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Après 60 heures, ou 3 jours au plus, à ces températures où notre milieu ne cessait de rester parfaitement solide, lés colomes de bacilles coli apparaisaient très nettement à la loupe en taches d’un beau bleu clair sur le fond rouge. Un œil exercé pouvait même très bien distinguer ces colonies au bout des trois jours sans le secours d’une loupe.

Nous avons cultivé à différentes reprises sur ce milieu une eau dans laquelle nous venions d’ensemencer à la fois du bacille d’Eberth et du bacille coli. (Nous avions à notre disposition des cultures pures de bacilles coli et des cultures pures de bacilles d'Eberth). Nous avons toujours vu soit au bout de 60 heures, soit au bout de 3 jours au plus les colonies de bacilles coli en bleu clair et les colonies de bacilles typhiques en rouge foncé se détachant très nettement vues à la loupe, mais qui, elles aussi, sont très visibles à l’œil nu pour peu qu'il soit exercé.

La numération suivant le procédé courant qu’on emploie sur culture sur gélatine était toujours d’une facilité extrême. Au bout d’une huitaine de jours, si les colonies sont peu nombreuses, on les compte une à une sur toute la plaque après avoir divisé la plaque en secteurs égaux par des traits au crayon gras. Si les colonies sont très nombreuses, on compte les germes de deux secteurs sensiblement aussi riches en bacilles. On fait la moyenne de deux numérations, on multiplie le chiffre par le nombre des secteurs et on rapporte la numération au centimètre cube qui est toujours pris comme unité.

Ce milieu que nous avons conçu et réalisé, bien que nous donnant les résultats que nous en avions espérés, ne nous donnait pas entière satisfaction. D'abord son homogénéilé laissait à désirer. Ensuite le milieu ne restant solide qu'à une température relativement basse, la culture se faisait à cette basse température, et nous pensions que de ce fait elle se faisaittrop lentement. Cherchant donc d'une part à nous rapprocher davantage d’une température optimum de culture et d'autre part cherchant à réaliser un milieu parfaitement homogène, l'expérience nous a conduits à modifier légèrement à la fois notre milieu et notre technique, Voici donc ci-dessous comment nous présenterons le résultat de notre travail personnel en vue de la recherche, de l'identification, et de la numération du bacille coli.

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Formule de notre milieu et technique personnelle : Peptone

D RE AE PAT US PA NÉ ERS CIRE, 30 gr.

D ART TPE LEA MERE PNEU Are D OT.

Latiose LME TES MEN PRES 15 gr.

GÉLOSE A AMPERS ET MRC AE PAPE SN A A5 gr.

Gén TER RE DEN 60 gr.

Fausdé SOU LR MST 900 ce.

Après dissolution et neutralisation, clarifier au blanc d'œuf, filtrer, ramener à 900 cc.

Ajouter solution filtrée contenant :

Rouser Conso RE TE NeN AS RER 2 gr.

Lessive de soude, dite des savonniers.. 1/2 cc. F0 AISÉE RENE ARE 4100 cc.

Mélanger. Répartir en boîtes de Roux à raison de 15 cc. par boîte. Stérilhiser à 105° pendant une demi-heure.

Au moment du besoin, faire liquélier au bain-marie à 42° environ. Ensemencer aseptiquement avec une pipette stérile l’eau à examiner, À cc. par exemple. Mélanger. Laisser solidifier horizontalement. Mettre à l’étude à 30°. Au bout de 24 heures, de 48 heures, ou si l’on veut de 60 heures, voir les colomies.

Les colonies de bacilles coli apparaissent très nettement et joliment sous forme de taches d’un beau bleu clair sur fond rouge. Les colonies de bacille typhique se détachent, elles aussi, très nettement en rouge foncé, mais sont beaucoup plus petites que celles du bacille coli.

Se servir d’une loupe pour plus de sûreté.

Nota : Si l’on pense que l’eau à examiner doit être très pauvre en bacille coli, on ensemencera 10 cc. sur 150 cc. de notre milieu stérilisé, momentanément liquéfié, et contenu dans un ballon. Après mélange, on coulera immédiatement en boîtes de Pétri préalablement stérilisées (en 10 boîtes si on a à sa disposition que des petites boîtes de 9 centimètres de diamètre).

