CETTE

Pour rendre la réaction de Salkowski beaucoup plus sensible, Pouchet, puis Nonotte et Demanche (5), recommandent de chauffer. Grubs et Francis (6) font arriver à la surface du liquide contenant de l'indol et de l'acide sulfurique, une solution de nitrite de soude à 1 pour 1.000; un anneau coloré apparaît à la surface de séparation.

Nencki a proposé une autre modification d’une réalisation pratique moins facile, mais qui, incontestablement, acccroît de beaucoup la sensibilité de la réacton. On acidule la liqueur avec quelques gouttes d’acide acétique cristallisable, puis on ajoute quelques centimètres cubes d’un mélange d’alcool et d’éther; après agitation, on recueille le liquide étheroalcoolique et on l’'évapore dans une petite capsule de porcelaine. Sur le résidu, on dépose quelques gouttes une solution de nitrite de potasse et un peu d'acide sulfurique.

2° RÉACTION D'ÉHRLICH AVEC LA P.-DIMÉTHYLAMINO- BENZALDÉHYDE.— La p.-diméthylaminobenzaldéhyde en solution alcoolique (alcool à 95 degrés) à 5 pour r00 réactif recommandé par Ehrlich (5), puis par Schmidt (8)

5, Noxorre et Demaxcne, Dosage de l’indol dans les cultures microbiennes (C. À. Société de Biol., p. 658, 1908).

6. Grues et Francis, Ring test for indol (Bull. of (he hygienic Laboratory, Washington, mai 1902).

7. Eurucu, Ueber die Dimethylaminobenzaldehyd Reaktion ‘(Deut. medicin. Wochensch., n° 15, 1901).

8. Scumir, Ueber den Nachweis und die Bestimmung des Indols in den Fäzes mittelst der Ehrlich’schen Dimethylamidobenzaldehydreaktion {Miünsch. medic. Wochensch., n° 17, 1903).

D et Baumstark (9) donne, en présence d'acide chlorhyfique avec les solutions d’indol même très étendues, une coloration rouge violet dont l'intensité varie avec la concentration de la liqueur.

Variation de la teinte avec la nature du solvant. — En solution aqueuse on obtient une coloration moins vive qu’en solution alcoolique, ou éthérée. Cette coloration fonce avec le temps quel que soit le solvant.

Influence des impuretés de l’éther comme dissolvant de l'indol. — Les impuretés de l’éther, employécomme solvant de l’indol, influent sur la teinte de la réaction : celle-ci se modifie rapidement. Il semble que le chansement constaté soit dû à des phénomènes d’oxydation. Pour le prouver, nous avons procédé aux essais suivants. Nous avons dissous de l’indol (au titre de 1 pour 2.000), dans de l’éther que nous avions au préalable exposé pendant trois heures à l’action directe des rayons solaires. À 2 centimètres cubes de cette solution nous avons ajouté 1 dixième de centimètre cube de réactif d'Ehrhich, puis 1: demi centimètre cube d’acide chlorhydrique pur et enfin, 2 centimètres cubes d’alcool à 99 degrés pour avoir une liqueur homogène. Nous avons immédiatement obtenu une teinte rouge caracténistique. L'expérience fut répétée, en se servant cette fois de l’éther insolé, mais après l'avoir successivement lavé avec le tiers de son volume d’une solution aqueuse d'acide sulfurique à 5 pour 100, avec la même quantité d’eau distillée, la même quantité d’une solution

9. Bauusrark, Bestimmung der Faulnissprodukte im Urin und in den Fäzes mit Benützung der Ehrlich'schen Aldehydreaction (Münsch. medic. Wochensch., n° 17, 1903),

en ee aqueuse de potasse à 10 pour 100 et finalement avec encore de l’eau distillée, Dans ce cas, la coloration était beaucoup plus intense que dans le premier et trait davantage sur le violet; de plus, elle était beaucoup plus stable. Au bout d’une demie heure environ, la coloration dans l’éther insolé, non lavé, commençait déjà à pâlir et le lendemain, alors qu'elle était rouge groseille, la deuxième obtenue avec l’éther insolé lavé était grenat foncé.

Nous nous sommes demandé quel était celui des divers lavages effectués, qui avait le plus d'influence sur la teinte Pour résoudre la question, nous avons essayé une série de réactions comparalives, qui nous permit de conclure que le lavage à la potasse ou à la soude est celui qui donne les résultats les plus nettement appréciables. La teinte obtenue avec la solution dans l'éther lavé à la potasse persiste beaucoup plus longtemps sans changement que les teintes obtenues avec les solutions dans l’éther lavé, soit simplement à l’eau, soit à l'acide.

