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l'avons vu avec deux bandes seulement, la deuxième beaucoup moins nette que la première.

Ces deux spectres se constatent également avec les solutions chloroformiques ou amyliques.

Comme nous l'avons déjà indiqué, l'alcool amylique donne une coloration avec le réactif d'Ehrlich; il en est de même avec la vanilline, mais dans l’un ou l’autre cas l'examen du spectre de la couleur caractéristique due à l'indol n’en est pas troublé.

Les corps à noyau tryptophanique donnent non seulement la réaction d'Ehrlich, mais aussi les mêmes bandes spectrales. Il en est de même pour la phloroglucine et l’orcine (27). La caractérisation spectroscopique de la couleur due à l’indol est donc impossible.

Ce n’est, 1l est vrai, qu'une impossibilité théorique, tout au moins pour ce qui concerne la phloroglucine et l’orcine, car pratiquement ces corps manquent là où l’on est susceptible de rencontrer de l’indol.

Caractérisation de l’indol par sa transfîformation en indigo. — Pour établir un diagnostic rigoureusement scientifique, nous aurons recours à l'excellente méthode de M. le professeur Porcher (28). Nous ferons un extrait éthéré que nous évaporerons très lentement ; nous reprendrons le résidu par quelques gouttes d’eau, puis nous ajouterons un volume égal de perhydrol de Merk (eau oxygénéeà 100 volumes). Nous porterons au bain-marie, et quand la liqueur sera

28. Porcuer, Action de l’eau oxygénée sur l'indol (Bull. de la Société de Chimie, p. 229, 1908).

Lars is jaune verdätre, c’est-à-dire quand lindol sera transformé en indoxyle, nous ferons un extrait avec l'alcool amylique; nous le laverons à l’eau, puis nous ajouterons quelques gouttes de lessive alcaline. Après agitation, le liquide deviendra bleu par suite de la formation d'indigo.

Analyse quantitative de l’indol. — L'indo étant reconnu, il est tout à fait logique de penser que la belle teinte donnée par le réactif d'Ehrlich puisse servir à un dosage colorimétrique, si toutefois l’on tient compte des proportions relatives d'acide chlorhydrique, de p.-diméthylaminobenzaldéhyde et de solution d'indol.

En effet, 1l est facile de remarquer que si l'acide chlorhydrique est nécessaire pour produire la coloration et l’aviver, il n’en est pas moins vrai qu'un excès de cet acide détruit la coloration obtenue. Il était donc indispensable, comme l’a déjà signalé M. le professeur Porcher (29), de déterminer les quantités optima des corps entrant dans la réaction.

Détermination des quantités respectives d'acide et de réactif qui doivent entrer en jeu. — Dans ce but, nous avons préparé une série de tubes contenant la même quantité de solution aqueuse ou alcoolique d’indol (1/2 centimètre cube de solution à 1 pour 1000), puis nous avons ajouté dans chacun

29. Porcarr, Communication à la Section lyonnaise de la Société chimique de France, 5 janvier 1911.

nt — d'eux la même quantité de réactif et nous avons fait varier les proportions d’acide chlorhydrique. La quantité optimum d'acide est de o cc. 24 pour o cc. 20 de réactif et o cc. 5 de solution d’indol. En partant de ces données, nous avons fait des essais avec une solution d’indol dix fois plus étendue, la quantité de réactif augmentant régulièrement. Nous avons obtenu les meilleurs résultats en employant par centümètre cube de solution indolique o ec. 26 de réactif et o cc. 4 d'acide chlorhydrique. Ces proportions n'ont cependant rien d’absolu. Dans certains cas, on peut les faire varier sans que la teinte perde de son intensité. Néanmoins, il semble qu’elles peuvent s'appliquer

à la plupart des essais.

Inexactitude de la méthode colorimétrique telle qu elle a été employée. — En tenant compte de ces proportions, nous avons procédé à de très nombreux essais avec des solutions éthérées dans lesquelles entraient des parties aliquotes d’indol au préalable desséché dans le vide sous la cloche à acide sulfurique. Nous rendions la liqueur homogène par addition de quantités déterminées d’alcool éthylique à 95 degrés (o cc. 5 d’alcool par centimètres cubes de mélange).

Nous n'avons jamais obtenu des résultats exacts. Au colorimètre de Dubosq, la comparaison étant faite avec une solution étalon concentrée ou étendue, nous avons toujours eu des résultats ou trop forts ou trop faibles.

Nous n’avons pas fait d'essais avec la vanilline, pas plus qu'avec les autres aldéhydes. La condensation se

produisant dans les mêmes conditions, la réaction doit

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présenter les mêmes particularités. Malgré ces irrégularités, la méthode n’est pas à rejeter; on peut arriver à des approximations assez grandes en opérant

d'une façon un peu détournée.

Modifications qu'il faut apporter à la méthode colorimétrique. — La méthode que nous allons exposer paraîtra au premier abord assez compliquée. Elle est longue seulement.

Nous employons quatre burettes placées côte à côte.

La première B, contient la solution étalon obtenue en versant dans un volume déterminé d'éther un volume également déterminé de solution alcoolique d'indol bien titrée (30). Il est préférable d'employer une solution très étendue.

La deuxième B, contient la solution éthérée dans laquelle on doit doser l’indol.

La troisième B, contient de l’éther pur lavé à l’eau, à l'acide sulfurique, à la potasse et encore à l'eau.

La quatrième B,; contient le réactif ainsi composé :

Solution alcoolique de p.-diméthylaminobenzaldé-

hyde A5 pOurir00 ES NP OR Alcool ao idestés EN CREER Acide CHF INQUEN EE ER

30. N. d. l'A., 1] faut passer par l'intermédiaire de cette solulion alcoolique parce qu'une solution éthérée ne se conserve pas exactement titrée. Cette solution alcoolique devra être conservée dans un flacon en verre jaune, à l'abri de la lumière et surtout de l’action directe des rayons solaires, ceux-ci transformant rapidement l'indol. Il nous est arrivé de ne plus trouver traces d'indol dans des solutions qui étaient restées plusieurs jours sur notre table,

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Dans un tube on fait couler 5 centimètres cubes du liquide étalon et 6 centimètres cubes de réactif. On refroidit sous un filet d’eau et on agite légèrement.

On opère de même avec un autre tube en remplaçant la solution étalon par la solution à analyser B, de Utre x. S1 la teinte obtenue est plus foncée que la première, on verse dans un tube 2 ce. 5 du liquide B: et 2 ce. 5 d'éther, puis 6 centimètres cubes de réactif. 51 la teinte obtenue est toujours plus foncée, on mettra 1 cc. 25 de B;, 3 cc. 75 d’éther et 6 centimètres cubes de réactif. Si elle est encore plus foncée, on dilue la solution B> au 1/8° en prenant 1 partie de cette solution et 7 parties d’éther et on continue les opérations comme nous venons de l'indiquer.

Si, au contraire, la liqueur étalon était plus concentrée que le liquide à analyser, on ferait subir les diverses dilutions au liquide étalon.

Quand on arrive à des teintes à peu près identiques, on recommence la réaction avec les deux liquides et on porte sous le colorimètre.

Il est nécessaire de recommencer les opérations immédiatement avant de porter sous le colorimètre, parce que, après une exposition à la lumière d'une durée assez courte, la coloration peut changer.

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