ER GR RE
Nous dirons tout d'abord que nous n'avons pas une techni: que. Suivant les différentes familles de poissons et même sur des poissons différents appartenant à la même famille nous avons dû modifier notre mode opératoire pour le mieux adapter au poisson que nous examinions. Mais quelque soit la modifcation de détail que nous apportions à notre technique, celle-ci procède toujours d’un principe imrauable : opérer d’une façon rigoureusement aseptique.
Pour cela, nous nous sérvions d’instruments (paires de ciseaux, rasoir, aiguilles lancéolées, aiguilles pointures, scalpels, fortes épingles, pinces à dissection, sondes cannelées en acier, pinces fines, pinces à pansements à fenon, spatules, ciseaux droits à tenon, stvlets acier, lancettes, bistouris, etc.) stérilisés à 180° au four Pasteur. Le ventre était ouvert aseptiquement (en commençant à ouvrir un peu plus haut que l’anus de facon à ne pas toucher l’intestin) au moyen de fins ciseaux et de bistouris. Puis les parois de l’abdomen maintenues écartées, nous isolions l'intestin des autres viscères sans le déchirer au moyen de la sonde cannelée. À l’endroit qui nous paraissait le plus favorable nous appliquions — juste le temps d’y toucher — la lance rougie de l'aiguille lancéolée. Avec l'aiguille pointue stérile nous percions un trou dans cette petite portion du tube intestinal stérilisé par le fer rouge et immédiatement nous enfoncions dans ce trou une pipette Pasteur stérile. Par aspiration, nous vidions le contenu intestinal ef nous ensemencions directement! soit dans notre eau peptonée soit sur notre milieu solide. Quand il s'agissait d’intestins de gros poissons, au lieu de pipette Pasteur effilée, nous prenions une pipette ordinaire, toujours parfaitement stérile.
Pour les poissons que nous avons énumérés, avant d'ouvrir l'abdomen, nous avons passé sur leur face ventrale une large lame de fer portée au rouge.
a) Chichard : intestin vidé à l’aide d’une pipette ordinaire, contenu ensemencé.
b) Merlan : le ventre ouvert nous a montré un intestin rompu dans la cavité générale, vraisemblablement par décompression vu la profondeur d’où le poisson a été brusquement tiré. !
Nous aspirons le liquide répandu dans la poche péritonéale. Nous ensemençons.
RPO TES
c) Merlus : Nous avons vidé par aspiration la poche stomacale à l’aide d’une pipétte ordinaire. Ensemencement.
d) Trigle : Intestin vidé à l’aide d'une pipette. Ensemencement.
e) Tacaud : Contenu intestinal ensemencé.
Ces différents ensemencements sont faits sur eau peptonée le 15 mai et mis à l’étuve entre 15 et 16 heures. Le 16 mai, à la même heure, culture dans tous les ballons. À partir de ce moment, arrêt des étuves par suite du dérangement du compteur. électrique jusqu'au 18 mai au matin.
Le 19 mai, à 9 heures du matin, nous repiquons nos cinq cultures sur eau peptonée phéniquée concentrée. Le 20 mai, à 18 heures :
Milieu Chichard a cultivé.
Milieu Tacaud a cultivé.
Les trois autres milieux sont parfaitement clairs.
Réactions de l’indol sur cultures Chichard et Tacaud sont négatives.
Nous ensemencons immédiatement cultures Chichard et Tacaud sur gélose lactosée tournesolée et sur bouillon glucosé.
Le 22 mai pas de fermentation ni de la gélose Jlactosée n1 du bouillon glucosé.
D'autre part, l'examen microscopique des cultures en eau peptonée phéniquée qui présentent à leur surface de petits fragments de voile, nous avait montré des batonnets longs, peu mobiles, mais prenant je Gram.
Ces résultats vérifiés et confirmés sur notre milieu solide nous permettent de conclure à l’absence de bacille coli dans l'intestin des cinq poissons que nous avons examinés.
Le 22 mai, nous avons à nouveau examiné SIX POISSONS, Crevés depuis quelques heures, qui avaient été pris dans Ja même région de pêche que les précédents et apportés de la même façon :
1°) Un merlus.
2°) Un grondin gris.
3°) Un rouget (Mullus barbatus. C..et Val.).
