TABLEAU XXXIX
Influence de la concentration en cuivre sur
l'action désinfectante du glycocollate de cuivre. NOMBRE DE COLONIES ORSÉRVEES
Durée de la désinfection à +57°C.
A Témoin
Départ temps © Après 8 h.
Après 24 h.
Cet essai montre que les vitesses de croissance, après une longue durée d'étuvare, ne sont pas rérulières du fait vraisemblablement de différences de température quand on passe d'un tube à un autre placés dans la même étuve.
d) Influence du milieu d'essai - Influence des facteurs de croissance,
1) En eau physiologique
Cette influence a été recherchée par la techinique TI (c'est- à-dire milieu liquide, contact à +£7°0, de durée variable à concentration fixe en cuivre, inoculat déterminé. Une seconde opération consistait dans la numération destinée à constater le résultat obtenu dans la première).
Dans cet essai, on a utilisé une dilution de glycocollate de cuivre dans l'eau physiologique stérile, es 300).
On répartissait aseptiquement 10 cm de cette solution stérile dans une série de tubes et on conservait comme témoin un tube contenant de l'eau pnysiologique purs, Tous les autres tubes ont reçu £ millisrs de chacun des facteurs de croissance mentionnés ci-dessous et ont reçu environ 25,000 germes vivants par tube (ainsi qu'on l'a vérifié par une numération en boite de Pétri).
Après. une durée de contact varlable dans ce milieu, on a ensemencé 0,5 cm de chaque suspension bactérienne dans une boite de pétri pour effectuéer la numération des permes survivants, Les tubes contenaient respectivement par tube : Tube À
eau physiologique non additionnée de glycocollate de cuivre
rare Tube B B |
Glycocollate de cuivre dans l'eau physlologtque D = 500 Tube C |
GCu en eau physiologique D = 500 + 2 “iligr d'Aneurine
Tube D
ft nt : fl " LR miller de Glutathion | Tube Ë
ï " d c M + 2 miligr d'Acide Nicotique Tube F
" " " M" 4 2 miller de Pantothénate
de Ca,
Tube E
" # " 3 "+ 2 millgr d'acide Ascorbique
Les concentrations en Fobtoues de croissance dans les cinq derniers tubes sont done fortes par rapport à la concentra- : tion en cuivre qui est de 8 millers/litre,
Résultats ootenus
Influence des facteurs de croissance sur l'action désinfectante du Slycocollate de cuivre en eau physiologique
Durée de | contact Av B C D E F
Témoin O neure | 1150 | 1110 |1108 | 1220 |1080 |1102
1/2 EH | 870 | 588 | 584 | 502 | 248 | 764 ie 810 11 | 2497 44 2. |-2a1 151 60. 0 25" Fa TO 2 EH 604 Gal 0 0. 0 2 E 1/2 186 0 1 0 ge
- Ji'essai H a été fait plus tard aRnE une autre re avec un autre tube B' comme témoin en utilisant l'acide ascorbique.
11 a donné :
: ‘a8 — TABLEAU.XLY
Influence de l'ecidé FRA ue sur l'action désinfectante
iu Glycocollate de cuivre en eau paysioiosgique.
Durée de 3 contact Tube B! Tube EH 0 heure | 2480 2450 1/2 h 1400 +15 1960 1h 9 950 1 h 1/2 0 0.
D'après ces chiffres en comparant le tube B avec le tube C (à l'aneurine) et le tube F (au pantothénate) on constate que les deux, facteurs de groissance opposent une légère action antagoniste à la désinf tion au cuivre.
11 en est de même en. comparant au tube B! le tube H l'acide ascorbique) lui aussi à la concentration employée, donne
le même résultat dans l'eau physiolosique,
Mais nous allons voir plus loin que nous avons obtenu des conclusions différentes en utilisant de fortes concentrations en glycocollate de cuivre dans un sérum de boeuf tyndallisé, au lieu d'eau pnysiologique additionnée de la même concentration en acide ascorbique. Alors la désinfection au lieu d'être gênée se trouve au contraire activée par rapport au tube témoin.
Dans de tels mélanges la concentration en cuivre est élevée l'acide ascorbique lui-même peut être détruit par lui en une transformation irréversible, |
On s'éxplique alors le renversement d'activité qui se Éoroduit du fait de cet excès de cuivre dans les mélanges et le fait que la respiration cellulaire d'un germe bactérien puisse être bloquée après avoir été d'abord favorisée. |
‘Ayant examiné l'intervention des facteurs de croissance sur l'activité désinfectante du Glycocollate de cuivre en eau phy- Sroi ogique à l'égard de Staphylococcus aureus, nous avons repris la mène question dans des milieux plus ricies en albumine, c'està-dire en sérum de boeuf tyndallisé ou non, en eau peptonée, et dans le sérum de cheval nbn tyndallisé préparé par centr{ifugation et par une technique inäustrielie.
2) En présence de sérun de boeuf tyndallisé.