Action d’un persulfate alcalin. — Bôhme(ro) et Crossonini(11) emploient le réactif d'Ehrlich comme suit : on prépare une solution composée de p.-diméthylaminobenzaldéhyde : 4 p., alcool à 96 degrés : 380 p., acide chlorhydrique : 80 p. On y ajoute

5 à 10 centimètres cubes de bouillon et puis on verse

10, Bônme, Die Anwendung der Ebhrlischen Indolreaktion für bakteriologische Zwecke (Centralblatt f. Baktl. Original t. 40. p. 129).

11. Crossonini, Uber den Nachweis von Indol in den bakterien Kulturen mit der Ehrlischen Method (Arch. f. Hyq., t. 12, p. 161).

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un dans le mélange 5 centimètres cubes d'une solution saturée de persulfate de potasse. La présence de ce sel a-t-elle une réelle importance ? Nous ne le pensons pas. Des divers essais que nous avons faits, nous croyons pouvoir conclure que la réaction d’Ehrhch modifiée par l'addition de persulfate ou effectuée à chaud, donne une coloration plus foncée que si elle est faite à froid sans addition d’oxydant; mais cette réaction est suffisamment sensible, pour qu'il ne soit pas indiqué d’en augmenter encore la sensibilité par les procédés mentionnés, d'autant plus que les nouvelles teintes obtenues dans ces conditions varient notablement avec la tempéralure à laquelle on a porté la liqueur.

3° RéacrTirs DE DENIGËS. — a) Avec la vanilline. — Denigès (12 et 13) indique comme aussi sensible que la réachion d'Ebhrlich, une réaction avec la vanilline.

On dissout 5 grammes de vanilline dans 100 centimètres cubes d'alcool à 95 degrés.On prend 2 à3 dixièmes de centimètre cube de cette solution que l’on mélange à 5 centimètres cubes d’une solution très étendue d’indol, puis on ajoute goutte à goutte de l'acide chlorhydrique pur et on agite après chaque addition. On obtient tout d’abord une coloration rose; si on chauffe à ce moment, la couleur se fonce rapidement, mais pâlit par refroidissement. Si au lieu de chauffer, on continue l’addi-

12 DeniGès, Nouveaux réactifs de l'indol (C. R. Soc. Biologie, 4 février 1908).

13. Denicës, Réactions différentielles du scatol et de l’indol (CG. R. Soc. Biol., p. 689, 1908).

Cette réaction avec la vanilline avait déjà été indiquée par Ronve (15) et par Sreensma (52).

tion d’acide chlorhydrique, on obtient une teinte orangée, puis rouge orangé, lorsqu'on a ajouté environ 2 ©. c. à d'acide. À ce moment, la chaleur n'a presque plus d’action sur l'intensité de la teinte.

Comme avec le réactif d'Ehrlich, les colorations diffèrent un peu, suivant le dissolvant de l’indol; les teintes sont plus belles en solution alcoolique où en solution éthérée qu’en solution aqueuse; mais, dans tous les cas, elles se foncent en vieillissant.

b) Avec l'aldéhyde cinnamique. — En substituant à la solution de vanilline une solution d’aldéhyde cinnamique de même titre et en opérant dans les mêmes conditions que ci-dessus, on obtient une teinte jaune rouge qui paraît se produire plus lentement qu'avec la vanilline, si la solution d’indol est étendue.

4° RÉAGTION AVEC LE FURFUROL. — Nous avons essayé la réaction du furfurol en solution alcoolique à 1/50, préconisée par Escallon et Sicre (14) pour la recherche de l’indol dans les cultures.

À 10 centimètres cubes de la solution d’indol, on ajoute 2 à 3 centimètres cubes de la solution de furfurol, on agite, puis on ajoute de l’acide chlorhydrique goutte à goutte, jusqu'a ce que la coloration Jaune orangé formée cesse de s’accentuer. Elle se fonce rapidement et devient brun verdâtre très intense.

