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RECHERCHES SUR LA VIE ASEPTIQUE D'UN ORGANISME 31 ième jour; 2 pupes le vingt-troisième; 1 pupe le dix-huitième Jour, suivie dans ce tube de treize autres; 2 pupes le vingt-troisième Jour; o pupe au bout de Go jours). Aucune pupe ne donne naissance à la Mouche. Quelques larves vivent très longtemps quoiqu’à peu près inertes. Dans un tube, on en trouve deux encore vivantes le cinquante-quatrième jour.

5° Sur le mélange : autolysat filtré + milieu artificiel, le résultat est comparable à celui qui est fourni par l’autolysat

M Jénoïns Mile: synbpétique jules estreit atmbaue d'autohysat Autoysal Elré pus ailen syalheliquue

à ee Mileu synthétique

he : Au olysal Âlré seul

Fig. 10.:— Courbes montrant le développement comparé des Drosophiles sur Levure, milieu artificiel, autolysat filtré à 281, autolysat filtré + milieu synthétique et milieu synthétique + extrait alcoolique d’autolysat.

non filtré. Les larves se transforment en pupes, dès le douzième, treizième ou quinzième jour. On en compte selon les tubes 60, 75, 19, 2b; les pupes donnent, du moins un certain nombre d’entre elles, naissance à des mouches à partir du dix-septième ou dix-neuvième Jour.

6° Sur lautolysat filtré + peplone, on ne note qu'une très légère amélioration par rapport à ce qui se passe sur autolysat filtré seul. On obtient quelques pupes peu nombreuses vers le

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dix-huitième jour (5 pupes, 1,8, 4, 0). Aucune pupe ne donne naissance à la mouche.

7° Sur autolysat filtré + lécithine, le résultat est tout à fait comparable à celui que donne l'addition du milieu artificiel tout entier. Les pupes sont obtenues en douze à quatorze Jours. Les larves sont turgescentes, non transparentes, et ne meurent qu’excepüonnellement. Les Mouches éclosent entre le dix-huitième et le dix-neuvième Jour.

8 Enfin en mettant en suspension dans Peau, contenant 1 p.100 de peptone et les sels minéraux usuels, le produit obtenu en râclant l'intérieur de la bougie filtrante, on obtient un résultat semblable à celui que détermine l'addition de lécithine à lautolysat filtré. Les pupes apparaissent nombreuses en 9, 10, 11 jours et les Mouches éclosent dès le treizième ou quatorzième jour.

Ce résidu est donc à la fois très riche en un composé identique ou semblable à la lécithine et contient également la ou les substances indispensables de lautolysat.

Conclusion de ces trois séries d'expériences. — Résumons maintenant les résultats de ces diverses expériences pour en tirer les

conclusions.

Nous savons que toutes les recherches effectuées pour constituer des milieux artificiels ont échoué, que le meilleur d’entre ces milieux, composé de peptone, de lécithine et de sels minéraux, est incapable d'assurer la nutrition de la Drosophile et de lui permettre d'effectuer régulièrement son développement complet.

Par contre, on peut, par autolyse de la Levure, obtenir un produit brut, contenant des particules en suspension, qui, bien qu'avec une moindre rapidité, permet régulièrement à la larve de croître, d'effectuer sa métamorphose et d'aboutir à l'imago.

Cet autolysat devient par contre insuffisant si on enlève les particules en suspension qu'il contient, par filtration sur bougie.

Me trouvant ainst en présence de deux milieux nutritifs insuffisants : milieu artificiel et autolysat filtré, je les ai mélangés et j'ai constaté que ces deux milieux, insuffisants isolément, devenaient un substratum nutritif excellent, quand on les l'ÉUNISSAUL,

Or le milieu artificiel ajouté à Pautolysat filtré contient trois catégories de substances, de la peptone, de la lécithine et des sels minéraux. Une expérience faite en ajoutant à l’autolysat filtré la peptone et la lécithine, sans les sels minéraux, a montré que ce n'était pas ceux-ci qui manquaient à l’autolysat filtré. L’addition de peptone seule a été à peine efficace, tandis que l’addition de lécithine seule à l’autolysat filtré en a fait un milieu excellent.

Nous pouvons donc conclure maintenant :

1° En fournissant aux larves de la lécithine, plus les substances de l’autolysat filtré, nécessaires, mais non suffisantes, on obtient un milieu nutritif complet.

29 Un milieu composé de peptone, lécithine, sels minéraux, par lui-même insuffisant, devient un aliment complet si on lui ajoute les substances contenues dans l’autolysat filtré.

Tous les efforts devaient donc tendre naturellement, après cette constatation, à essayer de connaître et d’isoler la ou les substances nécessaires contenues dans l’autolvsat filtré.

Production des graisses du tissu adipeux aux dépens des albuminoïdes dans certaines conditions. — Auparavant, je tiens à attirer l’attention sur les résultats particuliers fournis par l’emploi de l’autolysat filtré, seul ou additionné de peptone. Ce milieu ne contient pas de graisses ; je n’en ai pas trouvé trace en effectuant la recherche des graisses après saponification totale d'une grosse quantité de cet ane

Or, sur un semblable milieu, si d’une façon géné rale les larves restent transparentes et meurent sans puper, avec un tissu adipeux assez pauvre en réserves, quelques-unes ont pu, par contre, se développer jusqu’à la pupe et même, dans un cas ou deux, donner exceptionnellement naissance à des mouches. L’examen microscopique du corps adipeux de semblables larves à montré l'existence de nombreuses vacuoles réfringentes, colorables en noir par l'acide osmique, en rouge par le Sudan HT, qui sont incontestablement constituées par des graisses (fig. 5, pl. IT).

Cette constatation permet d'affirmer qu’en l'absence de gratisses el de sucres, du moins de sucres réducteurs (il y a d’ailleurs peu de chance pour que des sucres aient pu persister dans Pautolysat), les larves sont susceptibles, à des degrés divers, de fabriquer des graisses aux dépens des substances albuminoïdes

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ei de les mettre en réserves. Cette transformation est par contre irréalisable si le milieu albuminoïde est constitué par la peptone seule, ainsi que l’a montré l'étude microscopique du tissu adipeux (fig. 1, pl. I).