4°) Un chichard.
5°) Un tacaud.
6°) Un œillet (Pagellus erythrinus. L.).
Rien de particulier à signaler, sinon que l'intestin du rouget était littéralement bourré de fente verte.
L'’ensemencement du contenu intestinal de ces différents poissons a été fait sur eau peptonée ce 22 mai :
Le 25 mai : A:
Milieu n° { parfaitement clair.
» 2 légèrement trouble.
D XX à CO
Repiquage en eau peptonée phéniquée des milieux 2, 3, 4, 5 et 6.
Le 27 et le 28 mai on ne peut que constater l’absence de toute culture en eau peptonée phéniquée.
Mêmes résultats négatifs sur notre milieu solide
Quinze jours après :
Un merlan.
Un trigle, nous ont été apportés encore de la même région de pêche, mais cette fois vivants dans l’eau de mer prise sur le lieu de la pêche et contenue dans une vaste bassine.
Le contenu intestinal a été ensemencé sur eau peptonée.
Culture après 24 heures. Après passage sur eau peptonée phéniquée on constate après 24 heures et 48 heures et davantage, un milieu parfaitement clair. Résultats encore confirmés au point de vue de l’absence du bacille coli sur notre milieu solide.
Des poissons qui ne vivent qu'au grand large et qu’on ne trouve pas dans le Bassin d'Arcachon (ou tout à fait exceptionnellement), comme ceux que nous venons d'examiner, passons à ceux qu'on ne trouve pas en haute mer et qui ne sortent guère du Bassin d'Arcachon.
Cela devient beaucoup plus commode pour nous. Nous pouvons pêcher nous-mêmes, joignant ainsi l’utile à l’agréable.
Le 5 mai, près du Banc de Pinau, nous avons eu la bonne fortune de prendre des loches (Gobius niger L.). Ces loches ont été jetées, dès que pêchées, dans une bassine très propre, qui a d’ailleurs été flambée avant d’être remplie d’eau de mer sur le lieu de la pêche. Elles ont été portées (dans la bassine recouverte d’une plaque de verre) au laboratoire et examinées vivantes séance tenante.
Pour les loches nous avons légèrement modifié notre modus operandi.
Fixées le dos au liège, la face ventrale a d’abord été frottée avec un tampon de coton imbibé d’éther, pour enlever le mucus, puis badigeonnée d’une seule et mince couche de teinture d’iode, de facon à obtenir un champ opératoire sûrement stérile.
L'intestin est vidé à l’aide de pipettes Pasteur effilées stériles.
Quatre loches sont examinées.
Loche n° 1 : Contenu intestinal présente, outre de la fiente, une tête entière de petite crevette.
Loche n° 2 : Contenu intestinal présente, outre un peu de fiente, un fragment de corps de crevette.
Loche n° 3 : Intestin bourré de fiente.
Loche n° #4 : Intestin bourré de fiente.
Ces différents contenus intestinaux ont été chacun ensemencés sur eau peptonée à 3 %. Mise à l’étuve à 36°.
Le 6 mai : N° 1 Milieu parfaitement clair.
N° 2 Milieu trouble.
N° 3 Milieu très légèrement trouble.
N° % Milieu très légèrement trouble.
Le 7 mai : N° 1 Très légèrement troube.
N° 2 Trouble avec fragments très nombreux de voiles.
N° 3 Trouble avec fragments abondants de voiles.
N° 4 Trouble.
Ces quatre cultures-sont ensemencées sur
Gélose lactosée tournesolée ;
Bouillon glucosé ;
Lait tournesolé ; |
Eau peptonée phéniquée.
. Réactions de l’indol sur chacune des cultures en eau peptonée : négatives.
L'examen microscopique des cultures en eau peptonée montre des bacilles mobiles prenant le Gram.
Le 8 mai : N° 1 Trouble en eau peptonée phéniquée.
N° 2 Parfaitement clair.
Le 9 mai : Sur N° 1 réactions de l’indol en milieu peptoné
phéniqué = 0.
CY
Quant aux quatre cultures ensemencées le 7 mai sur gélose lactosée et bouillon glucosé, elles ne donnent pas de fermentation. Avec le lait, pas de coagulation.