5° RéacrTions NOUvELLES. — Denigès (13), après d’autres auteurs, a signalé qu’en présence d’acide chlorhydrique, un grand nombre de composés orga-

14. EscazLox et Sicre, Recherche de l'indol dans les cultures à l’aide du furfurol (C. R. Soc. Biol., p. 507, 1908).

Enr ree niques se condensaient avec l'indol pour donner des matières colorantes. « De ce nombre sont surtout les aldéhydes aromatiques et furfuroliques, ainsi que les dérivés propényliques ou allyliques. »

Nous avons alors dirigé quelques recherches dans cette voie. En voici les résultats :

Les aldéhydes que nous employons sont toujours en solutions alcooliques; notre solution d'indol est à 1 pour 1.000.

a) La p.-diéthylaminobenzaldéhyde. — Avec la p.-diéthylaminobenzaldéhyde, nous obtenons des réactions identiques à celles que nous a donné le réactif d'Ehrlich.

b) L’o.-nitrobenzaldéhyde. — La solution d’o.-nitrobenzaldéhyde donne une très belle coloration rouge qui ne varie pas sous l'influence d’une grande quantité d'acide chlorhydrique. La réaction semble très sensible; mais avec une solution alcoolique d'indol à 1 pour 1.000.000, on obtient une coloration jaune et non pas rouge.

c) L’aldéhyde valérianique. — Cette aldéhyde donne une coloration rose violacé, augmentant beaucoup d'intensité par la chaleur et devenant rouge.

d) L'aldéhyde butylique normale. — Avec l’aldéhyde butylique normale, la coloration est également rose violacé; mais elle apparait lentement avec un peu d'acide chlorhydrique, et, si on ajoute beaucoup d'acide, elle disparaît lentement. Au bout d’un certain temps, elle disparaît, même si l’on n’a pas ajouté un grand excès d'acide.

Par la chaleur, la coloration rose devient orangé

Re assez foncé. Cette couleur ne disparaît plus sous l’action de l’acide.

e) L'aldéhyde éthylique. — Avec l'aldéhyde éthylique, on obtient encore une coloration rose violacé, devenant orangée par la chaleur.

f) Le pipéronal. — Le pipéronal donne une coloration rouge orangé très intense ne paraissant pas augmenter par la chaleur. L’acide chlorhydrique en excès ne fait pas disparaître la coloration. Cette réaction est assez sensible.

g) La benzaldéhyde. — Avec la benzaldéhyde, on a des résultats qui diffèrent des précédents. La coloration à froid est rose violacé, avec une faible acidité ; elle passe au jaune (trouble) si l’on ajoute davantage d'acide. Sous l’action de la chaleur, elle devient d’un beau vert.

h) L'aldéhyde cuminique. — On obtient avec l'aldéhyde cuminique une coloration violette, s'il y a peu d'acide chlorhydrique; lorsqu'on augmente la quantité d'acide, la coloration devient orangée, puis rouge orangé, et le liquide se trouble.

i) Le citral. — Le citral donne une coloration orangée à reflets violacés, si l’on ajoute peu d’acide; lorsqu'on en augmente la quantité, la coloration change un peu et le liquide se trouble légèrement.

Rohde (15) avait antérieurement étudié les réactions des aldéhydes avec les matières albuminoïdes en pré-

15. Roupr, Die Farbenreaktionen der Eiweisskôüpper mit p.dimethylaminobentaldehyd und anderen aromatischen Aldehyden (Zeit. f. Physiol. ch., 44%, 161, 1905).

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sence de l'acide chlorhydrique. Ce sont à peu près les mêmes que nous avons obtenues avec l'indol. Avec l'aldéhyde salicylique, la coloration est rouge ; avec l'aldéhyde gentisique, elle est bleue. Rohde mentionne la pureté et l’intensité des colorations obtenues avec la p.-diméthylaminobenzaldéhyde, la vamillhine et la nitrvobenzaldéhyde. .

Fleig (16), en plus des réactions que nous avons étudiées, signale la coloration orange obtenue avec l’aldéhyde anisique et la coloration rouge éosine que donne l’aldéhyde protocatéchique.

6° RéacTioN DE KONTO (17) AVEC LA FORMALDÉHYDE. — En ajoutant un peu de formol du commerce à une solution d'indol, puis, après avoir fait le mélange, de l'acide sulfurique concentré, on obtient une coloration rouge violet.

Avec l’acide chlorhydrique, nous avons obtenu une coloration rosée qui devenait rouge par ébullition du mélange.

De ces observations, nous pouvons conclure : 1° Que les colorations données par les aldéhydes aromatiques sont ordinairement plus vives que celles qui sont obtenues avec les aldéhydes grasses, et 2° que l’indol peut servir de réactif général des aldéhydes (18).

16. FrriG, Réactions colorées du tryptophane, de l'indol, du pyrrol, du thiophène et du carbazol avec les aldéhydes aromatiques. Leur relation avec les aldéhyd-réactions des albuminoïdes (CG. R. Soc. Biol., juillet 1908).

17. Kowro, Ueber eine neue Reaktion auf Indol (Zeitsch. f. Phys.chem., 1906).