On peut aussi centriluger longuement 50 ce. d’eau dans on tube centrifugeur effilé à sa partie inférieure, gradué et préalablement stérilisé avec une coiffe de papier filtre. La centilugation opérée, on soulirera au moyen d’un siphon stérike la partie supérieure de l’eau jusqu'à ce qu'il ne reste qu'un volume de liquide compris entre deux et un centimètre cube. Pour ensemencer, on versera aseptiquement 15 à 20 cc. de notre

milieu liquéfié dans le tube centrifugeur. On mélangera énergiquement par agitation, le tube étant bouché par une rondelle de caoutchouc stérile maintenue par le pouce et on coulera le tout immédiatement en boîte de Pétri. (Centrifuger simultanément dans 2 ou # tubes : ainsi la recherche porterat-elle sur 100 ou 200 cc. de la même prise d’eau).

Si l’eau est très chargée de matières minérales, notamment d'aluminium et de fer à l’état d’oxydes ou d’hydrates, avant de centrifuger, on filtrera sur filtre papier stérilisé pour se débarrasser de la plus grande partie de ces substances en suspension, cette simple filtration ne pouvant modifier la flore bactérienne. Ù

IT va sans dire que dernier cas ne se présente jamais dans l’eau de mer. Nous ne signalons le fait que pour montrer que notre technique a une valeur générale.

Nous avons parlé plus haut du bacille d’Eberth. Nous tenons à dire que c’est tout à fait incidemment, car l’étude du bacille d’Eberth ne rentre à aucun degré dans le cadre du modeste travail que nous nous sommes tracé. Toutefois, vu l'intérêt qu'il peut y avoir éventuellement à cultiver simultanément le bacille coli et le bacille tYphique nous avons cru devoir nous assurer si la différenciation sur notre milieu pouvait s’opérer aisément et nous avons eu da satisfaction de constater qu'elle se faisait admirablement : colonies de bacilles coli en bleu clair, colonies de bacilles typhiques en rouge foncé.

Nous devons signaler aussi que nous nous sommes servis de plaques de Roux et non de boîtes de Pétri pour les examens d’eau parce que dans ces dernières il est très difficile, simon impossible, de mélanger convenablement l’eau à analyser avec le milieu dont nous nous servons. [I est bien entendu, toutefois, que notre milieu, à raison de 15 ec. par boîte de Pétri, et en ayant soin de garnir intérieurement le couvercle de la boîte d’une rondelle de papier filtre, constitue un milieu solide particulièrement favorable pour l’ensemencement en stries, et qui, soit dit en passant, semble même spécialement désigné pour la recherche et, le cas échéant, la numération des bacilles coli et typhiques dans les matières fécales.

Signalons enfin, et cela est très important, que sur noire milieu tous les germes de l’eau cultivent. Ainsi pouvons-nous faire directement et du même coup, non seulement la numération du bacille coli, mais la numération des autres colonies.

Ainsi et pour conclure :

1°) La méthode de Vincent qui est la méthode classique en France, offre les inconvénients suivants :

a) milieu liquide:

b) présence d’un antiseptique; c) culture à température élevée.

2°) La méthode de MM. Diénert et Elrillard, modification de la méthode américaine de Teague, a aussi ses inconvénients a) complexité et difficulté de la mise en œuvre de la méthode; b) ensemencement d'un culot d’alumine ne pouvant contenir la totalité des bacilles coli du volume d’eau utilisé.

3°) Le milieu de Chandelier excellent et même tout à fait remarquable par ailleurs ne peut se prêter à la recherche directe du bacille coli dans une eau.

4°) Notre milieu offre les avantages suivants : {

a) milieu solide; b) absence de tout antiseptique; c) culture à basse température.

Ajoutons que notre milieu, qui se présente d'une façon parlaitement homogène, nous à toujours donné satisfaction puisque toujours en concordance, quant à la recherche et à la numération du bacille coli, avec les deux méthodes : la méthode française en milieu liquide et phéniqué, et la méthode américaine en milieu solide et sans antiseptique. À ce sujet, notons en passant que l'expérience nous a montré maintes et maintes fois que les méthodes françaises et américaines donnent des résultats identiques pour la seule recherche du bacille coh «t, pour sa numération, des résultats sensiblement égaux. I n’en reste pas moins que notre méthode s'affirme comme préférable. puisqu'en outre elle permet de cultiver, de différencier et de numérer les divers germes d’une eau ensemencée directement sur un milieu n'ayant aucun pouvoir inhibiteur.