Conclusion : Sur les quatre loches examinées, aucune ne présente de bacille coli dans son contenu intestinal.
Nous avons refait la même expérience sur d’autres loches vivantes prises à l'extrémité de l’embarcadère d'Eyrac, loches que nous avons placées dès que pêchées dans un bocal rempli d’eau de mer. Sur six loches que nous avons examinées, six résultats négatifs au point de vue bacille coli dans l'intestin.
Entre ces loches prises en liberté dans le Bassin d'Arcachon et les loches que nous allons prendre à l’épuisette dans un bassin de l'aquarium, trouverons-nous une différence dans la recherche que nous poursuivons ?
Le 4 mai, nous prenons dans le bassin de l’aquarium cinq loches. Ces loches avaient d’abord été pêchées par les marins de la Station Biologique non loin de l’embarcadère d’Eyrac. Elles sont dans ce bassin depuis plus d’un mois. L'eau du bassin n’a pas été renouvellée depuis cinq semaines environ.
Ces loches examinées nous présentent pour la plupart, au contraire de celles qui vivent libres en mer, des intestins vides de fiente ou à peu près. Sans doute ces poissons ne trouvent-ils pas dans l’eau du bassin de l’aquarium la nourriture qui leur est nécessaire.
Loche N° 1 : Intestin sans fiente. Nous ne puisons à la pipette Pasteur qu’une sorte de suc noirâtre. Ensemencement.
Loche N° 2 : Intestin sans fiente. Nous ne puisons à la pipette Pasteur qu'une sorte de suc noirâtre. Ensemencement.
Loche N°3 : Intestin sans fiente. Nous ne puisons à la pipette Pasteur qu'une sorte de suc noirâtre. Ensemencement.
Loche N° 4 : Outre ce suc noirâtre, nous prélevons dans cet intestin une masse verte, serrée, semblant provenir de petites algues ou fragments d'algues comprimés. Le tout est ensemencé.
Loche N° 5 : Intestin bourré de fiente. Ensemencement.
Les ensemencements sont tous faits sur 50 cc. de notre eau peptonée phéniquée concentrée, à la quelle nous avons ajouté 50 cc. d’eau stérile.
JU de NS
Mise à l’étuve à 42°.
5 mai : Milieux 1, 2, 3, 4 parfaitement clairs. Milieu 5 présente un trouble net.
mai : Milieux 1, 2, 3, 4 parfaitement clairs. Milieu 5 trouble.
Sur cette dernière culture, réactions de l’indol = 0. Nous repiquons sur gélose simple.
[en]
1 mai : L'examen microscopique direct äe la culture sur gélose simple montre des bacilles très nombreux légèrement mobiles ét, clés qui prennent le Gram admirablemeni.
Repiquage sur gélose lactosée tournesolée, sur bouillon glucosé.
sur lait tournesolé.
(ge)
mai : Nouvel examen microscopique de la culture sur gélose simple : exactement identique à celui du 7 mai. Gram positif.
} mai : Culture sur gélose lactosée tournesolée = 0, sur bouillon glucosé ........ EU:
SUP HAT ALOUTDESOIE NS ENTER al)
Conclusion : Sur les cinq loches examinées aucune ne présente de bacille coli dans leur contenu intestinal.
Le 6 mai, nous renouvellions l'expérience sur trois autres loches prises encore dans le bassin de l'aquarium dans lequel se trouve la même eau inchangée.
Cette fois nous modifions encore notre di Désirant qu’on ne puisse nous objecter qu’en puisant dans l'intestin de ces loches avec une pipette Pasteur on ne vide qu'une partie de cet intestin, ou encore que des coli peuvent se trouver comme fixés le long de la paroi interne du tube intestinal, et qu'ainsi ils peuvent nous échapper, nous avons ensemencé, non plus le contenu intestinal, mais l'intestin tout entier coupé en troncons. Bien entendu, nous avons dû isoler aseptiquement avec les plus grandes précautions l'intestin, puis, maintenu avec des pinces stériles, nous l'avons, avec des ciseaux stériles, secfionné en trois ou quatre tranches qui tombaient dans un ballon contenant soit l’eau peptonée, soit l’eau peptonée phéniquée. - Loche N° 1 : Pas d’excrément dans l'intestin. Suc noirâtre. Intestin entier coupé en morceaux. Ensemencement sur 10 cc. d’eau peptonée. Mise à l’étuve à 56°.