Nous sommes partie i'un sérum de boeuf que nous avons
réparti on tubes stériles et ensuite tyndallisé. À cet effet, chaque jour un chauffage au baïn-marie amenait le sérum à +56°C. et 1ty maîntenait 1 heure et cela pendant 5 jours consécutifs. Nous avons utilisé la technique III.
9 tubes contenant chacun 10 cm de sérum ainsi traité, tubes vérifiés stériles, sont additionnés aseptiquement de glycocoilate de cuivre D = 1 en quantité croissante,
Gnacun de ces tubes a été ensemencé par O0 cmS,5 d'une suspension de staphylocoques en eau stérilisée provenant d'une culture de 24 heures, suspension contenant 1920 germes, Après 48 heure: de contact, 1 cm de chacun des 9 tubes est introduit aseptiquement dans une boîte de Pétri et mélangé avec 10 cmS de gélose nutritive. Les numérations ont été effectuées sur les boîtes après 48 heures â'étuve à +97°, |
Résultats TABLEAU XLIT Désinfection par le glycocollaté de cuivre d'un sérum ensemenceé avec du stapnylocoque Addition de GCu, D = 1 Donne sur gélose après repiquasce Volume introduit et par boite RC C Nombre indéfinissable de colonies O2 environ 12,009 " | 0, a] ft 25 1!
9,4 * K) s- SN . gtérile
Ma DONC EE. désinfection en 48 heures sur sérum tyndallisé a été onotenue avec 140 millgr/litre de cuivre (sous forme de glycocoilate), *
Nous avons jugé utile de comparer dans des conditions identiques, la désinfection en eau peptonée et la désinfection en . Sérum tyndallisé, mais nous nous somnes contentée de mesurer le ouvoir bactéricide apres contact désinfectant pendant 48 heures à concentration connue en GCu, c'est-à-dire que nous avons opéré par la technique III (bage 54), ;
Dans chaque tube traité, on prélevait 0,5 ce que l'on repiquait sur 10 ce de gélose peptonée pour rechercher 1a concentration bactéricide.
Nous l'avons trouvée située aux valeurs suivantes :
Dans l'eau peptonés avec 0,4 ce GCu (D = 10) par 10 cms .Dans le sérum tyndallisé 0,2 ce GCu (D = 1) OO! # n
äonc la désinfection dans les Leur cas paraft ôtre moins active dans le sérum tyndallisé, puisque 0,4 ce de GCu D = 10 eat
à 0,04 ce de GCu D = 1.
Voyons maintenant la désinfection par le glycocoïlate de cuivre du sérum de boeuf tyndallisé dans lequel a été dispersé du
staphylocoque, mais en présence de facteurs de croissance.
Pour cette étude, notre dispositif expérimental a été le suivant ::
. Nous avons d'abord par approximations successives déterminé quelle était la Zone de concentration en GCu qui amenait la désinfection totale du sérum en moins de 8 heures de contact, Cette durée de 8 heures a été utilisée parce que c'était celle qui donnait dans les essais la désinfection dans un temps favorable,
Le poînt de départ a été une solution D = 590 de GCu c'est-à-dire que nous avons introduit 0,1 cmë d'une solution D = 53 dans 10 cmd de sérum. Nous avons constaté que cette lère concentration était sans effet désinfectant sur le ataphylo après un contact de 24 heures à +572,
Dans une série d'essais successifs, nous avons constaté que pour réaliser la désinfection dans les conditions voulues cidessus et en 8 heures, 11 nous fallait introduire 2,5 cmS GCu D = 1 dans les 10 cmS de sérum. On réalisait aînsi la désinfection en. moins de 8 h, de contact, Si la durée de contact était portée à 24 h. la désinfection totale pouvait être obtenue par des concentrations tres inférieures en GCu,
En ce qui concerne l'action des facteurs de croissance, nous ne décrirons que l'essai qui nous a fourni nos résultats définitifs, et.ceci afin d'éviter de trop longs développements sur sa mise au point.
10 cm5 de sérum tyndallisé ont été additionés de facteurs de croissance.à raison de $ mg de chacun ds ces facteurs pour un tube, puis celui-ci a reçu 2,5 tm5 GCu (solution mère) plus un tube témoin sans facteurs de croissance, Le contact à t = +370C., a été de durée variable et l'effet désinfectant observé peut $tro récapi= tulé dans le tableau qui suit :
A = sérum tyndallisé + GCu sans facteur de croissance
B= ". k APR $ mg aneurine
Chemie LUPE M +4 " ac, ascorbique Dies F ner lu tatuton
FCO RCE D 5 HA ac, nicotinique
F = u ë M " panthothénate de Na
Es 91 —
Désinfection par le sglycocollate de cuivre en présence de facteurs de croissance d'un sérum où a ëté dispersé D pm z
du stapnyliocoque.