Cette synthèse des graisses reste, en tout cas, une opération précaire. La quantité de graisse emmagasinée et le retentissement de cette réserve sur le reste du dév eloppement n’ont rien de comparable à ce qui s’observe quand, au même autolysat filtré, on a ajouté de la lécithine. Cette première indication, qui confirme la réalité d’une transformation aseptique des albuminoïdes en graisses par les larves de Mouches, montre que ce processus reste très limité et que la majeure partie des réserves adipeuses parait provenir d’une utilisation directe des graisses alimentaires.

Essais d'isolement de la substance nécessaire contenue dans l’autolysat. — Les recherches ayant trait à cette tentative ont été interrompues brusquement et sont restées incomplètes. Du moins quelques précisions peuvent être déjà apportées.

Il est extrêmement difficile d'analyser un produit aussi complexe qu’un autolysat de Levure et d'isoler, d’un semblable mélange, les différents éléments quile constituent pour rechercher quel est, parmi eux, celui ou ceux dont la présence est indispensable à la nutrition des mouches.

Au sujet de la nature de cette substance indispensable plusieurs hypothèses peuvent être faites, dont un certain nombre sont dès maintenant à éliminer.

1° Il ne s’agit certainement pas de graisses neutres, ni d’acides gras, ni de lipoïdes pour la raison que ces substances, sont insolubles dans l’eau où que celles qui pouvaient s'y trouver en suspension (lécithine) ont été retenues par la filtration sur bougie.

J’ai d'autre parttraité une partie de l’autolysat filtréet desséché, par léther anhydre et par le chloroforme. Ces dissolvants même employés à chaud, n’ont entraîné que des traces infimes de substances. Ces substances ne donnent pas les réactions des corps gras et les extraits éthérés ou chloroformiques ajoutés au milieu artificiel témoin n'ont aucunement amélioré la valeur nutritive de ce milieu.

2° Il paraît très invraisemblable qu'il s'agisse de sucres. Ceux qui proviennent de lhydrolyse du glycogène ou qui pouvaient se

trouver dans les cellules de Levures sont détruits rapidement lors de la fermentation qui s'établit au début de l’autolyse. Sans doute, la désintégration de certaines molécules albuminoïdes ou des nucléoprotéides peut mettre en liberté de petites quantités de sucre. [y à cependant des chances pour que cette partie hydrocarbonée de la molécule soit elle-même détruite. D'ailleurs laddiüon d’hexoses et même de pentoses ne m'a jamais donné aucun résultat satisfaisant.

3° Une troisième hypothèse concerne les substances minérales de l’autolysat. Il semble peu probable que ce soit à ce groupe qu'appartienne l’élément indispensable, puisque l'emploi des sels minéraux de la Levure entière n’a procuré aucun bénéfice. J’ai d’aiileurs calciné une portion de l’autolysat filtré et ajouté les cendres convenablement recueillies au milieu artificiel témoin, sans que le résultat se soit trouvé en rien amélioré du fait de cette addition.

4° l'est donc très vraisemblable que le produit indispensable est un constituant des molécules protéiques, soit un acide amidé, soit une base purique, soit une base hexonique, soit une autre. substance (choline, ptomaïnes, leucomaïnes, etc...

Extrait alcoolique d'autolysat filtré. — Une simplification importante de l’autolysat filtré a été obtenue en traitant celui-ci par deux volumes d’alcool à 95°. I se forme dans ces conditions un abondant précipité que l’on sépare par filtration. Le précipité est lavé à plusieurs reprises à l’alcool bouillant qui entraine des produits se précipitant par refroidissement.

Cet extrait alcoolique a été ajouté, après évaporation de Palcool, au milieu synthétique témoin et a donné des résultats excellents, supérieurs à ceux fournis par l’addition de lautolysat luimême (fig. 10).

Le développement des larves s’effectue, en effet, avec rapidité. Toutes les larves ou presque se transforment en pupes (180, 150, 200, 120, 180, 200, 190, 100, 200 pupes environ) en neuf à dix jour au plus, Les mouches naissent dès le quatorzième ou quinzième jour et on en recueille dans tous les tubes au moins une centaine. On ne note pas de cadavres de larves. Ces’ mouches transportées sur de nouveaux tubes, renfermant le même milieu, y ont donné une deuxième génération abondante. Jai, depuis,

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maintenu sur ce milieu des Mouches en reproduction très intense pendant plus de vingt-cinq générations.

C’est le meilleur milieu nutritif que j'aie jusqu'alors obtenu. Il est nettement supérieur tant au point de vue de la régularité que de la rapidité du développement à l’autolysat filtré, dont certaines parties nuisibles avaient été vraisemblablement précipitées par l'alcool et séparées.

Cette expérience permet donc d'affirmer que la substance indispensable, soluble dans l’eau, est également soluble dans l'alcool à 70°.

Extraits alcooliques divers. — J'ai alors cherché à obtenir, par des extractions de l’autolysat sec, au moyen d'alcools de concentrations diverses, un fractionnement de cet autolysat pour rechercher dans quelles portions exactement passait la partie utile.

Ces expériences ont été faites en opérant sur un autolysat brut,

non filtré — ce qui évidemment rendait le résultat un peu plus complexe — mais elles devaient seulement servir de première indication.

1° £xtraction par l'alcool à 100° froid

L’autolysat parfaitement desséché dans le vide sulfurique est broyé en présence d'alcool absolu froid, en répétant quatre fois l'opération. L'alcool est décanté, filtré, évaporé, et le résidu, très peu abondant, rèpris par l’eau ; ce résidu est ajouté au milieu artificiel témoin.

Sur un semblable milieu (+ 7), les larves ne se développent pas plus facilement que sur le milieu artificiel seul. Un certain nombre meurent vers le onzième jour. Quelques unes atteignent la taille 3/4 à 1/1; exceptionnellement une ou deux se transforment en pupes qui se dessèchent sans évoluer.

Essai du résidu. — La partie de l’autolysat sec insoluble dans l'alcool à ro0° froid, c'est-à-dire la presque totalité de cet autolysat, est ajoutée au milieu nutritif témoin (y 8). On obtient alors un résultat excellent: pupes en cinq à six jours, nombreuses, aboutissant toutes à des Mouches qui éclosent du neuvième au onzième Jour.

Conclusion. — La substance indispensable est insoluble dans l'alcool absolu froid.

2% Extraction par l'alcool à 100° bouillant

Une portion de l’autolysat insoluble dans l’alcool absolu froid est traitée à trois reprises par l’alcool absolu bouillant. Le liquide est filtré à chaud. Il est de couleur très légèrement jaunâtre. Par refroidissement il se forme un précipité blanc. On évapore l’alcool et reprend par l’eau le résidu qui est entièrement soluble. Ce résidu est ajouté au milieu artificiel témoin.

