EXPÉRIENCE II

SoIUHON A ITU IRONEUTNP MOUSE RTE 5oce Liquide de macération d'aspergillus (filtré à la

DOUTE) PE re NN SRE ‘95 Hluoruresde QUE OR TR NE ER 0,70

Température 360-380. Durée de l'action 24 heures. Quantité p. 100

d'inuline transformée 34,9

La solution fermentaire en passant à travers une bougie Chamberlond a done perdu environ 15 pour 100 de son énergie chimique. Parmi les ferments contenus dans le liquide de macération d’aspergillus, linulase n'est d’ailleurs pas la seule diastase dont l'activité chimique diminue dans une certaine mesure par le passage à travers la bougie Chamberland. Tout récemment Hérissey (1) a observé le même fait pour l'émulsine.

Ce sont là des faits qui sont intéressants à consi-

(1) Hérissex, Recherches sur l'émulsine, Thèse, Paris, 1899.

dérer, soit au point de vue de la constitution physico-chimique des diastases, soit au point de vue de la théorie œénérale des actions diastasiques. On admet en effet que l’un des caractères généraux essentiels des diastases

(1-20 Ve “ P > .

c’est la valeur très petite du rapport Pi qui existe entre

la quantité p de la diastase et le poids P de substance que cette diastase peut transformer. Si cette conception était absolument vraie, on ne comprendrait pas que, dès l'instant où un liquide diastasifère filtré est encore capable d'agir sur une substance donnée, le pouvoir fermentescible de ce liquide filtré soit plus faible que-le pouvoir fermentescible du liquide non filtré. En vérité, si ce caractère général des diastases est vrai théoriquement, il n’est pas absolument vrai pratiquement et dès lors on ne doit pas s'étonner de voir la filtration à travers une substance donnée diminuer dans une certaine mesure le pouvoir diastasifère d’un ferment. D'ailleurs Le problème ne pourrait être abordé rigoureusement qu'à la condition d’avoir à sa disposition des diastases pures. Or on ne connaît pas les diastases à l’état de pureté. Nous admettons qu'une diastase est d’autant plus pure qu'elle se montre plus active sous le même poids. Mais, comme Île fait remarquer M. Duclaux, y a t-il un millième de diastase pure dans le mélange Le plus actif obtenu ? y en à t-il 50 pour 100 où même davantage ? C’est un point sur lequel on ne sait rien.

-Influence de différents agents chimiques sur l’action de l’inulase. — « Lorsqu'on ajoute à un mélange d'une

diastase et de la matière sensible à son action un sel

Le GO =

minéral ou plus généralement un corps quelconque, ce corps peut jouer un rôle dans l’action en modifiant l’un des corps réagissant, soit la diastase, soit la matière que la diastase transforme. Il peut aussi intervenir par lui-même, sans modifier d’une facon sensible les corps en présence (1) ».

Je me suis proposé de faire à ce point de vue l'étude de l'influence, exercée par un certain nombre de substances sur la saccharification de l’inuline sous l'influence de l’inulase. Il est utile en effet de connaître pour chaque diastase l’action accélératrice ou retardatrice des différentes substances. Cette action n’a rien en effet du caractère spécifique qu’on lui attribue quelquefois.

Action du chloroforme. — Pour déterminer l'influence du chloroforme sur la marche de la saccharification de

l’inuline par l’inulase, on fait les expériences suivantes :

A. Solution d’inuline à 1.p. 100. re RTE 5oce Liquide de macération d’ le EL ER dec 25 On porte à l’étuve à 36-38°.

Après douze heures on trouve que 46,5 pour 100 d'inuline ont été transformés.

B. Solution d'inuline à xp. 100: 1 0 EU”, boce Liquide de macération d’aspergillus. . . . . 25 CHloroforme: 2e PR RE Un excès

Après 12 heures de séjour à l’étuve (36°-38°) on filtre

sur un filtre mouillé et on exprime en sucre le pouvoir

(1) Ducraux. Traité de microbiologie, t. Il, p. 371.

EN: 2e réducteur de la liqueur. On trouve ainsi que 75 pour 100 de l’inuline auraient été transformés.

Mais, comme on le sait, le chloroforme réduit la liqueur de Fehling et il y a à savoir par conséquent quelle part lui revient dans le pouvoir réducteur total. Pour

cela il faut faire l'expérience suivante :

(Es ARTE RO MN EM En CT NE SE boce Liquide de macération d’aspergillus. . . . . 25 CRIOFO IGN UE ere ei UE me iles Un excès

Après 12 heures de séjour à l’étuve {36°-38°) on filtre sur un filtre mouillé. On mesure le pouvoir réducteur de la solution et on trouve que ce pouvoir réducteur correspond à celui d’une solution qui contiendrait 0,r425 de glucose. Or 0,1425 de glucose provenant d’une saccharification d’inuline indiqueraient dans l’espèce une transformation correspondant à 28,5 pour 100 d'inuline.

Dans l'expérience B ce n'est donc pas 75 pour 100 d'inuline qui ont été réellement saccharifiés, mais bien 75 — 28,5, soit 46,5.

Nous pouvons donc conclure que dans les conditions que nous venons de rapporter, le chloroforme n'entrave ni n'accélère l’action de la diastase sur l’inuline.

Il n’est pas inutile de remarquer en passant que nous trouvons dans ce fait un caractère différentiel nouveau entre l’inulase et la maltase.