lemps de contact | démoins
désinfectant O départ 2852 |s120 | 2058 | 5556 | 1956 | 2104 1 reure . 1828 |.1122 914 | 1756 | 1896 à 2 heures 860 |1080 40 | 1248 | 1016 | 1120 ca heures | ft ft LU .# L | fl 4 heures “| 252 288 0 224 260 588 5 heures 158 | 298 D‘ 1:122"| 5276 NP226 6 heures ire 124 0 00 ZE .. 44 7 heures 12 2] 0 |
Ce tableau montre que seul l'acide ascorbique parmi les facteurs de croissance, non seulement ne gêne pas l'action désinfectante du glycocollate de cuivre, mais l'exalte en sérum tyndallisé, du moins dans les conditions indiquées 1ci pour les concentrations en cuivre et en acide ascorbique (comparaison du tube C au tube A témoin).
Rappelons que dans l'eau physiologique, l'effet antigénéti que du cuivre n'avait pas été exalté mais au contraire gêné par l'acide ascorbique. Seulement dans le cas présent la concentration en cuivre est de 599 millger/litre alors qu'elle était 109 fois plus : faible dans l'eau pnysiôlogique pour une concentration en acide ascorbique du même ordre de grandeur,
; Il apparaissait nécessaire de résoudre la question plus complètement en ce qui concerne la désinfection sur le sérum en. faisant varier les trois concentrations : germes, cuivre, acide ‘ascorbique, Clest ce que nous avons fait comme l'indique les essais relatés dans les pages suivantes, © -
5) En présence d'eau peptonée.
En raison du comportement si spécial du glycocollate de cuivre en présence de l'acide ascorbique révélé par l'essai précédent, nous avons repris celui-ci en employant l'eau peptonée comme milieu nutritif pour la bactérie et en variant la concentration en cuivre en présence d'une concentration fixe en acide ascorbique (2 millgrs d'acide ascorbique dans 10 cm5 d'eau peptonés 1noculée d'une facon identique dans chaque tube), | PAUSE
Chaque tube de 10 cm3 d'eau peptonée inoculée a reçu 2, 9 ce ds glycocollate de cuivre aux dilutions suivantes :
cCu D = 1 D =5 D = 59 D = 500 | 11 en est donc résulté dans chaque tube les concentra- . tions suivantes en cuivre exprimées en millgr/litre :
(ca) = 2906 (c2) =
(C5) = O0 pour le témoin non additionné en cuivre. C'est- à-dire 105 concentrations en cuivre sont :
Ci = 800 C2 = 100 CS = 10 C4 = 1 C5 = 5690
en millgr/par litre du contenu de cnaque tube, ainsi se trouve: réalisée une série de 5 tubes contenant chacun le même inoculat, la même dose d'acide ascorbique et GCu dans l'eau peptonée.
A cette première série où chaques tube contenait £,5 miller d'acide ascorbique en présence de cuivre, on a fait partir simultanément une seconde série correspondante, mais ne contenant pas d'acide ascorbique et qui servait de témoin. Cnacun des tubes de celle-ci correspondant à un des cinq tubes de la première série.
Bien entendu, les inoculats au départ étaient identiques dans les séries, Ils provenalient d'une culture de 24 heures délayée dans de l'eau peptonée stérile. Le nombre de germes contenu dans chaque tube pouvait au départ être considéré comme approximativement identique dans chacun des cinq tubes des deux séries,
Un prélèvenent a été fait aseptiquement pendant la durée d'incubation, aux heures qui sont indiquées dans le tableau XLIV et apres un contact désinfectant avec le ciîvre de durée connue,
A l'heure Zéro, avant que le contact désinfectant au cuivre ait
eu le temps de produire son action, une numération initiale était effectuée au départ dans les deux séries, On devait procéder pour cela à une dilution convenatle par suîte du grand nonbre de germes en suspension par unité de volume. Ce nombre, dans la prise d'essai, était le même pour chacun des tubes au départ, dans les deux séries. Ensuite, par 1'action désinfectante du cuivre, ce nombre se modifiait dans chaque tube et 11 était toujours ramené par le calcul au nombre Ge germes contenus dans 0,5 cmS de milieu.
E'étuvage désinfectant était toujours effectué à +570C,
10 0e TABLEAU XLIV
Désinfection par glycocollate de cuivre en présence d'acide ascorne ee remonter marmrteges lonterennenemaagrennente rer eur piretesngneicsenegianne mn mans ana ER bique dfeau peptonée ou a éte dispersé du stapnylocoque.
lère série - Ac. ascorbique (250 mug/1) + GCu en quantité variable,
Désinfection Concentration en cuivre du milieu en mag/1
Durée | C'=;: 6000 T=NLOO C="110 C = 1 C = zéro 0 heure 5000 5000 5000 5000 | 5000 1 neure 1 col, 1 col. 0 2 col, 1200 col.
2 heures fe) fe) re) ) 2100 4 heures 0 0 0 Wis 4000 8 heures 0 0 30 555 très nont 24 heures 0 0 () très nomb P :