Dans ces conditions, ôn constate une légère amélioration consécutive à cette addition. On obtient des pupes en petit nombre, mais pas dans tous les tubes et les pupes donnent naissance à quelques Mouches après plus de vingt jours.

Pensant que ce résultat médiocre était dû à une extraction incomplète, J'ai refait une extraction poussée beaucoup plus loin, en traitant à quinze reprises, et chaque fois pendant un temps assez long, l’autolysat par l’alcool bouillant. Le produitobtenu, entièrement soluble dans l’eau, fut ajouté au milieu artificiel témoin (y 78).

Sur ce milieu, l'amélioration est beaucoup plus manifeste. Dans tous les tubes, des pupes sont formées au bout de neuf à dix jours et des Mouches éclosent du dix-septième au dix-huitième jour.

Essai du résidu. — Le reste de l’autolysat, dissous dans l’eau et ajouté au milieu artificiel témoin, donne un aussi bon résultat que l’autolysat non traité par l'alcool à r00°. L'extraction avait done été très incomplète, en ce qui concerne le principe utile et lautolysat en renfermait encore de grandes quantités.

Conclusion. — La substance utile, insoluble dans Palcool absolu froid est difficilement soluble dans Palcool à r00° bouillant.

3° £atraction par l'alcool à 40° bouillant

De l’autolysat sec, épuisé seulement par l’alcool absolu froid, est traité par lPalcool à go° bouillant. On obtient une liqueur beaucoup plus foncée que les extraits précédents, ne précipitant pas par refroidissement, Après évaporation de l'alcool, cet extrait est ajouté au milieu artificiel témoin (y 19).

Sur ce milieu, le développement se fait dans d'assez bonnes conditions. Dans tous les tubes on observe des pupes assez

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nombreuses, à partir du neuvième ou dixième jour et des Mouches éclosent vers le quinzième ou dix-septième jour. Un assez grand nombre de pupes meurent sans évoluer.

Essai du résidu. — La partie de l’autolysat, non dissoute par l'alcool à go° bouillant, est ajoutée au milieu artificiel et donne un résultat aussi bon qu'avant extraction.

Conclusion. — La substance utile, insoluble dans Palcool à r00° froid, très peu soluble dans Palcoo! à r00° bouillant, est peu soluble dans l'alcool à 90° bouillant. +

4° Extraction par l'alcool à 80° bouillant

Le résidu restant après l’extraction précédente et trouvé très efficace est, à son tour, épuisé par l'alcool à 80° bouillant. L’extrait de couleur brun foncé est, après évaporation de l'alcool, ajouté au milieu artificiel témoin

Cette addition provoque une amélioration encore plus nette que l'extrait précédent, On obtient en effet des pupes assez nombreuses en 8 à 10 jours et des Mouches en 15 à 17 jours.

Essai du résidu. — Enfin le résidu est dissous dans l’eau et ajouté au milieu artificiel témoin (+ 17). Dans ces conditions le développement se fait encore régulièrement et rapidement : des pupes nombreuses apparaissent du neuvième au dixième jour et les Mouches commencent à éclore dès le quinzième Jour.

Conczusion. — La substance indispensable est de plus en plus soluble, à mesure que les extraits sont effectués avec des alcools moins concentrés, mais est évidemment plus soluble dans l'eau que dans l'alcool. Cependant les extraits faits avec de l'alcool à 60-709 paraissent, ainst que nous l'avons vu, en contenir la plus grande partie.

Ces caractères de solubilité ne permettent pas, on le conçoit, d'isoler la substance puisqu'elle est plus où moins soluble aussi bien dans Peau que dans les divers alcools et qu'elle passe nécessairement avec d’autres produits dont il est très difficile de la séparer.

Ces expériences fournissent cependant une indication sérieuse. L'une au moins des substances indispensables est insoluble dans Palcoo! à ro0° froid. Or, nous avons vu que quand on fait un extrait par l'alcool absolu bouillant qui renferme, quoiqu'en très

pete quantité, les substances indispensables, la liqueur transparente à chaud se trouble par refroidissement, tandis qu’une substance blanchâtre se dépose sur les parois et le fond du récipient. Le rapprochement de ces deux faits conduit à supposer que cette substance doit être au moins lune de celles qui sont recherchées.

Dans le but de m'en assurer, j'ai préparé, par extraction par l'alcool à ro0° bouillant, dans l’extracteur, de grandes quantités d’un semblable extrait et j'ai pu recueillir près de 3 grammes de substance insoluble à froid. Séparée par filtration, elle présente une consistance un peu gélatineuse. Lavée à plusieurs reprises, sur le filtre, à l’alcool à 100° froid, puis desséchée, elle forme une poudre blanche qui se dissout très facilement dans Peau en donnant une liqueur jaune pâle.

Une petite quantité de ce produit fut alors ajoutée au milieu artificiel témoin (y 25). Voici quels furent les résultats de cet essai.

Sur un semblable milieu, les larves se développèrent assez rapidement, elles atteignirent les tailles 1/2, 3/4 et 1/1 vers le septième Jour. Le dixième jour on nota des pupes assez nombreuses (30, 2, 4o, 10). La première Mouche naquit le quatorzième jour. Les autres entre le quatorzième et le dix-septième jour. À ce moment on en compta 9, 39, 12, 10.

La comparaison avec les résultats obtenus, en utilisant Île milieu artificiel seul, montre nettement que laddition de cette substance entraine une amélioration au moins aussi grande que extrait alcoolique à r00° bouillant total. Elle est toutefois inférieure, comme rendement à l'addition de lPautolysat lui-même, ce qui peut être dù, soit à ce que la substance à été employée en quantité insuffisante, soit à ce que son efficacité est surtout complète quand elle se trouve associée à d’autres substances.

D’autres recherches faites pour déterminer la nature chimique de cette substance et en étudier l’action à diverses concentrations ont été malheureusement interrompues, en juillet 1914, au moment où je pouvais penser être sur le point de résoudre définitivement le problème dont je poursuivais depuis plus de trois ans la solution.

Je ne parlerai pas d'expériences faites en traitant l’autolysat de Levure par l'acide phosphotungstique et en étudiant séparé-

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ment les eaux-mères recueillies après précipitation et la liqueur obtenue par dissolution du précipité. Toutes ces recherches ont été interrompues.

