Voyez L. Camus et E. Gley, loc. cit
2. C'est un nouvel exemple d'une réaction directe, in vitro, d'une antitoxine sur une toxine (voyez L. Camus et E. Gley, loc. cit.).
ACTION 'HÉMATOLYTIQUE ET TOXICITÉ GÉNÉRALE DU SÉRUM D'ANGUILLE POUR LA MARMOTTE*
Par L. CAMUS el E. GLEY
Nous avons montré, il y a quelques années S que le sérum (l'anguille possède une action hématolytique extrêmement énergique ; chez quelques espèces animales cependant, les hématies résistent fortement à cette action ; telles sont, en particulier, les hématies du hérisson*; nous avons étudié, dans les publications citées ci-dessous, les conditions de cette immunité naturelle.
Il était intéressant de rechercher si d'autres animaux hibernants présenteraient la même immunité. C'est ce que nous avons vu sur la marmotte [Arctomys Mannota).
Il faut des dilutions de sérum d'anguille comprises entre 4/50 et 1/20 pour que, dans des solutions de chlorure de sodium isotoniques, l'hémoglobine des globules de marmotte diffuse légèrement au bout de 45 à 20 h. La résistance de ces globules est donc très grande, puisque d'autres rongeurs, le lapin et le cobaye par exemple, laissent encore diffuser leur hémoglobine, comme nous l'avons montré, dans des solutions contenant 1/15.000 de sérum d'anguille.
Les hématies de la marmotte ne sont pas plus résistantes au
* C. R. de l'Acad. des Se, 26 juin 1905, t. CXL, p. 1717.
1. L. Camus et E. Glby : C. R., 31 janvier 1898, p. 428, etArch. intem. de pharwacodynarwte, 1898, t. V, 247-305. .
2. L. Camds et E. Glky : C. R. 24 juillet 1899, p. 231, el Annales de Unstitul Pasteur, 1899, t. XIII, 779-787.
sérum de chien qui, cependant, sur les animaux usuels de laboratoire est beaucoup moins globulicide que Je sérum d'anguille; elles laissent en effet diffuser leur hémoglobine dans des dilutions de sérum de chien à 1/20-1/10, c'est-à-dire presque aux mêmes doses que le sérum d'anguille.
Ces faits nous ont conduits à étudier comparativement l'action toxique générale de ces deux sérums sur la marmotte. Nous avions vu dans nos recherches antérieures que le hérisson, dont les hématies sont si résistantes, est notablement moins sensible à l'action toxique du sérum d'anguille que le lapin. Ainsi apparaissait chez cet animal une relation entre la résistance spéciale des hématies et la résistance générale de l'organisme. En était-il de même chez la marmotte? Or, en injection intraveineuse*, le sérum d'anguille s'est montré plus toxique pour cet animal que pour tous ceux sur lesquels on en a jusqu'à présent étudié l'action. Des doses de 0,2 c. c. à 0,1 c. c. par kilogramme amènent en effet la mort en 5 à 6 m. ; il en est de même avec les doses de 0,05 c. c. et 0,03 par kilogramme ; un animal encore est mort avec une dose de 0,02 c. c. (dix fois moindre que celle qui tue le lapin), mais cette fois en quelques heures ; un autre a résisté, sans avoir présenté de troubles, à une dose de 0,01 c. c.
Au contraire, la marmotte résiste parfaitement à l'injection intraveineuse de 5 c. c. et même de 10 c. c. de sérum de chien par kilogramme. Ainsi, quoique l'action globulicide de ce sérum soit presque identique à celle du sérum d'anguille, il n'en existe pas moins entre ces deux liquides des différences profondes qui se manifestent par une différence considérable dans la toxicité générale, puisque nous avons observé des marmottes qui ont résisté à des doses de sérum de chien trois cents fois supérieures à la dose mortelle du sérum d'anguille.
Ces expériences nous ont donc permis de dissocier les propriétés toxiques du sérum d'anguille, mieux que nous n'avions
1. Dans des expériences intéressantes, R. Blanchard (Soc. de Biol.,lZ juin 1903, p. 736) a déterminé la toxicité du sérum d'anguille pour la marmotte, mais par injection sous-cutanée; dans cette condition, ce liquide est trois à quatre fois moins toxique qu'en injection intra-veineusc chez le lapin.
pu le faire antérieurement au moyen du chauffage à 56" qui abolit l'action globulicide, mais qui diminue aussi, et dans une très forte mesure, l'action toxique générale. Celle-ci peut être séparée de la propriété hématolytique et, vice versa, comme nos expériences le prouvent, la résistance des hématies à ce poison n'implique nullement la résistance de l'organisme en général.
COMPARAISON ENTRE L'ACTION HÉMATOLYTIQUE ET LA TOXICITÉ DU SÉRUM D'ANGUILLE CHEZ LA MARMOTTE (ARCTOMYS MARMOTA) *
Par li. CAMUS et E. GLEY
Nous avons montré, il y a quelques années", la grandeur du pouvoir hématolytique du sérum d'anguille; chez quelques espèces animales cependant, les hématies possèdent une résistance naturelle assez grande à cette action " ; nous avons spécialement étudié celle des hématies du hérisson.
