TABLEAU XXX

Activité bactéricide du Glycocollate de cuivre en eau physiolosique, sur des cermes vietlilis,

Tubes | N° N°2 Nes NET Durée de contact 0! (HAE DL 5 004 60!

Colonies 700 310 92 0 (Numérations) |

. Donc sur ce milieu peu riche en substances nutritives, 700 colonies sont apparues dans le tube N° 1, tube témoin dans lequel le cuivre n'a exercé qu'un contact désinfectant de durée pratiquement nulle,

| Ensuite les germes vivants ont disparu rapidement, sous l'influence Gu désinfectant, dans ce milieu très pauvre en substances nutritives.

TES de 2ème Essai :

L'ossat A a été suivi d'un essai B: dans dust l'eau peptonée (2 °/, de peptone) a remplacé Îfeau physiologique pour faire une suspension en germes de concentration identique à celle de la suspension A, Cette suspension B a été d'abord régénérée par incubation à +5780, Passé le temps de latence, les germes dans ces conditions favorables ont recommencé à se multiplier (le temps de latence, on le verra ne dépasse P&s une heure), Puis on commence les:

rélèvements après 2 heures 1/2, à heures 1/2, 4 heures 1/2 d'étuve à +57°C, dans ce nilieu B.

Donc chaque fois, on prélève 1 ce de cultures qu'on disperse dans 10 ce d'eau peptonée contenant la même concentration en cuivre que celle adoptée pour les essais À (c'est-à-dire 4 milligrs, litre) et l'on opère ensuite comue RARES les essais À pour arriver aux numérations finales,

Dans le tableau qui donne les résultats de l'essai B, 11 faut bien distinguer les durées employées pour le re jeunissement et la multiplication des germes et les durées nécessaires pour la déginfection par le glycocollate de culvre en seau peptonée.,

RESULTATS obtenus :

… TABLEAU XXXI : Activité bactéricide 4 Glycocollate de cuivre sur germes revivifiés sons TTeau psptonée.

Temps de séjour à l'étuvel Cuivre 4 mmg par litre

à +57°C en eau peptonée | ‘Temps âe contact désinfectant à +37°C des germes rajeunis

Ces essais montrent donc, en comparant les résultats À et B, que la culture A dont les stapnylocoques sont vieillis, régiste d'abord moîns bien à un contact prolongé avec le cuivre que. les cultures B dont los germes ont pu se revivifier pen ant 3h h.1/2 dans l'eau peptonée avant de subir le contact du cuivre.

Mais passé ce temps (5 H 1/2), la résistance au cuivre tend déjà à s'abaisser progressivement, sans doute parce que la proportion de bactéries visillies augmente dans la culture à nou veau,

5ème Essai :

Un autre essai, effectué non plus sur eau péptonée, mais sur bouillon ordinaire; a confirmé le précédent, mais les resultats sont moins nets dans Îles mêmes conditions de désinfection.

a) Le témoin donnait 670 colonies,

b) Le contact au cuivre de 69 minutes pour les bactéries vieillies donnaît zéro colonie. (ïffet bactéricide atteint apparemment).

c) Le contact au cuivre de 60 minutes sur les bactéries remises en culture pendant 5 H 1/2 donnait 658 colonies par plaque

" ACHCI7e du 655. ner # " 4ème Essai :

Obtenu en employant le bouillon de viande comme milieu de culture.

doutes les autres conditions opératoires restant les mêmes par ailleurs : :

TABLEAC XXXITI

Activité bactéricide du glycocollate de cuivre sur germes revivifiés dans . bouillon de viande

Séjour à +57°C, de Numérations obtenues après contact la suspension dans désinfectant à +57°C, avec GCu à le bouillon. 4 mmg par litre.

DUREE DUREE DE CONTACT AVEC CUIVRE ou, 15! 50! 60!