Il résulte en effet des expériences de Lintner et Krober que le chloroforme gène notablement l’action de la maltase.

Action du fluorure de sodium. — Le fluorure de s0-

dium à 1 pour 100 à été également indiqué comme un

ST des réactifs permettant de distinguer les unes des autres les fermentations par ferments solubles et les fermentations par ferments organisés (1).

On verra d'après les expériences suivantes que s’il est vrai que le fluorure de sodium à 1 pour 100 ne s'oppose pas à l’action diastasique de l’inulase, elle la gène cependant dans une faible mesure.

APSSolETOonNdANUlLIe A END MODO CE 5occ Liquide de macération d’arpergillus. . . . . 25

On porte à l’étuve 36°-38°. Après 18 heures de séjour à cette température on trouve que 56,25 pour 100 d’'inu-

line ont été transformés.

B:: Solution“ d'inuline à + p.100. 0, Sn 5oce Liquide de macération d'aspergillus. . . . . 25 FluoruretdersodiAn RE RE 0,75

Après 18 heure de séjour à l’étuve (36°-38°) on trouve que 48,3 pour 100 seulement ont été transformés. Ainsi la florure de sodium à 1 pour 100 modifie notablement l’action de l’inulase.

Toutefois il n’y a pas d'inconvénients à l’employer comme antiseptique dans les expériences où on se propose, non pas de mesurer le pouvoir saccharifiant absolu d'une solution d’inulase, mais seulement de comparer le pouvoir diastasifère de deux ou plusieurs solutions prises dans des conditions déterminées.

Acide thymique.— L'acide thymique en solution sa-

(1) Arruus et Pacs. Fermentations vitales et fermentations chimiques. C. R., CXV, 1892, p. 839.

turée n’entrave dans aucune mesure l’action de l’inulase sur l’inuline.

Acide borique. — L'acide borique gène singulièrement l’action de l’inulase.

Dans des expériences dont il n'y aurait aucun intérêt à rapporter les détails, j'ai vu que tandis qu'une solution d’inulase non additionnée d'acide avait saccharifié en 18 heures 56,25 pour 100 de l'inuline mise en présence, la même solution d’inulase agissant en présence de 3 pour 100 d'acide borique n'avait saccharifié dans le même temps que 24,75 pour 100 d’inuline.

Des doses plus faibles d'acide borique sont encore capables de gêner l’action de l’inulase. C’est ainsi que la même solution d’inulase mise en présence de 1 pour 100 d'acide borique n’a transformé en 18 heures que 41,65 pour 100 d’inuline. Enfin avec une dose de 1 pour 1000 d'acide borique la quantité d’inuline transformée n’a été que de 52,11 pour 100.

Borate de soude. — Le borate de soude à 2 pour 1000 est un véritable paralysant de l’inulase : même après un séjour de 4 heures à l’étuve à 36°-38° on n’'observe la formation que de traces de lévulose.

Carbonate de soude. — Le carbonate de soude à 2 pour 1000 s'oppose d’une facon complète à l'action de linulase. Dans cette expérience il était intéressant de rechercher si la puissance du ferment avait simplement été entravée par l’alcalinité de la liqueur ou si au contraire le ferment avait été tué ; autrement dit si on le verraitreprendre son action après neutralisation de laliqueur. L'expérience montre que même après neutralisation de la liqueur l’ac-

Ricxaup. 3

Te

tion du ferment ne se manifeste pas. Le carbonate de soude n'a done pas seulement suspendu la puissance diastasique de l’inulase, elle a détruit le ferment.

Cyanure de potassium. — Le cyanure de potassium à la dose de o%',10 pour 1000 empèche également l'action diastasique de l’inulase.

Arséniate de soude. — L'arséniate de soude est aussi un paralysant actif de l’inulase. La mème solution de ferment qui, employée seule, était capable de transformer en 18 heures 56,25 pour 100 d'inuline, ne transformait plus dans le même temps que 14,61 pour 100 d’inuline lorsqu'on la mettait en présence de 1 pour 1000 d’arséniate de soude. :

Formol. — De faibles quantités de formol paralysent également l'action de linulase.

Acide carbonique. — L'acide carbonique n’exerce aucune influence accélératrice ou retardatrice sur l’action de l’inulase sur l’inuline. Pour étudier l'influence de cet acide, voici comment j'ai opéré:

On prend deux ballons de 100 centimètres cubes dont on élire le col à la lampe. Dans lun des ballons (A) on

introduit le mélange suivant :

SOON NURNONET ND TO RES 5ace Liquide de macération d'aspergillus. . . . . 20

On ferme le col à la lampe.

Dans le second ballon {B) on introduit Je mème mélange ; mais, avant de fermer le col à la lampe on fait passer dans la solution pendant deux heures au moyen d’un tube eflilé un courant d'acide carbonique. On peut

admettre que, dans ces conditions, la solution est saturée

EE gh e

d'acide carbonique et que l'air du ballon a été remplacé par ce gaz. On retire alors avec précaution le tube eflilé et on ferme le col à la lampe. On porte les ballons à l’étuve (36°-38°).

Au bout de 36 heures on les retire, on casse la pointe effilée, on dose le sucre présent dans chaque solution et on constate que la quantité d’inuline transformée est

exactement la même dans chacun des ballons.