Essai d'autolysats de foie. — Parallèlement aux tentatives que je faisais pour fragmenter l’autolysat de Levure en ses constituants, j'ai fait, à titre d'indication, des essais avec des autolysats de différentes substances. Ceux de foie m'ont donné les résultats les plus intéressants.

Du foie de bœuf broyéet délayé dans l’eau est maintenu à 55°, pendant ro à 15 jours, sous couche de toluène. On chauffe ensuite à 100° ; il se forme un coagulum qui est séparé par filtration. Ce coagulum est digéré par le trypsine en milieu alcalin à 36°. Quand il ne se produit plus aucune coagulation du liquide en digesüon par chauffage à 100°, on mélange les deux extraits, l'extrait primitif non coagulable à 100° et le coagulum digéré. Cet autolysat fut après filtration ajouté au milieu artificiel témoin (y228) L’essai eut lieu à une température de 22°.

Dans ces conditions, des pupes nombreuses apparurent dans tous les tubes dès le neuvième Jour et ces pupes donnèrent naissance à des Mouches dès le quinzième ou dix-septième Jour.

Le rendement fut au moins aussi bon que sur autolysat de levure.

Essais de bouillons de Levure et de foie. — Etant donnée la complexité des autolysats, j'ai recherché si les substances indispensables ne pourraient pas être extraites de la Levure ou du foie, sous une forme plus simple et par un procédé plus rapide. C’est dans ce but que j’ai fabriqué des bouillons.

Bouillon de Levure : Premier essai. — Déjà en janvier 1912 J'avais essayé un bouillon obtenu en chauffant 300 A de Levure délayée dans un litre d’eau, à l’autoclave, à 120°, pendant 20 minutes. Après filtration sur papier, puis sur bougie, J'avais recueilli un suc (1 4), de réaetion acide, ne réduisant pas la liqueur de Fehling, contenant de petites quantités d’acidalbumines et d’albumoses. La Levure utilisée avait dû subir une très légère autolyse avant de m'être livrée (levure en pain du commerce). |

Uulisé seul, ce milieu ne donna que des résultats très médio-

cres : les larves se développèrent lentement ; elles atteignirent la taille 1/3 à 1/2 au plus. De nombreuses larves étaient mortes le vingt-cinquième jour. Toutes étaient mortes le trente-cinquième Jour, sans avoir accumulé de réserves dans leur corps adipeux.

L’addition de glucose ne détermina aucune amélioration ; par contre celle de lécithine -— bien qu’employée alors à doses beaucoup trop faibles, 0,15 p. 100 — donna des résultats encourageants. Les larves se développèrent lentement, mais au bout d’un mois quelques pupes commencèrent à se former (du trentième au trente-sixième jour). Ces pupes furent peu nombreuses, il s’en forma jusqu’au soixantième jour. Quelques Mouches prirent naissance : 3 dans un tube, les trente-septième, quarante-et-unième et quarante-huitième jour ; 2 dans un autre tube les quarantetroisième et quarante-cinquième jour. Il était évident que ces résultats auraient été très améliorés par lemploi d’une dose suffisante de lécithine, c’est ce que montrèrent les résultats d’un deuxième essai.

Deuxième essai. — Un bouillon de Levure fut fabriqué en faisant bouillir pendant une heure 100 grammes de Levure pressée, fraîche, dans {oo grammes d’eau distillée. Le bouillon obtenu fut, après filtration, ramené par concentration à 150 centimètres cubes. Il donna une réaction du biuret légère, ne réduisit pas la liqueur de Fehling. On l'additionna de lécithine 0,50 p. 100 et peptone 2 p. 100.

Les résultats fournis par Pemploi de ce milieu furent aussi bons que ceux obtenus avec l’extrait alcoolique d’autolysat. Les larves atteignirent la taille 1/1 en 6 à 8 jours; les pupes apparurent dès les neuvième et dixième jours. On en compta 6o, 30, 8. Les premières Mouches naquirent du quatorzième au dix-huitième jour.

Le bouillon de Levure, ajouté au milieu artificiel, est donc très efficace et contient les principes indispensables au développement des Drosophiles.

Essai du bouillon de foie. — Le fait que l’autolysat de foie donne des résultats superposables à ceux fournis par l'autolysat de Levure me conduisit à rechercher si le bouillon de foie jouissait de la même propriété que le bouillon de Levure. Or, sur un milieu artificiel additionné de bouillon de foie (milieu 5 79)

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j'ai obtenu régulièrement des pupes en 13 jours et des Mouches en 18 jours. Le bouillon de foie est donc comparable — quoiqu'un peu moins favorable — au bouillon de Levure.

Autres bouillons. — Par contre, d’autres bouillons utilisés à titre d'indications, bouillons de viande, de chair de Poisson, de laitance n’ont pas donné des résultats favorables. J’ai de même ajouté sans succès de la bière concentrée.

Essais d'autres substances. — En présence des difficultés que comportait la recherche dans les bouillons ou autolysats des substances indispensables au développement des Mouches, jai effectué de très nombreux essais, avec de multiples produits, espérant en retirer quelques indications utiles relativement à la nature de la ou des substances indispensables, Comme tous ces essais sont restés stériles, je ne m’attarderai pas à décrire chacune des expériences faites avec les divers produits, je les résumerai seulement brièvement.

1° Acides amidés. — Pensant que le milieu artificiel peptonelécithine pouvait pêcher par défaut de certains acides amidés indispensables, jai essayé addition au milieu artificiel témoin, soit d'acides amidés à l’état pur, soit de produits de la digestion de substances albuminoïdes remarquables par leur haute teneur en tel ou tel constituant. C’est ainsi que j'ai utilisé le glycocolle ou la peptone de gélatine, la leucine, la tyrosine, le tryptophane ou la peptone de caséine sans aucun résultat. Il resterait encore à essayer un grand nombre de constituants tels que l’arginine, la lysine, l’histidine, la cystine, la proline, ete.

Un hydrolysat de viande de bœuf, ne donnant presque plus la réaction du biuret et contenant divers acides amidés, n’a pas été plus efficace.

2° Nucléoprotéides et leurs dérivés. — J'ai déjà relaté les résultats négatifs que m'avait donné l’emploi de nucléine de la Levure. J'ai utilisé ensuite soit l'acide nueléinique, soit l'acide thyminique, soit le nucléinate de soude, sans plus de suceès. Des expériences faites en ajoutant à un milieu artificiel des bases puriques (xanthine, hypoxanthine, guanine) en quantités variables ne m'ont donné de même aucun résultat appréciable.