Heure zéro | 670 8 1 Zéro 21H2)/2 650 580 510 405 5 H 1/2 644 UT 82e er es 656 4 H 1/2 Le TE ele TON 805 656 :

REMARQUE I - Dans un temps que nous avons offerts au staph tions en culture, dé les mêmes milieux st Île même germe, cu tions, mais sans addition de culvre,

, Ainsi, partant d'une culture sur gélose ordinaire (24 he a +57°C, plus 7 jours à +18°C) on prépare 5 suspensions : | ; À - B - C comme sit plus haut : |

Ib a

A) Suspension en bouillon ordinaire (10 emo)

B) Suspension en eau peptonée à pre (10 cm5)

CG) Suspension en eau peptonée à 2 °/, aûditionnée de 2 mma âtaneurine dans 10 cms de milieu,

JABLEAU XXXIITI

Recherche du temps de Latsence

TE: «PS DÉ CULTURE : ENSEMENCEMENT avec 0,5 cm5 POUR NUMERATION à +790 après 26 heures | À B C 0 neure (Témoin au départ) 450 2505. 450 1 reure : 850 1250 880 2 heures | 1440 1780 1680 4 heures s | 1859 2500 8 neures à | 2 9009

Donc, dans ces essais, le départ des cultures a été rapide (temps de latence très court, inférieur à une heure).

REMARQUE. II - L'ensemble des essais décrits donnent à penser une

ois de plus que certains constituants des milieux nutritifs (eau peptonée et surtout bouillon) peuvent s'opposer à l'action désinfectante du cuivre sur le staphylocoque,

Les essais précédents ayant montré, la grande différence vulnérabilité du staphylocoque vis-à-vis du glycocollate de cuivre quand on opère dans l'eau physiolorique plutôt que quand on opère dans l'eau peptonée, nous ont amenée à nous demander si la résistance au glycocollate de cuivre n'est pas dans ce dernier cas due à la présence dans cette eau peptonée älfun facteur de crois- sance aussi avons-nous entrepris pour mettre le fait en évidence les essais décrits plus FOR

En ce qui concerne les essais FOTO DER plus haut sur le staphylocoque, la différence. constatée selon que la désinfection au cuivre est opérée dans l'eau physiologique ou dans l'eau peptonée a pour explication la présence de facteurs de croissance dans cette dernière; ceci nous a amené à entreprendre d'autres essais déjà décrits.

5ème et 6ème Essais :

On opère comme dans le ler Essai (Série 3) la préparation d'une suspension de germes dans l'eau peptonée additionnée de g1y-

cocollate de cuivre, mais ici à concentration beaucoup plus forte

en cuivre, Nous avons utilisé les titres suivants en glycocollate de Cuivre : ;

A) 0,5 cc âe glycocollate de cuivre D = 10 dans 19 cc d'eau peptonée. La concentration en cuivre correspondante est de 12,5 milligrs/litre.

B) La concentration en cuivre est le double de la précédente (25 milligrs/litre) dans l'eau peptonée.

| Les numérations étaient faites après des durées croissantes de contact désinfectant avec l'eau peptonée additionnée de cuivre. Les résultats ont été dounlés dans deux séries parallèles soit Al et AZ avec 12,5 millier/litre et Bl et B2 avec 25 milliers, litre,

TADLSAU XXXIV

Activité bactéricide de fortes concentrations

en Glycocollate de cuivre Désinfection Komore de colonies apparues en 56 à +570

durée sur chaque plaque

Al A8 PEL go 12,5 mmg/1 | 12,5 mag/1 | 25 mmg/1 | 25 mng/1

6 à. 870 870. 1459 - 151 1576 SYLE 720 & oO! 775 a 0 45! 578 : Le 5:

60! AB EE 788 À 0 751 598 582 (e) (e) 901 595 999: 0 0 105! 265 280 0 $

ème et Bème Essais :°

Les essais sont la répétition des essaîs 4 et 5 mais en opérant sur une nouvelle suspension de staphylocoques soumis à un contact désinfectant par le gilycocollate de cuivre pendant une durée variable à +279C, et avec les concentrations suivantes ex-

primées en cuivre métal (milligr/litre) = Al = 12,5: 48.= 12,5 Bl = 25 32 = 25, AT

