2 p. 100, de la peptone et du glucose, de la peptone et de la lécithine. Ni la peptone seule, ni la peptone-glucose n’ont amélioré sensiblement la valeur nutritive de ce milieu ; les larves moururent dès le quinzième jour après avoir atteint la taille de 1/2 à 3/4, sans avoir pu accumuler de réserves, ni se transformer en pupes.

Par contre, l'addition de lécithine détermina une amélioration considérable. Tout d’abord la ponte fut sur un semblable milieu très abondante. Les larves atteignirent la taille 3/4 dès le huitième jour et on nota l'apparition des premières pupes dès les dixième, onzième ou douzième jours. Ces pupes furent nombreuses (150, 200, 100, 200). L’éclosion des premières Mouches se produisit dès les dix-septième et dix-huitième jours. On en compta de 40 à Do au moins.

Cette expérience montre que l’addition de lécithine à l'autolysat filtré constitue un milieu comparable au point de vue de sa valeur nutritive à l’autolysat trouble, primitif et, d'autre part, que la lécithine et une certaine quantité de peptone mises à part, l’autolysat filtré contient tous les principes indispensables au

développement des Mouches.

230 E. GUYÉNOT

Je série d'expériences.

Je préparai un troisième autolysat en laissant pendant 4 Jours à 99° 3 kilogs 500 de Levure délayée dans 3 litres d’eau bouillie. Après filtration sur papier, je recueillis 3 litres 500 d’un autolysat trouble, de teinte Jaune foncé (& 285). Une partie de cet autolysat fut filtré sur bougie et je recueillis séparément cet autolysat filtré et transparent (x »8r) et le produit obtenu en ràclant l’intérieur de la bougie et mis en suspension dans

l’eau (6 69).

J’ai étudié comparativement :

1° La Levure témoin.

2° L’autolysat brut trouble 4 243.

3° L’autolysat filtré à 267.

4° Un milieu arüficiel.

Peptone. , 2 p. 100 Lécithine 1 p. 100 Sels minéraux . DS

5° L’autolysat filtré + le milieu artificiel.

6° L’autolysat filtré + peptone 2 p. 100.

ne L’autolysat filtré + lécithine 1 p. 100.

8° Le résidu resté dans le filtre, 8 69.

Les résultats ont été les suivants (fig. 10).

1° Sur Levure témoin, développement très régulier ; pupes en 7 à 8 jours (à 23°) et Mouches en douze à treize jours.

2° Sur autolysat brut trouble, les premières pupes apparaissent en quatorze à seize Jours et les Mouches naissent à partir du dix-huitième ou vingtième jour.

3° Sur autolysat filtré, les larves ne dépassent pas la taille 3/4 qu’elles atteignent vers le dix-huitième jour ; on note des cadavres dès le treizième jour. Celles qui persistent restent transparentes, il se forme exceptionnellement quelques pupes petites, au bout de vingt à vingt-cinq jours. Une seule donne naissance, le trente-cinquième jour, à une Mouche de petite taille,

4° Sur milieu artificiel, les résultats sont, malgré la présence de lécithine, toujours médiocres. Les larves atteignent la taille 3/4 vers le dix-huitième jour; certaines meurent dès le quinzième jour. Quelques larves arrivent exceptionnellement à se transformer en pupes (Sur bo larves environ par tubes : 1 pupe le ving-