3 Substances extractives. — Le bouillon de viande ayant paru entraîner une amélioration très nette des milieux précé-

demment employés, j'ai utilisé à nouveau du bouillon concentré ou un extrait alcoolique du résidu sec de ce bouillon sans en obtenir aucune amélioration notable. Même insuccès en utilisant, à doses variées, des substances extractives pures : sarcosine, créatine et créatinine. |

Il en a été de même de l'addition d’allantoïne, de choline, d’urée ou de divers acides organiques (acides lactique, tartrique, citrique) ou de leurs sels,

Utilisation des hydrates de carbone et des graisses avec ou sans autolysat. — Il est très remarquable qu'aucun des hydrates de carbone utilisés, pas plus que les divers mélanges gras, essayés dans mes premières séries d'expériences, ne se. “soient montrés capables d’être utilisés par les larves pour la constitution de leurs réserves, ni même comme aliment énergétique, puisque l’activité des larves et la durée de leur vie n’étaient alors accrues le plus souvent que dans des proportions infimes par rapport à ce qu’elles étaient sur des milieux artificiels dépourvus de ces substances ternaires.

L'exemple de la lécithine qui est parfaitement utilisée en présence d’autolysat, tandis qu’elle ne produit, en l'absence de cet extrait, qu'une amélioration incomparablement plus faible m'a conduit à recommencer les expériences relatives à l'utilisation des graisses et des hydrates de carbone, en présence d’un aliment protéique constitué non plus par la peptone seule, mais par la peptone additionnée d’autolysat filtré de levure.

Première série: Essai des hydrates de carbone.— Les milieux

suivants furent essayés :

Avec autolysal

sans autolysal 60 p. 100

B ro Peptone. . 2 p. 100 GETTMMNCDIONC" 2 p. 100 Peptone 2 p. 100 8 2 { Peptone. : 2 p. 100

‘ae Amidon. . I P. 100 : { Amidon. . 1 P. 100 Peptone. . 2 p. 100 D Peptone. . 2 P:. 100

À 4 Glycogène . 1 P. 100 RUE Glycogène . 1 P. 100 - | Peptone. . 2 p. 100 ar Pentane+, 2 P. 100

É Glucose. . 1 p.100 Bu) Glucose. … 1 P. 100 Peptone. . 2 p. 100 à Peptone. . 2 P. 100

4) Lévulose . I P. 100 © # ) Lévulose . I p. 100

Tous ces milieux renfermaient la même quantité d’une même

solution minérale mère.

Skk É. GUYÉNOT

1° Milieux sans hydrates de carbone. — Sur milieu contenant seulement 2 0/0 de peptone, les larves atteignent péniblement la taille 1/3 à 1/2 vers le neuvième ou dixième jour, meurent à partir du neuvième jour et sont toutes mortes le quinzième jour environ. Ces larves restent petites, absolument transparentes (fig. 1, pl. 1), avec un tissu adipeux complètement dépourvu de réserves (fig. 1, pl. I).

Sur le même milieu additionné d’autolysat filtré, les résultats sont, ainsi que nous l'avons déjà maintes fois constaté, nettement supérieurs en ce qui concerne la croissance des larves (fig. 2, pl. D. On note en effet des larves 3/4 à 1/1 vers le neuvième au dixième jour. La plupart de ces larves meurent. Quelques-unes cependant se transforment en pupes à partir du onzième Jour jusqu’au dix-septième. Aucune de ces pupes ne réussit à achever sa métamorphose. Sur ce milieu, les larves présentent un tissu adipeux renfermant des globules réfringents (fig. 5, pl. Il), se colorant en rouge par le Sudan III. Il y a donc incontestablement production de graisse aux dépens de l'aliment protéique et mise en réserve d’une petite quantité de cette graisse, mais ce processus demeure insuffisant et très variable comme intensité d’un individu à l’autre.

2° Utilisation de l'amidon. — Tandis que sur le milieu renfermant de la peptone et de l’amidon la croissance larvaire reste très précaire, atteignant à peine 1/3 ou exceptionnellement 1/, sur le même milieu additionné d’autolysat, les larves se développent beaucoup mieux ; la plupart d’entre elles atteignent en effet la taille 3/4 à 1/1, mais aucune ne réussit à puper. Ces larves, dont certaines meurent dès le douzième où quatorzième jour, et dont aucune ne dépasse le vingt-deuxième jour, restent transparentes. Leur tissu adipeux renferme cependant quelques granulations réfringentes, colorables par le Sudan II.

3° Utilisation du glycogène. — Sur milieux renfermant peptone

et glycogène, les larves restent minces et transparentes (Hg. 3, pl D. Elles atteignent au plus > millimètres à > mm. 5, très exceptionnellement 3 millimètres vers le douzième ou. quatorzième Jour. Beaucoup meurent d’ailleurs dès le dixième Jour. Aucune ne reste vivante au delà du seizième jour et aucune ne se transforme en pupe. Le tissu adipeux paraît très réduit et absolument dépourvu de réserves (fig. 9, pl Al

Sur le même milieu additionné d’autolysat, la croissance larvaire se fait beaucoup mieux, les larves atteignant la taille 1/1 (6,5 à 7 mm.) vers le huitième ou dixième jour. Ces larves contiennent quelques réserves dans leur tissu adipeux (fig. 4, pl. D); une seule réussit à se transformer en pupe, mais meurt en cet état.

4° Utilisation du glucose. — Les résultats sont comparables aux essais précédents. Sur milieu peptone-glucose, les larves atteignent une taille de 1/4-1/3, exceptionnellement 1/2, meurent à partir du huitième jour et ne dépassent pas le quinzième jour Gig.5, pl. D. Leur tissu adipeux est vide de réserves (fig. 7, pl. ID.

L'addition d’autolysat améliore nettement ce milieu. Les larves atteignent la taille 3/4 à 1/1 vers le douzième jour (fig. 6, pl. D ; 42 pupes se forment le dix-septième jour dans un tube, une le vingt-et-unième jour dans un autre tube. Ces pupes meurent d’ailleurs sans évoluer. Les larves, qui vivent au plus 24 jours, renferment quelques réserves dans leur tissu adipeux.