A0 LABLEAU XXXV

Activité bactéricide de fortes concentrations

en Glycocolliate de cuivre

Durée de désin- Nombre de colonies

fection à +:70C

Al A2 Bl B2

12,5 mng/1 | 12,5 mme/1 | 25 mng/1 | 25 mng/1 : O0 départ BST 815 60 644 151. Fée 796 188 272 50! 690 . O0 0e 25 21 451 | ue 50 447 5 2 501 581 ù 572 0 0 751 170 : 193 0 0 901 | 116 HAE TEA 0 0 1051 Has 84 0 0 120! 60 78 0 ) 0 0

b) Influence de la concentration en germes au départ -

Les AiPieus utilisés ici sont riches en aïhumine : eau peptonée, sérums divers, EE:

Nous avons signalé plus naut que J, Régnier et S. Lambin Puis S. Lambin et hi. Robert avaient attiré 1tattention sur l'importance à donner à cotte question dans les äésinfections (11).

à Nous avons donc opéré en milieu nutritif liquide pour sos suivre l'influence bactéricide sur les milieux ensemencés très fortement, Et pour les milieux liquides peu infectés, nous avons effectué des numérations sur eau peptonée gélosée pour suivre les effots anti-bactéricides du glycocollate de cuivre,

4 210 Variation des concentrations bactéricides en eau peptonée en Ponution de. ne de l'ensemencement -

Prois séries de tubes (19 par série) contenant chacun 10 cms d'eau peptonée et respectivement du glycocollate de cuivre aux concentrations : 00 - 57 = 112 milligrs de cuivre oar litre ont été ensemencés avec 0, 5 cc d'une suspension ie stapnylocoque doré dont la concentration en bactéries décroissait sn progression géométrique de raison 0,1, puis étuvés 48 neures à +57°C pour rechercher UP PE bactéricide d'anrès la technique III (page 54),

M: V2 lo

Or le repiquase de 9,5 ce du contenu des tubes de chaque série n'a fait apparaitre aucune colonie quand 200.090 germes ont été inoculés dans la série de tubes contenant 89 milligrs de cuivre par litre ou quand 2 millions de germes ont été inoculés dans la série à 57 milligrs par litre ou quand 20 millions de germes ont été inoculés dans la série à 112 mîilligrs par litre.

Donc ces essais confirment les résultats antérieurement sisnalés par S. Lambin et M. Robert sur les inoculats massifs en milieu liquide (eau peptonée) c'est-à-dire que la concentration en cuivre nécessaire pour obtenir dans chaque série l'effet bactéricide s'éTevait avec l'importance du nombre de germes inoculés (à partir de la même suspension).

c) Influence de la concentration en glycocollate de cuivre - :

Cette étude, on l'imagine facilement, est,d'une grande importance théorique pour une médication par injection intraveineuse dont on veut connaître l'efficacité. .

Nous avons vu plus naut, quand nous avons examiné les courbes de cuprémie après injection de 25 milligrammes de cuivre (19 cc de GCu, D = 1) que la cuprémie baisse rapidement dans le sang du malade et s'abaisse vers des concentrations ne dépassant guère 5-4 gamma par cm de sang, D'autre part, nous avons vu aussi : que le cuivre in vitro se montrait d'autant plus actif sur le staphylocoque doré que le milieu liquide contenaît les germes vivants à plus faible concentration. Aussi nous avons été amenée à examiner à nouveau la question en réalisant les doubles conditions expérimentales ci-dessus indiquées, sur différents milieux liquides,

Pour cela, la technique III (décrite page 54) nous a paru indiquée.

1) Milieu : Eau peptonée 19 tubes d'eau peptonée ayant reçu 4 gamma de cuivre

(sous forme de glycocollate) par cm sont ensemencés avec le stapnylocoque doré,

Un premier essai a été fait avec un ensemencement de 29,000 germes par Cmo, de memes pour son tuoe témoin sans cuivre,

Dans un second essai Cnaque tube a recu lui 154 germes par cmd, y compris le tube témoin sans cuivre.

Résultats observés après passage à llétuve à +57°C (48 neures) des EU A RATER ERE I NE Tubes de chaque série,

Pour:lo premier. éssadls :

| re tune témoin présente un trouble manifeste en 12 heures. Les tubes en cuivre trouhlent aussi mais le trouble n'apparait qu'en 29 heures.

