Gorrer et DE Graar, C. R. Soc. Biol., p

21. BeLa pe Birro, Ueber das Nitroprussidnatrium als Reagens auf Aldehyde und Ketone (Ann. der Chem., 269, 1892).

Sazxowski {Z. f. Physiol, ch., 8, 447, 1883-1884), bien avant lui avait observé qu’en versant quelques gouttes de soude diluée

on

même réactif que Legal pour rechercher l’acétone : le nitroprussiate de soude. D'après Denigès (22), onarrive à déceler 1 milligramme d’indol dans 1.000 grammes d'eau, si on a soin d'ajouter par centimètre cube de solution d’indol, une goutte de nitroprussiate à 5 pour 100 et une goutte de lessive des savonniers. La coloration rouge obtenue n’est pas stable, mais elle le devient en passant au bleu céleste par addition d'acide nitrique à saturation.

9° RÉACTIONS DIVERSES. — Le copeau de sapin ou le copeau de hêtre chlorhydriques, l’eau de chlore, l'isatine donnent une coloration rouge, l’alloxane une coloration vert émeraude, en milieu sulfurique.

Le réactif d'Hopkins et Cole (23) — acide glyoxylique en présence d'acide sulfurique — donne une coloration rouge groseille intense.

dans une solution aqueuse d’indol additionnée préalablement de quelques gouttes de nitro-prussiate il se produisait une belle coloration violette qui virait au bleu par l'acide acétique.

22. DEnIGÈS, Sur la recherche de l'indol par le réactif de Legal /C. R. Soc. Biol., p. 295, 1908).

23. FceiG, Les réactions furfurolique et glyoxylique des protéiques et du tryptophane, appliquées à l’indol, au pyrrol, au thiophène et au carbazol (C. R. Soc. Biol., p, 283, 1908).

CHANDELRR ENT

Technique à suivre pour déceler de très petites quantités d'indol. — Les réactions avec les aldéhydes que nous avons signalées dans le chapitre précédent doivent être faites par superposition quand il s’agit de déceler de très petites quantités d'indol.

Voici comment il faut procéder :

Dans un tube à essai, on ajoute une petite quantité du réactif à la liqueur dans laquelle on soupçonne la présence d'indol, puis à l’aide d’une pipette effilée, on fait arriver à la partie inférieure de l'acide chlorhydrique pur. À la surface de séparation, s'il y a de l’indol, on voit se former un mince anneau coloré, anneau qui s’épaissit si l’on agite légèrement. Il est bon d'observer sur un fond blanc.

Sensibilité de quelques réactifs. — En opérant ainsi avec des solutions d’indol à divers titres, nous sommes arrivé à conclure que la sensibilité du réactif au pipéronal et du réactif à l’o.-nitrobenzaldéhyde est de 1/1.000.000, alors que la sensibilité du réactif d'Ehrlich et du réactif à la vanilline est de 1/5.000.000.

D'après Gôrter et de Graaf (19), la sensibilité du

nie réactif à la #-naphto-quinone monosulfonate de sodium est de r/8.000.000. Herter et Foster admettent qu'avec 1/1.024.000 d'indol, le chloroforme ne se colore plus en rouge.

Sicre (24) indique que la sensibilité du réactif à la vanilline, à l’aldéhyde cinnamique ou à la p.-diméthylaminobenzaldéhyde est de 1/2.000.000.

D'après Bôhme (10), le réactif d'Ehrlich permet de déceler 1/1.000.000 d’indol; d’après Crossonini (11), 1/5.000.000. C'est celte dernière limite que nous avons assignée au réaclif. Gürter et de Graaf (19), Denigès (13) prétendent que la sensibilité va jusqu'à 1/10.000.000. D'après le dernier auteur, le réactif à la vanilline serait aussi sensible,

Nous n’avons pu avoir une réaction posilive avec des solutions alcooliques d’indol aussi diluées. Avec une solution aqueuse d’indol à 1/5.000.000, nous n'avons rien eu avec le réactif d'Ehrlich, tandis que le réactif à la vanilline avait donné un anneau saumon très peu marqué, il est vrai, et d'interprétation hasardée.

En solution alcoolique, cette dernière réaction est un peu plus visible; celle d'Ehrlich est encore sur la limite de l’invisibihté. Il est, du reste, bien inutile d'insister sur cette extrême sensibilité. Nous verrons, dans le chapitre suivant, que, par un artfice très simple, 1l sera toujours possible de déceler l’indol même lorsque le taux de sa solution primitive est inférieur à celui qu'indiquent les auteurs les plus optimistes.

24. Sicre, Comptes rendus de la Soc. de Biol., t. 67, p. 76, 10 juillet 1909. |

ee

Choix d’un réactif. — Nous avons donc à notre disposition deux réactifs aussi sensibles, aussi maniables et donnant des résullats aussi immédiats. Quel est celui que nous emploierons ?

Les Leintes que l’on obtient avec la p.-diméthylaminobenzaldéhyde se modifient, tandis qued’après Buard(25) la vanilline donnerait une coloration qui reste stable. Il n’en est rien.