5° Utilisation du lévulose. — Je pourrais répéter presque mot pour mot, en ce qui concerne le lévulose, ce que je viens de dire à propos du glucose. Tandis que sur milieu lévulosé simple, les larves ne dépassent pas la taille 1/3 à 1/2, sont absolument transparentes (fig. 7, pl. I) et sans réserves (fig. 8, pl. IT), sur le même milieu additionné d’autolysat, elles atteignent, en huit à dix jours, la taille adulte (fig. 8, pl. 1) et quelques-unes se transforment en pupes, qui d’ailleurs meurent à ce stade. Les larves ont un tissu adipeux renfermant quelques inclusions réfringentes (fig. 4, pl. I).

Conclusion. — Ces expériences confirment ce que nous avons déjà observé relativement à la non utilisation des hydrates de carbone par les larves pour lélaboration de leurs réserves. Quel que soit l’hydrate de carbone employé, la croissance reste à peu de chose près aussi précaire que sur le milieu formé de peptone seule et, dans aucun cas, il n’y a élaboration de réserves adipeuses.

Par contre, les milieux renfermant à la fois hydrates de carbone et autolysat permettent une croissance plus rapide, la formation de quelques pupes et la mise en réserve de petites quantités de graisse, mais ces phénomènes ne sont pas plus marqués que dans les milieux renfermant seulement la peptone et l’auto-

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lysat. C’est donc à la présence de cet autolysat qu'ils doivent être attribués et non à une utilisation des hydrates de carbone. Deuxième série : Essai des mélanges gras. — J’ai de même repris mes premiers essais de milieux renfermant divers mélanges gras, en utilisant comparativement la peptone seule 2 0/0 et la peptone additionnée d’autolysat (60 0/0).

Les milieux suivants ont été utilisés (°) :

). Trioléine.

). Trioléine, acide oléique, glycérine.

). Trioléine, acide oléique, oléate de soude, glycérine. ). Acide oléique, oléate de soude, glycérine. ). Acide oléique, glycérine.

18 (19). Trioléine, tripalmitine, tristéarine.

24 (25). Trioléine, ac. oléique, oléate de soude, acide stéarique, stéarate de soude, glycérine.

B 26 (27). Lécithine.

Les résultats ont été les suivants :

1° Sur les cinq premiers milieux (composés oléiques) sans autolysats, les larves restent petites, atteignant les tailles 1/4, 1/3 ou au plus 1/2. Les milieux renfermant l’acide oléique paraissent un peu plus favorables que ceux contenant la trioléine seule. Partout les larves ne vivent guère au delà du quinzième jour et aucune ne se transforme en pupe. Ces larves sont transparentes, leur tissu adipeux reste peu développé bien que renfermant quelques inclusions graisseuses.

2° Sur les mêmes milieux additionnés d’autolysat, le développement se fait beaucoup mieux, mais sans qu’on puisse le considérer comme nettement supérieur aux résultats fournis par le milieu peptone-autolysat, sans corps gras. Les larves atteignent pour la plupart la taille 1/1, du huitième au douzième jour Œig. 9, pl. Letfig. 10, pl. D. Quelques pupes se forment du huiüème au quinzième jour, mais aucune d'elle n’aboutit à la Mouche. Le tissu adipeux est beaucoup plus développé (fig. 2, 3, 14, pl. IT) et renferme d’assez nombreuses inclusions de graisses.

3° Les mêmes remarques s'appliquent au cas des milieux renfermant les trois graisses neutres, trioléine, tripalmitine, tristéarine (fig. 13, pl. ID.

4° Sur le milieu renfermant le mélange gras le plus complexe

4 s NS p ar dcece il:

(9 Les numéros entre parenthèses correspondent aux milieux avec autolysat

5 25), Paddition d’autolysat aboutit à une amélioration plus grande de la valeur nutritive du milieu que dans le cas des graisses précédentes. Dans tous les tubes, en effet, des pupes se forment à partir du neuvième ou dixième jour et quelques pupes donnent naissance, du quinzième au dix-huitième jour, à des Mouches qui meurent rapidement.

9° Enfin les essais avec addition de lécithine donnent les résultats que l’on connaît. Le mélange autolysat lécithine aboutit notamment à la formation régulière, dans chaque tube, de très nombreuses pupes, en 7à 10 jours, et à l’éclosion de nombreuses Mouches du douzième au seizième jour (fig. 12, pl. Il).

Conclusion. — Tous ces résultats montrent nettement que si Von excepte la lécithine et — quoique beaucoup moins efficace le complexe gras oléo-stéarique — les autres substances grasses essayées ne sont guère mieux utilisées en présence d’autolysat de Levure qu’en l’absence de ce produit, ainsi que le fait a déjà été constaté pour les hydrates de carbone.

Il y a cependant entre l'utilisation de ces dernières substances et celles des différentes graisses une différence incontestable. En effet, tandis qu’en l’absence d’autolysat, les larves qui ont à leur disposition des hydrates de carbone ne présentent, dans leurs cellules adipeuses, aucune réserve grasse, dans les mêmes conditions, les larves élevées sur milieux renfermant des graisses absorbent une partie de ces substances et emmagasinent dans leurs cellules adipeuses quelques réserves graisseuses. En somme, lorsque les milieux artificiels renferment de lautolysat de Levure, les graisses fabriquées aux dépens des protéiques sont les seules emmagasinées si le milieu est dépourvu de corps ternaire ou renferme seulement des hydrates de carbone ; lorsqu'il contient des graisses, la partie absorbée de ces graisses alimentaires s'ajoute aux graisses fabriquées par l'organisme et le développement s'effectue d’autant mieux.

Il n'en demeure pas moins qu’en fournissant aux larves un aliment protéique suffisant (peptone-autolysat), celles-ci ne peuvent élaborer des réserves adipeuses suffisantes que si on met à leur disposition des substances grasses d’une certaine constitution chimique, ainsi que le montre l’action incomparablement supérieure des composés stéariques et surtout de la lécithine. Les conclusions que je formulais à la fin de ma première série

de recherches (p. 201) se trouvent donc fortifiées par ces nouveaux essais effectués sur des milieux additionnés d’auto-

lysat.

