II. — Identification

Pour situer immédiatement la question, citons cette phrase de M. le Professeur agrégé André Philibert : « L'espèce coli est une, mais elle présente suivant les conditions diverses dans lesyuelles elle se trouve (saprophyte pathogène de l’homme et des animaux, milieux organiques et inorganiques) des variétés adaptives qui n’ont qu’une fixité temporaire et sont transformables les unes dans les autres ». (Manuel de bactériologie médicale... 1928).

Nous voyons done d’abord que le bacille coli n’est pas un microbe nettement et clairement défini par une forme et des caractères fixes et immuables. En réalité, il n'y a pas un bacille coli mais il en existe plusieurs variétés, on pourrait dire plusieurs races qui se distinguent principalement par leur mobilité et leurs propriétés fermentatives. Il y a plus : suivant les milieux nouveaux où il est placé, le coli prend des formes adaptives nouvelles et on a pu identifier des coli immobiles (Jules Renault, Gilbert et Lion), des coli ayant perdu l’action sur le lactose, des coli ayant perdu le pouvoir indoligène, des coli faisant liquéfier la gélatine, etc. « Il n’est pas jusqu’à la production de capsule qu’on n'ait trouvé chez certains coli immobiles et que l’on n'ait pu faire apparaître expérimentalement dans des cultures de coli. » (Manuel de bactériologie médicale, André Philibert.)

Dans ces conditions et devant des caractères aussi nombreux et surtout aussi inconstants, il n’est pas surprenant que nous n’ayons pour le diagnostic du bacille coli que l’embarras du choix des procédés. Chaque auteur préconise les siens et chacun a d'excellentes raisons à faire valoir. Nous avons pensé qu'il fallait nous en tenir à la recherche d’un très petit nombre de caractères, mais nous avons choisi les caractères fondamentaux, ceux sur lesquels tous le monde est d'accord. Ces caractères qui en tant qu’essentiels ne sont contestés par personne et auxquels nous sommes restés obstinément fidèles sont les suivants :

1°) bâtonnet mobile;

2°) Gram négatif;

3°) formant indol sur milieu peptoné;

4°) faisant fermenter la gélose lactosée tournesolée avec dégagement de gaz;

GRÈEE À LP

5°) coagulant le lait et faisant de plus virer au bleu Île lait tournesolé;

6°) taisant fermenter le bouillon glucosé avec dégagement de gaz.

Pour chacun de ces caractères, il y a lieu de donner quelques explications.

Mais tout d’abord plaçons-nous au point de départ.

Nous ensemençons sur eau peptonée, et si après 48 heures de séjour à l’étuve à 36° nous constatons un trouble nous ensemençons à nouveau sur eau peptonée phéniquée concentrée. Après 48 heures de séjour à l’étuve à 42° nous constatons soit un trouble si léger soit-il, soit un liquide parfaitement clair. Dans ce dernier cas, pas de bacille coli et il est une fois de plus démontré que l’acide phénique et la température de 42° sont des conditions dvsgénésiques pour de nombreux germes banaux.

S'il y a trouble, nous commençons par faire l'examen microscopique :

1°) Examen microscopique : Une goutte de culture entre lame et lamelle, colorée avec une goutte de solution aqueuse d’éosine à 1/200° nous suffisent à voir la présence de bâtonnets et à discerner au bout de quelques instants leur mobilité.

2°) Gram : Puis nous faisons un Gram : coloration de la préparation par le vioket de gentiane pendant 30 à 40 secondes, traiter sans laver par solution iodo-iodurée (Lugol), jusqu’à ce que le liquide devienne brun noir puis par l’alcool à 95° jusqu’à ce que le violet ne diffuse plus, laver rapidement à l’eau, puis pour recolorer de fond de la préparation, faire agir la solution d’éosine à 1/200° quelques secondes. Sécher.

Examinés à l'objectif à immersion, nous voyons si les bâtonnets sont colorés en violet. Si oui, les bâtonnets prennent le Gram et il est à présumer qu'il ne s’agit pas de bacilles coli Si non, si les bâtonnets sont colorés en rose, nouscontinuons à pousser notre investigation pour nous assurer que nous avons à faire à du bacille coli.

À ce sujet, nous devons dire que souvent nous avons vu à l'examen microscopique direct des bâtonnets longs et mobiles mais qui prenaient le Gram et qui ne répondaient d’ailleurs à

aucun des caractères énumérés plus haut. Il s'agissait de bacille sublil ainsi que nous avons pu le constater par son pouvoir de liquéfier la gélatine.