= 82 — Pour le second essai :

Le tube témoin présente un trouble manifeste en 12 heures et fournit un repiquase consécutif positif sus eau peptonée gélosée,

Les tubes au cuivre apres 48 neures de contact désinfectant à +57°C restent stériles et les repiquages ne donnent pas de colonies sur milieu solide (eau peptonée gélosée).

Donc ces deux essais en eau peptonée (milieu nutritif riche) montrent que la concentration 6n cuivre de 4 gamma/cmé présente une activité bien nette comme antigénétique, en une durée ce 48 heures à +37°0, si la concentration en germes est faible au dé part, mais non si elle est élevée, ce qui corrobore les faits dé connus.

2) Milieu sérum de boeuf non Are recueilli aseptiquement a abatto ir

Ici notre but était de mettre en oeuvre un milieu 2ioumineux liquide, dont les albumines n'aient subi aucune altération.

Le sang recueilli au sortir de la carotide dans un grand ballon stérile est défibriné, centrifugé énergiquement aussitôt et soumis à la technique III dens un essai copié sur le précédent A,

Les tubes témoins, sans cuivre, et ensemencés aussi avec le même stapnylocoque étaient restés claire, après 48 heures d'étuve à +57°C, Mais ls ont pu donner lieu à des poussées tardives par la suite.

Les repiquages ont été effectués sur de l'eau peptonée gélosée pour pouvoir, au besoin, compter les colonigs apparues dans chaque cas et préciser, s'il y avait lieu, les concentrations bactéricides du cuivre,

4 essais ont été réalisés, comportant des inoculats d'importance croissante et cnacun de ces essai était exécuté à 4 exemplaires,

Le tableau suivant permet de résumer les résultats obtenus. | $

La colonne (a) y fournit le nombre de germes ensemencé dans chaque série de 4 ARE et rapporté au Cm de milieu au départ de l'essai, Ce nombre a été déterminé par uns numération MR de l'inoculat).

+ : Chaque colonné, (b) fournit t'aspect des tubes aprèe 48 h, de contact désinfectant à +570,

Chaque colonne (c) ‘fournit les rébultats des ropiquages après ce contact désinfectant; c'est-à-dire PPPRCS ou non de co-

lonies sur milieu solide en 56 heures d'étuvage à +579C.

GABLEAU XXXVI Action désinfectante en sérum de boeuf non tyndallysé. Influence de la concentration en germe ot en cuivre. Inoculat au départ CONCENTRATION En CUIVRE AU Cio (Nombre de germes 2 gamme PR TN pere rapporté au ce EEE EE —— de milieu) aspect repiquage aspect repiqu. aspect repiqu. (a) (b) to (b) (c) (b) (c) 800 limpide 0 limpide | 9 | limpidel 0 2409 troubie + trouble | + limpide| (1ésère | | (poussée 4000 trouble + limpide | O limpide| (lécere (poussée 490090 limpide Ô limpide 9 limpide 0

Ainsi, dans ces essais, un résultat paradoxal a 6té obtenu Sur les 4 inoculats utilisés au fépart, ce sont les deux extrêmes comme importance qui se sont comportés de la même facon, ne fournissant pas de colonies au repiquage. Une irrégularité dans les essais est peu probable dans un éssai quadruplé.

Peut- être s'agit-il d'un simple retard dans D des colonies après repiquages ?

Faut-1l admettre que l'action antiseptique A'un sérum natif puisse voir son action renforcée ou paralysée par chrteRReE concentrations en cuivre plutôt qu à d'autres ?.

Les sérums animaux avec leurs albumines natives possèdent un certain pouvoir de résistance aux infections,

Les repiquaces sur milieu solide que nous avons pratiqués devaient permettre dans notre esprit rappelons le, de mettre en évidence, par une dilution importante sur milieu nutritif, i'existence

de germes à vitalité ralentie, qu'ils fussent ou non impressionnés bar lo-cuEvres

lout germe encore vivant, placé à une dilution assez forte (D = 20) en milieu nutritif neuf, devait, pensions-nous, pouvoir

donner une colonie visible à la loupe, gars l'intervalle de 56 heures d'étuvare à +37°C.