La structure du tissu adipeux et l'élaboration des réserves sur les divers milieux artificiels. — Les changements très profonds que détermine dans la nutrition des larves la constitution des divers milieux arüficiels ne sont pas sans retentir d’une façon plus ou moins marquée sur l'aspect de leurs éléments histologiques. [l y aurait à ce point de vue de très intéressantes observations à rapporter. Les processus de la métamorphose, dans les quelques cas où celle-ci est réalisée, présentent notamment de nombreuses particularités. Je me contenterai ici de rapporter quelques constatations relatives à la structure histologique du corps adipeux. |

Dans les conditions normales, représentées par l’élevage aseptique sur Levure, le tissu adipeux est constitué, au moment de léclosion des larves, par des files de petites cellules losangiques, à protoplasma finement granuleux, qui ne tardent pas à augmenter de volume d’une façon considérable. Pas plus que les auteurs qui ont étudié cette question, je n'ai constaté de multiplicauon des cellules adipeuses; le développement considérable que finit par présenter le tissu adipeux est dû uniquement à l'accroissement de chacune des cellules initiales qui le constituent. En même temps qu’elles augmentent de volume, ces cellules adipeuses se chargent progressivement d'inclusions qui contribuent à donner aux larves, d’abord transparentes, une opacité de plus en plus marquée. Ces inclusions sont constituées par des gouttelettes réfringentes, se colorant en rouge par le Sudan TL et en noir par l'acide osmique. Au fur et à mesure que la larve avance en âge, ces gouttelettes deviennent plus grosses et plus nombreuses. Leur aspect réfringent, leur comportement vis-à-vis du Sudan HT et de l'acide osmique, leur solubilité dans l’éther ou le xylol indiquent nettement qu'elles sont constituées au moins en majeure partie par des substances grasses. L'action des fixateurs à base d'acide osmique étant très lente, il faut user de certains artifices pour obtenir des préparations bien nettes. La pratique que j'ai utilisée consiste à saisir les larves entre deux pinces par leurs extrémités antérieures et postérieures et à

les déchirer au sein du liquide fixateur (!). Les files de cellules adipeuses se trouvent ainsi floiter dans le liquide et la fixation se fait très régulièrement. Dans ces conditions, ainsi que Ch. Pérez (48) l'a constaté pour les cellules de Calliphora erythrocéphala, les inclusions graisseuses se colorent uniformément en noir foncé,

Lorsque la larve approche de sa taille adulte, on voit apparaître dans les trabécules protoplasmiques séparant les gouttelettes graisseuses des inclusions d’une autre nature, colorables fortement par l’éosine ou l'orange (fig. 11 et 12, pl. ID. Pendant les premiers stades de la métamorphose on voit les réserves graisseuses disparaître progressivement et être remplacées par ces inclusions acidophiles de plus en plus grosses et nombreuses (fig. 6, pl. IV). Ch. Pérez pense que ces dernières inclusions, telles qu'il les a observées chez les larves de Calliphora, sont de nature albuminoïde.

Les cellules ainsi chargées de substances de réserve présentent des dimensions énormes, qui peuvent être plus de 150 fois supérieures à leurs dimensions initiales.

Lorsque les larves sont élevées sur des milieux artificiels très défavorables, tels que ceux constitués par la peptone seule ou la peptone additionnée de divers hydrates de carbone, les cellules adipeuses, bien que la larve s’accroisse quelque peu, restent au stade embryonnaire. Elles s’allongent légèrement, mais leur surface demeure sensiblement la même. Ces cellules, absolument dépourvues de réserves, forment de minces files, flottant dans la cavité générale des larves qui sont alors parfaitement transparentes (fig. 1, 7, 8, 9, pl. H).

Lorsqu'au contraire on ajoute à de semblables milieux de l’autolysat filtré de Levure qui, nous le savons, ne contient pas de graisse, on voit les cellules adipeuses s’accroître et se charger d’inclusions graisseuses. En l'absence de graisses alimentaires et surtout de lécithine, ce processus reste assez précaire, mais le dépôt de graisse est incontestable et les figures que l'on observe (fig. 5, pl. IF) sont la preuve indiscutable de l'élaboration synthétique des graisses par les larves de Drosophiles. Les inclusions graisseuses présentent parfois, dans ce cas, des

(1) J'ai utilisé le mélange fixateur de Borrel,

250 E. GUYÉNOT

aspects un peu spéciaux : à côté de gouttelettes parfaitement colorées en noir on observe, dans la même cellule, des vacuoles de teinte plus claire avec, à leur intérieur, une ou deux gouttelettes plus foncées. Comme une mauvaise fixation ne saurait être incriminée, il faut admettre que ces aspects correspondent à des temps différents du dépôt des réserves grasses dans les vacuoles cellulaires. Des observations identiques peuvent être faites dans le cas de milieux renfermant, outre l’autolysat, des hydrates de carbone, tels que le lévulose (fig. 4, pl. I).

Sur les milieux renfermant à la fois autolysat de Levure et lécithine, le développement des cellules adipeuses ne diffère pas sensiblement de ce que l’on observe sur les larves nourries de Levure. Je signalerai cependant lapparition précoce de grosses inclusions se colorant fortement par l’hématoxyline ferrique (her plait;

L’examen des cellules adipeuses des larves nourries avec des milieux artificiels renfermant, outre l’autolysat de levure, des graisses variées, permet de constater certains aspects dont l’étude approfondie pourrait jeter un jour intéressant sur la composition chimique des inclusions adipeuses.

Sur tous les milieux renfermant de la trioléine, de l'acide oléique, de l’oléate de soude, de la glycérine, mélangés différemment au point de vue qualifitatif et quantitatif, on constate que si quelques vacuoles sont entièrement noircies par l'acide osmique, la plupart présentent un aspect différent. Ces vacuoles sont d’une teinte sépia claire avec, à leur intérieur, des granulations noires plus ou moins abondantes, disposées, soit d’une façon quelconque, soit en couronne à la périphérie de la vacuole (fig. 2, 13, 14 pl. I). I semble que l'inclusion adipeuse soit d’abord constituée par une substance brunissant par l'acide osmique dans laquelle se déposeraient secondairement des gouttelettes noircissant entièrement par l’action du même réactif. L’accumulation et la fusion de ces granulations aboutit à la formation d’inclusions noireissant entièrement, ainsi que le montre l'examen des cellules de larves plus âgées et se développant particulièrement bien. Dans d’autres cas, on observe des cellules adipeuses bourrées de grosses inclusions noires qui se fusionnent en formant de véritables nappes adipeuses (fig. 3, pl. ID). Get aspect est caractéristique de la mise en réserve de substances grasses à point de fusion

peu élevée, car il s’observe notamment avec tous les milieux renfermant de la trioléine, sans autolysat.