L'examen microscopique et le Gram étant faits nous passons à la réaction de l’indol.

3°) Réaction de l'indol : À 10 cc. de culture en eau peptonée phéniquée âgée de 48 heures au moins nous ajoutons 2 cc. du réactif suivant : Solution nitrite de soude à 4/530° ...... 2:cc- HCL'DUr ITS DE LR EN Re 200 cc.

Il se produit une coloration rose plus ou moins intense, caractéristique de l’indol. Quelquefois la réaction tarde à se produire ou est douteuse. Alors nous employons un autre réacüf, extrêmement sensible, dû à Erhich et dont la composition est la suivante :

Paradiméthylamidobenzaldéhyde ..... 2 gr.

A LCOGL A OS ENEAE CHERE RRET EE 190 gr.

Acide chlorhydrique. pur .®:..# A0 ;CE:

À 10.cc. de da culture on ajoute 2 cc. de ce réactif puis 2 cc. d’une solution saturée de persulfate de potasse. On fait couler les réactifs le Tong de la paroi du tube en mélangeant le moins possible avec la culture : il se développe à 1a zone de séparation des liquides, une coloration rose due à la présence de l’indol. Cette méthode, suivant les auteurs, permettrait de caractériser l’indol dans des cultures de 2 heures et pourrait l’y déceler, pour une teneur de 1/5.000.000°. C’est dire sa sensibilité. D'autre part, il semble bien qu’elle soit spécifique de l’indol, car elle ne donne aucune coloration avec les composés voisins. Ainsi dans le cas de différentes espèces bactériennes donnant une réaction légère avec le réactil nitriteacide chlorhydrique et rien avec celui d’'Erlich la distillation a montré qu'il s'agissait de scatol.

Il nous est arrivé très souvent dans nos recherches de ne pas avoir la réaction de l’indol ni par le réactif nitrite de soude-acide chlorhydrique ni par le réactif d’Erlich alors qu'il s'agissait certainement de bacille coli, vu l’ensemble de .ses autres Caractères. Ce qui confirmerait cette opinion généralement admise qu'un bacille coli est d'autant moins indologène qu'il a davantage séjourné dans l’eau.

4°) Fermentation de la gélose lactosée tournesolée: Préparätion de la gélose lactosée tournesolée que nous employons :

Peptone sèche Chapoteaut .......... 20

gr.

RE UT NA AR ER SEAT DÉC PRET D gr.

FEVER ENTER PONT NS RAS EURE +. 20 gr.

GO LOSC O DDR RER PPT LL 20 gr.

Teinture de-tournesol .............. 20 cc.

STONE TINIR TRE. 1000 cc.

Dans une bassine on met eau, peptone, sel marin et lactose. Un porte à l’ébullition. On fait bouillir 10 minutes. Puis on agite la gélose coupée en agitant. Et on continue à faire bouilhr 10 minutes encore en agitant continuellement. On laisse relroidir. On alcalinise légèrement avec notre solution de lessive de soude. Puis on filtre sur papier Ghardin dans un ballon. Il est prudent de mouiller au préalable le fiftre avec une eau très chaude. Pour éviter la difficulté de la filtration, nous employons ce procédé, que nous donnons pour ce qu'il vaut, de placer filtre et ballon dans l’atmosphére encore chaude d’un autoclave. La filtration qui est toujours longue se fait alors bien plus facilement et bien plus vite.

La filtration faite, on ajoute la teinture de tournesol et on complète à 1000 cc. avec de l’eau très chaude. Puis on répartit directement en tubes droits par siphonnage trois travers de doigt (soit 7 centimètres environ), en ayant soin d’enfoncer la pointe du siphon très avant à l’intérieur du tube pour éviter le dépôt du milieu sur da paroi supérieure du tube à endroit où sera le bouchon de coton. Ces tubes bouchés au coton, où la gélose lactosée tournesolée se prendra vite en gelée, sont portés à l’étuve à 115° pendant 20 minutes.

Pour l’ensemencement, nous pratiquons par piqüres profondes. Nous mettons, à l’aide d’une pipette stérile 1/2 ce. environ de culture sur le milieu puis nous enfonçons le fil de platine à différentes reprises jusqu’au fond du tube tenu 1mcliné.

On met à l’étuve à 42°. Le lendemain ou 48 heures après, si le résultat est positif, on voit de grosses bulles gazeuses très nettes, résultat de la fermentation, qui se font jour dans la masse gélatineuse et le milieu devient rose.

5°) Coagulation du lait : Nous prenons du lait frais que nous laissons 24 heures au frigidaire. Nous l’écrémons. Nous l’alca-