Il était intéressant de rechercher si d'autres animaux hibernants présenteraient la même immunité. Nous avons fait cette étude sur la marmotte des Alpes.
Nous avons éprouvé la résistance des globules de cet animal par le procédé qui nous a toujours servi dans nos recherches antérieures (méthode de l'isotonie [Hamburger], procédé de Mosso-Viola). Nous avons employé soit le sang en nature, obtenu par la ponction du cœur, soit les globules isolés de ce sang par la centrifugation et lavés quatre fois de suite dans l'eau salée hypertonique.
Tous les animaux sur lesquels nous avons expérimenté étaient à l'état de veille, s'alimentant très bien et en parfaite santé.
• Arch. intern. de pharmacodynamie et de thérapie, 1905, t. XV, p. 159-169.
1. L. Camos et E. Gley : C. R. de VAcad. des Se, 31 janvier 1898, p. 428 et Arch. intern. de pharmacodynamie, t. V, p. 247-305 ; 1898.
2. L. Camus et E. Gley : C. R. de VAcad. des Se, 24 juillet 1899, p. 231, et Ann. de VInslilut Pasteur, t. XIII, p. 779-787; 1899.
Nous n'avons pas connaissance qu'il ait été fait avec le sang de la marmotte des déterminations de la résistance globulaire dans les solutions de chlorure de sodium de concentration diverses. Nous avons donc dû procéder à ces déterminations. Nous avons trouvé que l'hémoglobine ne commence à diffuser que dans la solution à 0,50 — 0,53 °/o- Nous avons même observé un sang pour lequel il n'y avait un commencement de diffusion que dans une solution à 0,46 *>/o. Voici deux de nos expériences. Les autres seront relatées dans la suite de ce travail, conjointement avec les expériences d'hémolyse, auxquelles elles servaient de témoins.
Expérience I.
Marmotte ç/', 3.050 gr. Dans cette expérience, on a étudié comparativement la résistance des globules lavés et celle du sang total. Dans ce but, nous avons, d'une part, fait tomber du sang du cœur dans une série de solutions de NaCl de concentration variable, et, d'autre part, dans une série de solutions semblables, des globules lavés d'abord trois fois avec une solution de NaCl à 9 °/oo, puis une quatrième fois avec une solution à 6 °/oo. Observés 24 heures après, les tubes analogues de chaque série 1 et 1' ne présentaient aucune différence.
TITRE
des solutions en NaCl
pas de diffusion.
diffusion extrêmement faible.
— très faible.
— nette, encore des globules non détruits.
— plus marquée, des globules non détruits.
Tubes N° 1
— No 2
et N» 1' et N» 2' et N» 3' et N» 4' et N» 5'
et N» 6'
ACTION PHYSIOLOGIQUE DES ICHTYOTOXINES Hl Expérience II.
Marmotte Ç, 1.880 gr. On fait tomber dans une série de tubes, renfermant une solution de NaCl à des titres divers, une goutte de sang du cœur.
TITRE
do la solution de NaCl
0 56 — f diffusion.
0,46 — diffusion très légère.
0,43 — id.
On voit donc par ces expériences et on verra aussi par celles qui suivront que les hématies de la marmotte ne laissent pas aisément diffuser leur hémoglobine, même dans des solutions salines faibles. Nous pouvons par conséquent considérer les dilutions à 0,60 comme suffisantes pour des études d'hémolyse. Ce sont celles que nous avons employées dans les recherches dont nous allons donner les résultats. Nous avons cependant fait quelques expériences avec des dilutions à 0,56 %, justement pour obtenir les conditions les plus favorables à l'action globulicide du sérum hétérogène.
Les globules rouges de la marmotte sont, comme ceux du hérisson, très résistants au sérum d'anguille. Il faut des doses de ce sérum comprises entre 1/50 et 1/20 pour que l'hémoglobine diffuse légèrement, au bout de 15 à 24 heures. Les tableaux ci-dessous le prouvent suffisamment.
Expérience III.
Cette expérience préliminaire a été faite pour comparer l'action du sérum d'anguille sur le sang du lapin à son action sur le sang de marmotte.
Lapin Ç, 4.250 gr. (a accouché le lendemain de sept à huit petits,
tous mort-nés). On fait tomber une goutte du sang du cœur dans la série des tubes ci-dessous contenant une solution de NaCl à 0,06 V, et du sérum d'anguille à des titres variant de un centième à deux millièmes.
TITRE
de la solution de NaCl
TITRE
de la solution en sérum d'anguille
tube témoin
Diffusion dans tous les tubes après 24 heures.
Pas de diffusion.
Marmotte $, 1.830 gr., complètement éveillée et mangeant régulièrement tous les jours. On fait tomber une goutte de sang du cœur dans une série de tubes identiques à celle employée dans l'expérience ci-dessus.
Vingt-quatre heures après, on constate qu'il n'y a trace d'hémolyse dans aucun des tubes.
L'anguille qui a servi pour ces expériences pesait 550 gr. et la saignée qui avait été de 6,3 ce. a fourni 3 ce. d'un sérum légèrement bleuté.
