CHAPITRE Il

Comment il faut opérer pour étudier le pouvoir indologène des microbes. — Pour déceler la fonction productrice de l’indol chez un microbe on le cultivera, d'après ce qui précède, dans une eau peptonée à 3 pour 100 faite avec de la peptone répondant aux trois essais que nous avons indiqués ou tout au moins aux deux premiers. En outre, il faudra la neutraliser. L’addition de phosphate, de nitrate ou de chlorure n’est pas indispensable : elle est utile dans certains cas, en particulier pour la culture du vibrion cholérique, comme nous le verrons dans le chapitre suivant.

Généralement, dès que la culture est louche (52), on

52. N. d. l'A. Si la réaction produite alors n’est pas très nette, on peut laisser une heure de plus à l'étuve et observer de nouveau. La quantité d'indol croissant, le résultat obtenu est rarement douteux.

Nous croyons intéressant de citer ici une note de M. le professeur Porcuer extraite des C. À. Soc. Biol., à la séance du 11 Mars 1911 :

« Les différents auteurs... ont généralement admis comme rapide l'apparition de l'indol au bout de trois ou quatre heures dans les cultures des microbes qu'ils étudiaient ; ils ne l’ont que très rarement signalée avant ce temps. Il était à priori vraisemblable qu'avec l'emploi d'un réactif aussi sensible que la p.-

= Gin

peut procéder à la recherche de l’indol en suivant exactement la technique que nous avons indiquée (p- 60). La couleur rouge violet observée à la surface de séparation de l’éther et de l'acide chlorhydrique n'apparaît pas immédiatement, sauf quand la quantité d'indolest grande, ce qui estle cas avec les cultures âgées

diméthylaminobenzaldéhyde, on mentionnerait la présence de l'indol dans les tout premiers moments du développement de la culture. C'est ce qu'il nous a été donné de constater avec certaines variétés de coli, microbe qui se prête admirablement à de telles recherches.

« Du col J. (collection de l’Institut Pasteur) est ensemencé dans une série de flacons contenant chacun 150 centimètres cubes d’une solution stérilisée et salée de peptone DErREsNE à 2 pour 100. Ces flacons avaient été préalablement placés à l'étuve pour qu'ils se mettent en équilibre de température avec celle-ci. En opérant de cette façon, il n’y a vraisemblablement pas cette mise en train qui doit être de règle quand le bouillon est d’abord ensemencé à la température du laboratoire pour être ensuite porté à l’étuve ; avec de telles conditions, il y a tout lieu de croire que le microbe se développe dans un milieu neuf, sans aucun retard.

« On sort une culture toutes les heures, jusqu’à la cinquième, c'est-à-dire jusqu’au moment où, d'accord en cela avec tous les auteurs, la présence de l’indol ne fait l’objet d'aucun doute. La culture refroidie est agitée trois fois avec 50 centimètres cubes d'éther ; les extraits éthérés sont rassemblés, puis lavés avec 5o centimètres cubes d’une solution de soude à 2 pour 100. {Nous avons indiqué, 1° partie, ch. w1, p. 43, que ce lavage ne doit pas être effectué.)

« Semblables opérations sont effectuées sur une solution peptonée témoin non ensemencée de façon à éliminer l'inconvénient qui pourrait résulter de la présence de très faibles traces d’indol dans la plupart des peptones commerciales.

« La méthode colorimétrique nous a donné, en prenant comme base des comparaisons, une solution préparée d’indol (o gr. 1 par litre d’éther) et en rapportant les chiffres à 1 litre de

A6 de plusieurs jours. Parfois on observe une couleur jaune verdàâtre due à un excès de p.-diméthylaminobenzaldéhyde, ou une couleur rougeâtre. Elles ne doivent pas être confondues avec la belle teinte que donne l’indol. Du reste lorsqu'on a observé une seule fois la réaction faite dans les conditions indiquées, 1l

est difficile de commettre une erreur.

Erreurs graves causées par les recherches faites directement avec l’eau peptonée. — On

culture les résultats suivants. (Pour le dosage colorimétrique nous renvoyons à la p. 37 de notre travail.) « Au bout d'une heure, on saisit donc très aisément la forma-

tion de l'indol :

QUANTITE D'INDOL

(en milligrammes)