I. — Culture

Le bacille coh est un bacille à grande vitalité, qui dans la nature résiste à toutes les intempéries. C’est ce qui explique qu'il pousse dans tous les milieux usuels et à toutes les tempé ratures de culture. EH est en outre à la fois aérobie et anaérobie

Parmi les différents milieux de culture qui se présentent à notre choix, nous avons tout d’abord adopté le milieu généralement admis en France, qui met à profit la propriété qu'a le bacille coli de vivre dans un milieu légèrement phéniqué à la température de 42°, ce qui du même coup élimine un grand nombre d’autres bactéries. Nous nous sommes arrêtés pour l’eau peptonée et l’eau peptonée phéniquée concentrée aux formules suivantes

Eau peptonée Peptone Chapoteaut ..::............. 10 gr.

SEL UN ANAL 5 APETE ce CENTRE 0 gr.

Eau peptonée ....... A en D dl à 9 ‘top rlitre:

Ve 120—

On fait dissoudre. On alcalinise très légèrement avec une solution de lessive de soude à 1 p. 100 avec du papier tournesol comme réactif. On filtre. On ramène au litre avec eau commune et on répartit en ballons de 125 et 250. On stérilise ensuite pendant 20 minutes à 120°.

Eau peptonée pheniquée concentrée

PeptoneChapoteaut Fete cn 60 gr.

SOL TA TIN AP er a ere ere 11 gr.

FAT OPINA TE) ER RE ee 1000 cc. Solution acide phénique à 6 p. 100 .. 40 cc.

Alcaliniser avec lessive de soude à 1 p. 100. Filtrer.

Dans une bassine, nous placons la peptone sèche, le sel marin, et l’eau. Nous portons à l’ébullition. Nous faisons bouilir pendant 20 minutes. On laisse refroidir. On ajoute alors 40 cc. de solution acide phénique à 6 p. 100, cette solution étant préparée par dissolution de 24 gr. d'acide phénique neigeux dans 400 gr. d’eau distillée (Notre eau peptonée phéniquée concentrée contient done de ce fait 2 gr. 40 d'acide phénique par litre). On mélange. Puis on alcalinise très légèrement avec de la lessive de soude. Nous nous sommes servis de la solution suivante :

Lessive de soude ..... SR NE MAO à 2 gr.

HAUTS en SPe REt Pree 200 gr.

Il est facile au moyen d’un agitateur et de papier tournesol rouge et bleu d'arriver à avoir, avec cette solution, un milieu neutre ou très légèrement alcalin. Ceci fait, on filtre sur papier dans un ballon et on complète à 1000 cc. avec de l’eau ordinaire.

Puis, par siphonnage au moyen d’un tube de verre recourbé dont l’extrémité hors du ballon est munie d’un court tube de caoutchouc portant une pince de Mohr, on mesure avec une éprouvette 50 cc. d’eau peptonée phéniquée concentrée que l'on verse dans des ballons. Et immédiatement — de crainte d’une culture qui pourrait commencer —— on porte ces ballons à l’autoclave à 120° pour stérilisation.

Nous devons dire que dans ces préparations, nous avons tenu compte de l’observation de Molliex Analyse bactériolo-

gique des eaux potables. et que nous nous sommes assurés de la qualité de la peptone employée. Nous savons en effet, qu'entre autres microbes le bacille coli forme de l’indol aux dépens des peptones contenus dans les milieux de culture, l’indol résultant de la décomposition du tryphtophane des matières albuminoïdes. Or, « certains milieux donnent la réaction de l’indol à blanc, c'est-à-dire qu'ils renferment de l'indol préformé et donnent le virage en l'absence de toute culture ». Nous avons donc fait la réaction de l’indol selon l’enseignement de M. le Professeur Mandoul (Enseignement de microbiologie du Professeur Mandoul. Notes et techniques recueillies par R. Girard...) « avec deux tubes témoins; l’un qui n'aura pas été ensemencé, l’autre qui aura été ensemencé avec une culture connue de colibacille. Le premier tube indiquera si la peptone employée seule ne contient pas d’indol, le deuxième si cette peptone est capable de donner de l’indol en présence du cohbacille ».

A ce sujet, la peptone sèche de Chapoteaut ainsi que la peptone médicinale de la Pharmacie Centrale, nous a toujours donné entière satisfaction.

Ainsi nous avons cultivé le bacille coli dans les milieux peptonés et peptonés phéniqués indiqués ci-dessus, étant entendu cependant que nous avons toujours dédoublé l’eau peptonée phéniquée concentrée. S'il s'agissait d’eau de mer, par exemple, et que nous estimions qu'elle devait être très pauvre en bacille coli du fait de l’endroit du prélèvement, nous mélangions à 50 cc. d’eau peptonée phéniquée concentrée 50 cc. d’eau de mer et nous mettions le tout à l’étuve à 42°. Si l’eau de mer était prélevée près du rivage, non loin des habitations, nous ensemencions 10 cc. par exemple sur 50 cc. d’eau peptonée phéniquée concentrée et nous complètions à 100 cc. en ajoutant 40 cc. d’eau de mer stérile ou 40 cc. d’eau distillée stérile.

De toute facon donc l’eau peptonée phéniquée concentrée était diluée de moitié et de ce fait le milieu cultivant à l’étuve contenait À gr. 20 d'acide phénique par litre. Cela n’est pas inutile à signaler car au cours de cet exposé sur les techniques de la recherche et de l'identification du bacille coli notre attention sera attirée sur la teneur des milieux en acide phénique.

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