Expérience IV.
Même animal que celui de l'expérience II.
La résistance des globules de cette marmotte au sérum d'anguille a été éprouvée avec les solutions suivantes :
TITRE TITRE
de la solution de la solution
do NaCl en sérum d'anguille
Très légère diflusion après 24 heures.
Pas de diffusion après 24 heures.
Expérience V.
Marmotte o^, 2.525 gr. On recherche simultanément avec le sang du cœur la résistance globulaire pour des solutions de NaCl de titres divers et pour différentes dilutions de sérum d'anguille :
TITRE
(le la solution de NaCl
0,56 p. 100 Pas de diffusion.
0,53 — Id.
0,50 — Très légère diffusion.
0,46 — Légère diffusion.
0,43 — Diffusion très nette, beaucoup de globules non détruits.
TITRE TITRE
de la solution do la (olutiou
de NaCl en sér. d'ang.
Forte diffusion, tous les globules détruits.
1 p. 10 Id.
1 p. 20 Légère diffusion, beaucoup de globul. intacts.
Expérience VI.
Marmotte a^, 2.887 gr. Comme dans l'expérience précédente, le sang du cœur est soumis à la double recherche :
TITRK
de la solution de NaCl
0,56 p. 100 Pas de diffusion.
0,33 — Traces de diffusion.
0,50 — Très légère diffusion.
0,46 — Légère diffusion.
0,43 — Diffusion marquée, beaucoup de globules non détruits.
TITRE
de la solution de Naa
QUANTITÉ de sérum d'anguille
Très forte diffusion, tous les globul. détruits.
Id.
Très légère diffus.
Expérience VII.
Marmotte $, 1.445 gr. Mêmes recherches que ci-dessus
TITRE
de la solution de NaCl
0,56 p. 100 Pas de diffusion.
0,53 — Légère diffusion.
0,50 — Id.
0,46 — Diffusion marquée.
0,43 — Diffusion encore plus marquée.
TITRE de la solution de NaCl
QUANTITÉ de sérum d'anguille
Très forte diffusion, tous les
globul. détruits.
Id.
Trésiégèrediffus.
H4 ACTION PHYSIOLOGIQUE DES ICEfTYOTOXINES
Expérience VIII.
Marmotte cr^, 2.090 gr. Mêmes recherches que ci-dessus
TITRE
de la solution de NaCl
TITRE QUANTITÉ
do la solution do sérum de NaCl d'anguille
0,55 p. 100 Pas de diffusion.
0,53 — Diffusion très légère. 0,36
0,50 — Id. 0,56
0,46 — Diffusion légère.
0,43 — Id.
0,56 p. 100 1 p. 5 Tous les globules
détruits.
1 p. 10 Id.
1 p. 20 Diffusion légère.
Les expériences V, VI, VII et VIII ont été faites avec le même sérum fourni par le mélange du sang de deux anguilles, l'une de 1.120 gr. et l'autre de 970 gr.
Expérience IX.
Marmotte $, 2,751 gr. On fait tomber une goutte du sang du cœur dans la série suivante de solutions de sérum d'anguille.
TITRE de la solution de NaCl
TITRE
de la solution en sérum d'anguille
hémolyse très forte.
— marquée.
— légère, trace d'hémolyse.
Expérience X.
Le sang du cœur d'une autre marmotte du poids de 2.085 gr. a été éprouvé avec le même sérum d'anguille (anguille de 510 gr.) et a donné des résultats identiques.
L'action hématolytique du sérum d'anguille est donc très faible pour la marmotte. Rappelons que, d'après nos expériences antérieures (citées au début de ce travail), ce sérum est souvent encore hématolytique pour le lapin aux doses de 1/15.000 à 1 /20.000 et pour le cobaye à peu près aux mêmes doses.
Cette résistance des hématies de la marmotte au sérum d'anguille est-elle un phénomène général, que l'on observe avec tous les sérums globulicides? Nous n'avons fait cette comparaison qu'avec le sérum de chien. Or, la différence entre le pouvoir hématolytique de ce sérum et celui du sérum d'anguille n'est pas grande; le premier est en effet globulicide à 1/20 — 1/10, c'est-à-dire aux mêmes doses presque que le second. Nous avons même observé un sang de marmotte dont l'hémoglobine ne commençait à diffuser qu'avec une dose de 1/10 de sérum d'anguille (expér. IV). Dans un autre cas, l'hémolyse fut identique (légère) avec la même dose (1/20) de l'un et de l'autre sérum.
Citons quelques expériences.
Expérience XI.
Marmotte, 2.250 gr. On prend du sang par ponction du cœur; les globules, lavés deux fois dans une solution de NaCl à 9 %„, puis une fois dans une solution de NaCl à 6 "/oo, sont mis en contact avec les solutions suivantes :
TITRE TITRE
lie la solution de la solution de NaCl on sérum d'anguille
0,60 p. 100 1 p. 10 forte hémolyse, encore quelques globules
au fond.
0,60 — 1 p. 20 hémolyse moins marquée.