Nous choisirons donc la réaction qui permet d’obtenir la couleur la plus vive, la plus facilement appréciable. « Il faut, lorsqu'on a le choix, laisser de côté les réactions qui s’'accompagnent de la production de couleurs que j'ai souvent qualifiées de « bâtardes ». C'est ainsi que je désignais plus particulièrement les teintes jaune pâle, jaune-orangé, jaune-brun, rouge-brunâtre. » (Prof. PorcHer).

Si l’on opère avec des solutions d’indol relativement concentrées, 1lest bien difficile d’avoir une préférence, puisque les deux réactifs donnent, après agitation, de très belles teintes; mais lorsqu'il s’agit de solutions très étendues, la vanilline produit une couleur saumon, bien autrement moins vive que la couleur rose violacé donnée par la p.-diméthylaminobenzaldéhyde dans les mêmes conditions.

Etude spéciale du réactif d'Ehrlich. -- C’est donc le réactif d'Ehrlich que nous emploierons dans nos recherches ultérieures. Du reste, ce que nous

25. Buarp, Recherche de l’indol dans les cultures /C. À. Soc. Biol,, p. 150, 1908).

PET us allons dire ausujet de la p.-diméthylaminobenzaldéhyde s’applique très bien à la vanilline.

Pour avoir les meilleurs résultats possibles, il faut opérer dans des conditions particulières, et ces conditions s’imposeront chaque fois que l’on voudra faire une analyse quantitative.

Pour une simple recherche d’indol, il faudra toujours procéder, comme nous l'avons indiqué plus haut, par superposition et par examen sur un fond blane. On pourrait cependant, dans le cas de solutions étendues d’'indol, mélanger l'acide, la liqueur et le réactif, à la condition toutefois de rassembler la couleur obtenue dans un solvant approprié.

Solubilité de la substance colorante. — Nous avons constaté que cette couleur est insoluble dans l’éther ordinaire et dans l’éther de pétrole, dans le tétrachlorure et dans le sulfure de carbone, dans le benzène et dans le xylol. Elle est dissoute par l’eau, l'alcool éthylique, le chloroforme, l’alcool amylique.

L'alcool éthylique, qui est miscible à l’eau, ne peut être employé pour extraire la couleur.

Le chloroforme la dissout plus ou moins facilement, suivant le degré d’acidité de la liqueur; il reste même incolore s’il y a trop d’acide.

Quant à l'alcool amylique, il n'est pas à recommander parce qu'il donne lui-même une réaction très nette avec le réactif d'Ehrlich (26). Avec un alcool amylique destiné à l'usage courant du laboratoire,

26. Porcuer, Communication à la Section lyonnaise de la Société chimique de France, 12 mars 1910.

nous avons obtenu une coloration fugace ; avec un autre alcool pur, exempt de furfurol, elle était persistante. Il ne faudra donc pas perdre de vue ces considérations si l’on veut rassembler la matière colorante.

Pour déceler l'indol dans des solutions aqueuses excessivement étendues, le mieux est d’agiter le liquide avec de l’éther ordinaire une ou plusieurs fois, de concentrer l'extrait éthéré, puis de faire la réaction par superposition comme nous l'avons indiqué. Dans ces conditions, le réactif d'Ehrlich décèlera nécessairement des quantités infinitésimales d’indol.

Recherche de l’Indol dans un milieu complexe.— Les recherches que nous avons faites jusqu’à présent n’ont porté que sur une solution pure d’indol. Si nous nous trouvions en face d’un liquide complexe, la réaction d’'Ehrlhich nous donnerait des indications évidemment utiles, mais d'interprétation difficile, puisqu'elle n’est pas spécifique de l’indol. Ce corps n'est, en effet, pas le seul à donner une réaction colorée avec la p.-diméthylaminobenzaldéhyde. Elle se produit aussi avec la phloroglucine {15 et 27), la phénylméthylpyrazoline (15), l’urobilinogène (15), l'hémopyrrol (15), l’acétylglucosamine (15), l’orcine (27), le pyrrol(16), le thiophène (16), le carbazol (16).

Sur quoi nous baserons-nous donc pour établir péremptoirement la présence de l’indol ?

27, Cl. Gaurier, Réactions de la phloroglucine et de l’orcine avec la p.-diméthylaminobenzaldéhyde en présence de l'acide chlorhydrique pur (C. R. Soc. Biol., 23 mai 1908).

nr

Analyse spectroscopique du milieu.— L’ana-

lyse spectroscopique peut-elle dans ce cas donner des résultats exacts ?

Denigès (13) indique pour son réactif à la vanilline

un spectre d'absorption dont nous reproduisons di-

vers aspects correspondant à des concentrations diffé-

rentes (a).

RTL

Le même auteur prétend (13)que la réaction d’Erhlich donne un spectre présentant trois bandes, comparables aux deux spectres de l’urobiline et de l’hémochrogène superposés.

Nous n'avons pu apercevoir ces trois bandes et nous donnons différents aspects du spectre tel que nous

(a). Le n° 5o correspond à la raie D du spectre.