Dans certains cas, la coloration des pièces, fixées au Borrel, par le rouge de magenta et le picro-indigo-carmin permet de préciser davantage le mécanisme d’élaboration de ces réserves. On trouve en effet dans les cellules (fig. 14 et 15, pl. IT) un mélange d'inclusions correspondant évidemment à des stades divers de la mise en dépôt des substances de réserve. À côté de gouttelettes entièrement noires, on voit des inclusions arrondies colorées en vert par le picro-indigo-carmin, d’autres sont vertes dans l’ensemble, mais présentent des granulations ou des croissants qui sont restés colorés en rouge par la fuchsine. Parallèlement à ces aspects, on observe des vacuoles de teinte brunâtre dans lesquelles on remarque des granulations ou croissants fortement colorés en noir par l’acide osmique. Si lon essaye d’interpréter ces résultats, il semble bien que le dépôt des réserves commence par celui d’une substance, peut-être albuminoïde, colorable en vert par l’indigo au sein de laquelle se déposent des granulations d’une autre substance basophile. La masse fondamentale serait ensuite imprégnée d’une substance graisseuse que l’acide osmique brunit seulement (lipoïdes?), et sur les granulations basophiles se déposeraient ensuite des graisses noircissant entièrement sous l’influence du fixateur.

Bien que la succession de ces différents temps reste hypothétique, les observations qui précèdent me paraissent établir indiscutablement que les réserves du corps gras larvaire ne sont pas constituées seulement par des graisses, mais représentent des produits complexes, albumino-lipoidiques ou albumino-gratisseux par exemple.

Ces phénomènes successifs ne sont observables que dans les conditions de nutrition très spéciales, réalisées par les milieux artificiels. Dans les conditions normales, la surcharge graisseuse est effectuée si rapidement et avec une telle intensité que c’est à peine si j'ai pu, étant averti, trouver parfois dans ce cas quelques figures analogues.

Conclusion. — Bien que je ne sois pas arrivé à réaliser entièrement le projet que j'avais formé d’élever des larves aseptiques sur des milieux nutritifs parfaitement définis, les expériences que

252 E. GUYÉNOT

J'ai réalisées m'ont cependant permis d'approcher de très près de la solution de ce problème.

La peptone que j'ai utilisée pouvant être facilement remplacée par un mélange des acides amidés qui entrent dans sa constitution, le seul élément qui reste à connaître et à préciser, pour obtenir des milieux parfaitement définis, est représenté par la substance indispensable (ou peut-être les substances) que renferment l’autolysat ou l'extrait alcoolique ou le simple bouillon de Levure et de foie.

Les fractionnements que j'ai opérés, basés sur les degrés différents de solubilité dans l'alcool des divers éléments extraits de la levure, m'ont permis de préparer une assez grande quantité de cette substance dont l'analyse et la caractérisation sont à faire. Encore reste-t-1l à savoir si le produit obtenu est pur, s'il représente la substance indispensable elle-même ou un mélange de corps parmi lesquels se trouverait celle-ci. Le problème de lélevage en milieu défini se trouve en définitive ramené à une question de chimie pure.

En attendant que cette étude nécessaire ait été réalisée, il n’est peut-être pas sans intérêt de rapprocher les conclusions auxquelles je suis arrivé de toute une série de recherches effectuées sur les Vertébrés et qui ont fourni des résultats comparables.

Les travaux auxquels je fais allusion sont ceux qu'a suggérés la recherche de létiologie du béribéri. Cette maladie, qui sévit dans les régions où l’on consomme couramment du Riz comme aliment fondamental, est aujourd’hui considérée comme étant due à l'emploi exclusif du Riz décortiqué, c'est-à-dire séparé de la pellicule transparente qui enveloppe le grain. Cette pellicule contiendrait une substance indispensable à la vie, dont la privation entrainerait des troubles consistant surtout en paralysies, modifications trophiques, aboutissant plus ou moins rapidement à la mort. Les recherches d'Eykmanx ont fait entrer l’étude de cette question dans une voie féconde en montrant que l’on pouvait produire, chez des animaux tels que les Pigeons, un véritable béribéri expérimental en les nourrissant avec du Riz décortiqué. Si on fait ingérer aux animaux déjà malades de l'extrait de balle de paddi, c’est-à-dire de l'enveloppe du grain de Riz, cet extrait présente un pouvoir curatif indiscutable et

les animaux guérissent. La substance curative contenue dans la balle de paddi se trouve aussi dans la Levure dont on peut lextraire par l'alcool et dans les tissus animaux. Elle est probablement très généralement distribuée dans les produits végétaux. W. Sreepp par exemple a montré que les Souris meurent quand on les nourrit exclusivement de pain soigneusement extrait à chaud par l’alcool, mais qu’elles vivent indéfiniment si on réadditionne le pain de son propre extrait alcoolique.

Ces constatations, qu'il est intéressant de rapprocher des résultats infructueux obtenus par tous les auteurs qui ont tenté de nourrir des organismes avec des substances très pures, paraissent établir que, d’une façon très générale, les animaux ne peuvent vivre, S'ils ne trouvent dans leur ration alimentaire quelque substance indispensable que contiendraient la plupart des aliments naturels.

Le problème de physiologie générale ainsi posé présente d’incontestables analogies avec celui devant la solution duquel je me suis trouvé arrêté. En ce qui concerne la nature des substances indispensables, d’intéressantes précisions ont été apportées par C. Fuxcx. Cet auteur a pu préparer, par fractionnements successifs de l’extrait alcoolique de balle de paddi ou de Levure, une substance à laquelle il a donné le nom de vitamine. Cette substance présente un certain nombre de propriétés communes avec celles que j'ai été amené à extraire moi-même de la Levure, notamment en ce qui concerne ses caractères de solubilité dans Peau et dans lalcool. La nature chimique de la vitamine est encore mal précisée. C. Funk a été amené à la considérer comme une base pyrimidique nouvelle. On peut aussi la rapprocher de Pallantoïne ou diuréide glyoxylique, st bien qu'elle se trouverait apparentée chimiquement aux constituants du noyau.

Il est possible que ce soit absence de la vitamine de Levure qui détermine chez les larves cet état de paralysie progressive, aboutissant à la mort que j'ai si souvent indiqué et qui rappelle dans une certaine mesure les troubles présentés par les animaux supérieurs.

Si cette hypothèse venait à être vérifiée, le problème de Falimentation arüficielle des organismes animaux élevés aseptiquement se trouverait définitivement résolu. Il serait dès lors facile

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d'introduire des variations connues dans un milieu nutritif dont toutes les conditions seraient précisées et de rechercher si les modifications ainsi produites seraient capables de retentir d'une façon suffisamment intense sur le patrimoine héréditaire des orga-

nismes.