ONF ASE
Loche N° 2 : Inteston entier coupé en cinq tronçons. Ensemencement sur 10 ce. d’eau peptonée.
Loche N° 3 : Intestin entier coupé en trois morceaux. Ensemencement sur eau peptonée phéniquée.
Le 7 mai: N° 1 Très légèrement trouble.
N° 2 Très trouble, noirâtre, odeur fécaloïde, la surface du milieu présente des fragments peu nombreux de voiles blanchâtres.
N° 3 Trouble.
Le 8 mai . N° 1 Légèrement trouble.
N° 2 Très trouble, noirâtre, odeur fécaloïde accentuée.
N° 3 Très trouble.
Ensemencement du N° 1 et du N° 2 sur eau peptonée phéniquée.
Ensemencement des N°° 1, 2 et 3 sur gélose lactosée tournesolée, sur lait, sur bouillon glucosé.
Réactions de l’indol pour le N° 3 en milieu peptoné phéni- JUSTE MU,
Le 9 mai : Les ensemencements des trois cultures sur gélose lactosée et bouillon glucosé ne donnent rien. Avec le lait pas de coagulation.
Le 11 mai : N° 1 Pas de culture en milieu peptoné phéniqué.
N° 2 Trouble en milieu peptoné phéniqué.
Par ailleurs, les cultures sur gélose lactosée tournesolée sont :
Négatives avec le N° 1,
Positives avec le N° 2 (forte fermentation),
Négatives avec Le N° 3.
Sur bouillon .glucosé :
Négatives avec le N° 1, Positives ave le N° 2, Négatives avec le N° 3.
Sur lait tournesolé :
Négatives avec le N° 1, Positives avec le N° 2 (coagulation totale avec virage au rose), Négatives avec Le N° 3.
Réactions de l’indol sur N° 2 et N° 3 en milieu peptoné phéniqué = (0.
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L'examen microscopique des cultures N° 3 montre un bacille mobile prenant le Gram.
L'examen microscopique des cultures N° 2, soit sur gélose simple, soit sur gélose lactosée, montre un bacille mobile, très abondant, ne prenant pas le Gram.
D'où nous concluons que la loche N° 1 et la loche N° 3 ne contiennent pas de coli dans leur intestin, tandis que la loche N° 2 contient du bacille coli en abondance.
Le 6 mai nous prenons dans le bassin de l'aquarium une mule (Mugil cephalus Risso).
Nous trouvons un intestin vide. À la pipette Pasteur nous ne retirons guère que du sang.
Ensemencement sur 10 cc. d’eau peptonée
Mise à l’étuve à 36°.
Le 8 mai : Milieu très légèrement trouble.
Repiquage sur l’eau peptonée phéniquée.
z Réactions indol en eau peptonée = 0.
Le 11 mai : Milieu peptoné phéniqué parfaitement clair.
D'où pas de bacille coli dans l'intestin de la mule.
Le 11 mai : Quatre loches pêchées, entre autres poissons, par les marins de la Station Biologique, près du banc de Pinau, séjournent depuis quelques heures seulement dans le bassin de la Station au moment où nous les prenons.
Trois sont examinées comme précédemment, c’est-à-dire que l'intestin a été ensemencé en tronçons en eau peptonée phéniquée et en eau peptonée. 6
Loche N° 4 : Cinq tronçons dans eau peptonée phéniquée: Etuve à 42°.
Loche N° 2 : Quatre tronçons dans eau peptonée. Deux troncons ont été écrasés par une spatule stérile à la surface intérieure du col du ballon et récupérés par le milieu par une ou deux agitations de celui-ci. Etuve à 36°.
Loche N° 3 : Deux tronçons. Ensemencement sur eau peptonée. Nous fimes glisser un des tronçons à l’intérieur du col du ballon de telle sorte qu’il puisse adhérer à la paroi interne du col et là nous le hachâmes avec un bistouri stérile avant de l’introduire dans le milieu. Etuve à 36°.
Le 43 mai : Loche N° 1 Milieu parfaitement clair.
Loche N° 2 Milieu trouble.
Loche N° 3 » »