Nous nous attendions à pouvoir toutours déceler quelques colonies dans ün milieu nutritif contenant même un très petit nombre

de tels germes, C'est du moins ce que quelques essais directs nous avaient permis de penser,

5) En raison de l'importance pratique de la question, nous avons

repris des essais sur sérum de cheval stérile non chauffé et non filtré fourni par le laboratoire Biolyon. Nous avons opéré suivant 18 technique I et recherché l'effet bactéricide possible, par ensenencement sur une eau os rélosée et numération des colonies toujours après passage à 1! étuve à +570 pendant 56 heures du milieu solidifié ensemencé.

Nous pensions qu'un essai effectué avec un sérum préparé avec les puissants moyens de l'industrie pouvait inspirer une confiance plus grande.

Trois tubes de sérum, un témoin et deux autres contenant du giycocollate aux dilutions en cuivre : D = 150 et D = 500 ont été ensemencés avec une suspension de staphylocoques convenable et placés à li'étuve à +700. après avoir effectué un premier prélève-

ment de 0,5 cc dans chacun des tubes pour numérations sur eau peptonée zélosée au âépart (temps 0). Puis un second est fait dans les mêmes conditions après 8 heures d'étuve à +57°C

LABLEAU XXXVII

Action désinfectante de Glycocoliate de cuivre en sérum 48 < stérile

Influence de la concentration en cuivre

RESULTATS OBTENUS‘ NOXBRE DE COLONIES APPARUES EN 56 Hs à +970.

Durée du contact sérum pur | GQu, D = 150 GCu, D = 500 désinfectant (témoin). | dans le sérum dans le sérum Départ O0 heure approx. 2700 approx. 27009 approx. 2700 Après 8 heures 4900 | ps 000 5000

Nous constatons donc que le nombre de colonies a sensiblement doublé pendant ce laps de temps dans le tube témoin sans cuivres tandis que pour les deux tubes avec glycocollate de cuivre aux concentrations indiquées, ce nombre se maintient approximative ment à sa valeur initiale après 8 heures d'étuve.

À la suite ds cet essai, i1 nous a paru intéressant de suivre l'évolution des germes placés sans les mêmes conditions pendant un temps beaucoup plus long. Cféèst ce que nous avons fait . en répétant l'essai effectué dans des conditions identiques au précédent sur le même sérum de cheval, mais en prolongeant le séjour à l'étuve à +57°C, pendant 24 heures. |

« 85 TABLE AU XXXVTII action désinfectante du &lycocollate de cuivre en sérum de cheval stérile Influence de la concentration en cuivre

RESULTATS OBTENUS | NOMBRE DE COLONIES APPARUES EN 56 H. à +37°C.

Durée de contact Témoin sérum pur | GCu, D = 150 GCu, D = 500 dans le sérum | dans LS sérum

Départ O heure 1160 1160 1160

8 heures 4200 AT 1150

24 heures 4,80 x 10° 5,96 x 10° 1:52:x 4100

Bien entendu, dans les deux essais décrits, 1a MAR rs de départ a été obtenue avec une même culture de 24 heures sur gélose également et convenablement dispersée dans EUSEM stérile,

La technique enployée étant toujours la technique I dans l'essai.

Dans les trois séries, la poussée a été comparable dans les 8 premières heures,

Mais au bout de 24 heures, elle a été plus marquée pour ‘la dilution, D = 150 que pour la dilution D = 500, c'est-à-dire pour la concentration en cuivre de 16 milligrs/litre que pour celle de 8 milligrs/litre,

Nous avons repris cet essai identiquement, sauf que nous avons utilisé un deuxième envoi de sérum de cheval non chauffé fourni par Blolyon, comme le précédent.

Résultats A) Témoin, sérum sans cuivre.

B) Sérum + GCu, D = 150 (16 milligr/litre en cuivre) CE * "= 500 ( 8 millier/litre "

= 600 ( 4 millisr/litre "